| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Фитонциды >>>
|
 |
| Автор | Тема: Фитонциды | ||
|
Komax Пользователь Ранг: 7 |
 29.05.2004 // 11:16:03
Глубоко уважаемые аналитики не подскажите какую нибудь методику по определению серусодержащих аминокислот в настойке чеснока(количественный анализ) в ГФ смотрел уже |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
Artem Пользователь Ранг: 193 |
01.06.2004 // 10:32:20
Уважаемый Komax! Вас иснтересует какая-то конкретная аминокислота или весь профиль, который есть в чесноке? Некоторые серосодержащие аминокислоты можно определять напрямую, а некоторые после соответствующей дериватизации. Например, я определял аминоксилоты после дериватизации с динитрофторбензолом при рН 10 в системе: колонка - Hypersil ODS или аналогичная ПФ1: 0,01 М раствор ацетата амоония рН 6,0 уксусной кислотой - ацетонитрил (95-5) ПФ2: 0,01 М раствор ацетата амоония рН 6,0 уксусной кислотой - ацетонитрил (50-50) длина волны детектирования 360 нм скорость ПФ 1 мл/мин. Программа градиента в зависимости от определяемой аминокислоты. Попробуйте эту систему. Артем |
||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
01.06.2004 // 10:32:48
Существует, по крайней мере о которых я знаю, два проверенных метода определения серусодержащих аминокислот. Первый с хлормеркурибензоатом натрия , а второй с реактивом Эллмана. Выглядят они следующим образом : 1. метод с п-ХМБ натрия (Mr=379). Приготовление 0,0005 М раствора п-ХМБ - навеску реактива переносят в мерную колбу 25-50 мл с 10-20 мл воды, подщелоченной 2 н КОН. Затем рН раствора доводят до 7,6 (точно)р-ром соляной кислоты (0,5 н) и доводят до метки водой. Солянку следует добавлять по каплям энергично при этом перемешивая, чтобы не происходило выпадения ХМБ в осадок при локальном закислении. Раствор пригоден до появления осадка. Для определения концентрации полученного раствора ХМБ в две СФ-кюветы приливают по 2,8 мл 0,5 М р-ра хлорида калия (рН 7,6). В одну из кювет добавляют 0,05 мл р-ра ХМБ. Тщательно перемешивают содержимое пластмассовой палочкой и определяют оптическую плотность при 232 нм. Затем еще три раза добавляют по 0,05 мл р-ра ХМБ, каждый раз измеряя оптическую плотность при 232 нм. По полученным данным рассчитывают концентрацию по ф-ле : С=(А232*(2,8+V))/ (16900*V), где V - объем добавленного р-ра ХМБ. Собственно метода определения В две СФ кюветы наливают: в одну 2,8 мл 0,5 М хлорида калия (рн=7,6), в другую 2,8 мл разведенного 0,5 М хлоридом калия (до 0,85 мг/мл аминокислот) исследуемого раствора. Измеряют оптическую плотность при 250 нм. Затем в обе кюветы приливают по 0,02 мл раствора ХМБ. Содержимое перемешивают и через две минуты определяют оптическую плотность при 250 нм. Затем последовательно еще 5-6 раз добавляют по 0,02 мл раствора ХМБ, пока не будет достигнуто плато в приросте оптической плотности.Точка перегиба на графике зависимости (по Х - объем ХМБ, по Y -прирост оптической плотности) и будет той точкой эквивалентности, когда количество сульфгидрильных групп будет равно превратившемуся в меркаптид ХМБ. 2. Метод с реактивом Эллмана Реактивы: а).Фосфатный (или трис-HCL) буфер 10 мМ, рн=8,0 б).Исследуемый раствор с концентрацией аминокислот (30-70 мкМ) в вышеописанном буфере с 1 мМ ЭДТА. с).ДТНБ (дитиодинитробензойная к-та) реактив Эллмана. 10 мМ раствор в вышеописанном буфере. В СФ кювету вносят испытуемый раствор и добавляют 5-10 кратный молярный избыток раствора ДТНБ. Полученную смесь перемешивают и через 10 минут измеряют оптическую плотность при 412 нм. Спустя 30 минут проводят повторное определение оптической плотности , используя в качестве контрольного раствор,содержащий раствор ДТНБ и буфер вместо испытуемого раствора в таких же соотношениях. Аналогично проводят реакцию с стандартом (метионин, цистеин) для построения калибровки. |
||
|
Komax Пользователь Ранг: 7 |
02.06.2004 // 17:39:10
Меня интересует весь профиль. |
||
|
zep Пользователь Ранг: 9 |
07.11.2004 // 14:11:28
уважаемый Artem! может быть, Вам известно что-нибудь о хранении динитрофторбензола? у меня похожая методика (определяем метионин) и в последнее время интенсивность поглощения упала в 3 раза. реактиву (ДНФБ) уже года 2, хранится в темноте. Это может быть связано с превращениями ДНФБ или дело в чем-то другом? |
||
|
Artem Пользователь Ранг: 193 |
08.11.2004 // 10:42:22
Вообще-то сам ДНФБ хранится в темноте и, желательно, при температуре не выше +10 грдС. При других условиях он может как разлагаться, так и образовывать димер. В таких случаях его можно перекристаллизовать из спирта. Что же касается получения производных - внимательно посмотрите методику. Может быть не соблюли рН или температуру реакционной смеси. Если тут все правильно, то попробуйте перекристаллизовать ДНФБ и работать со свежеприготовленным реактивом. Хотя по своему опыту знаю, что изопропанольный раствор ДНФБ в холодильнике храниться до 1 года, и его реакционная способность не уменьшается. Артем |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
zep Пользователь Ранг: 9 |
08.11.2004 // 18:31:23
Artem, спасибо огромное за ответ... Проблему уже решили - нашли более новый реактив. А тот приехал из Америки внутри фломастера в баночке  )) но до этого работал..
|
||
|
Artem Пользователь Ранг: 193 |
08.11.2004 // 18:38:35
Перекристаллизуйте из спирта и пользуйтесь. Он не должен испортиться. |
||
|
Nanazha Пользователь Ранг: 1 |
 21.10.2005 // 15:22:10
Добрий день!Скажите,пожалуста,какие есть методи идентификации и качественного определения аллиина в настойке чеснока?Большое Вам спасибо! |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 8 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
