| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Колонка Atlantis С18 (Waters) - анализ аминов ВЭЖХ-МС (кто работал на такой колонке?) >>>
|
 |
| Автор | Тема: Колонка Atlantis С18 (Waters) - анализ аминов ВЭЖХ-МС (кто работал на такой колонке?) | ||
|
AA_Alex Пользователь Ранг: 372 |
 23.04.2007 // 14:31:28
Редактировано 2 раз(а) Уважаемые форумчане, Очень нужен совет. Я занимаюсь анализом биогенных аминов у дрозофилы. Успешно меряем дофамин и тирозин (ВЭЖХ-УФ, гептилсульфонат, фосфатный буфер – ацетонитрил 3-5%, С18 колонка). Сейчас стоит задача померить октопамин (1-(4-гидроксифенил)-2-аминоэтанол). Для приготовления образца муху гомогенизируют в 50 мкл 0.1М HClO4, по данным литературы в таком экстракте 0.2-0.5нг октопамина (измеряли с электрохимическим детектором), т.е. 4-10нг/мл. Попытался концентрировать экстракт из 20-30 мух методом ТФЭ на патронах Oasis-MSX. К сожалению, концентрируется практически все, что проэкстрагировалось. В области, где должен быть октопамин, выходят 2 достаточно больших пика. Пробовал предварительно чистить образец на кислой окиси алюминия (на нее сорбируются катехоламины, но практически не сорбируется тирозин и октопамин, проверял на стандартах), эти зловредные пики уменьшаются раза в 3, но не уходят. Перепробовал разные режимы (менял рН, процент ацетонитрила, брал смесь ацетонитрил:метанол), но растащить мешающие пики с октопамином не удается. Видимо, задача решается только при использовании электрохимического детектора или МС. Электрохимического детектора у нас нет, но есть выход на ВЭЖХ-МС. Соответственно, нужна специальная колонка. К сожалению, имею неудачный опыт с колонкой Primesep200 от Sielc. Я в 2005г. купил такую колонку (3.2х150мм) через их представителя в Уфе. К сожалению тогда у меня ничего не вышло еще на этапе отработки метода с обычным УФ-детектором. Даже не удалось получить такой картинки, как у них на сайте www.sielc.com/application_044.html даже со стандартами 100мкг/мл (я брал ДОПА, тирозин, октопамин, дигидроксибензиламин и дофамин). Пики получались очень маленькие (площади примерно такие, как у меня были со стандартами 1мкг/мл на обычной С18 колонке в ион-парном варианте. Октопамин вообще выходил корявым и горбатым пиком. То есть, если я правильно понимаю, если стандарт с высокой (100мкг/мл) концентрацией на УФ еле виден, то при концентарции 0.1-0.2 мкг/мл его даже на МС видно не будет? То есть с колонки выходит только небольшая часть вещества, а основная часть продолжает там "сидеть"? Поскольку сейчас измерение октопамина стало первоочередной задачей, надо искать подходящую колонку. На waters.ru нашел рекламу Atlantis’а (там на этой колонке в системе ацетет аммония:ацетонитрил, градиент от 0 до 15% за 15мин делили смесь из 10 биогенных аминов), однако, после неудачи с Праймсеп, хочу предварительно посоветоваться со знающими людьми, а где еще это можно сделать, кроме ANCHEM.RU  ! Буду очень благодарен за любые советы и рекомендации.Извините за излишне подробный пост. С уважением, Александр |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
Farma Пользователь Ранг: 382 |
24.04.2007 // 15:20:52
Мы анализировали биогенные амины (в том числе и октопамин). Основная задача заключалась в разделении октопамина от норэпинефрина и эпинефрина (ох, и намучались мы). Но мы для этого использовали две разных колонки: Cosmosil и Purospher. Обе С18, вторая дешевле и форма пиков получше. Если нужно, скину наши условия анализа и примеры хроматограмм. |
||
|
АлаЯ Пользователь Ранг: 80 |
25.04.2007 // 11:10:32
Мы сейчас успешно работаем с колонкой Atlantis C18 в режиме ВЭЖХ с амперометрическим детектором. Правда октопамин мы не определяем, у нас задача определения дофамина, нарадреналина и адреналина в плазме крови. |
||
|
AA_Alex Пользователь Ранг: 372 |
25.04.2007 // 11:46:26
Уважаемая АлаЯ, если не трудно, скажите, какую Вы используете подвижную фазу и какие пределы обнаружения? Заранее благодарен, Александр. |
||
|
AA_Alex Пользователь Ранг: 372 |
25.04.2007 // 12:02:23
Уважаемый Farma, буду благодарен, если скините информацию на alexb954{coбaчkа}mail.ru У меня нет проблемы с разделением октопамина от НЭ и Э, на стандартах они прекрасно делятся на самой обычной (и, по-видимому, самой дешевой из аналогов) Биохиммаковской колонке С18 Диасфер (если нужно, могу скинуть подробности). У меня проблема в том, что в ион-парном режиме я не могу растащить октопамин и два достаточно больших пика, которые выходят в той же области. Поэтому я хочу попробовать мерить октопамин на ВЭЖХ-МС (электрохимического детектора у нас нет, и пока не ожидается, с ним бы, наверное, этой проблемы не было). Для МС нужна колонка, типа Атлантис, чтобы работать без буфера и ион-парного реагента. Спасибо за ответ, с уважением, Александр |
||
|
АлаЯ Пользователь Ранг: 80 |
25.04.2007 // 12:59:57
Дико извиняюсь, ошибочка вышла, мы работаем на колонках Ascentis!!! Используем достаточно сложную п.ф.: Дигидрофосфат натрия, ДДСН, уксусная к-та, ацетонитрил, ЭДТА, рН 4 С ВЭЖХ-МС не работала, работала с системой капиллярного электрофореза КЭ-МС. Тоже определяли катехоламины. |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
Vlad Orlovsky Пользователь Ранг: 60 |
25.04.2007 // 15:43:59
Привет Александр, Извини что не ответил тебе сразу. По какому телефоны можно тебе позвонить? Я хотел бы обсудить твои результаты на нашеи колонке (Праимсеп). Напиши когда лучше позвонить Влад |
||
|
AA_Alex Пользователь Ранг: 372 |
26.04.2007 // 17:23:24
Уважаемый Влад, по телефону неудобно (учитывая большую разницу во времени), лучше на е-мейл alexb954{coбaчkа}mail.ru или alekseev{coбaчkа}nioch.nsc.ru Александр |
||
|
Pavel Пользователь Ранг: 81 |
27.04.2007 // 18:48:20
Уважаемый Александр, года два назад я пытался использовать колонку C18 Atlantis для разделения и анализа эпинефрина и норэпинефрина. Необходимо было провести следовой анализ в клеточной культуре, поэтому я сразу работал с МС детектором. Первоначально я пробовал использовать изократический метод, приведеный на сайте Waters, но к сожалению он рассчитан на UV детектор, так как ацетат аммония в мобильной фазе вызывает значительное подавление сигнала электроспрея, даже при разбавлении буфера до 1 mM. Хороший сигнал получился при переходе на 0.1 % уксусную кислоту (вода-ацетонитрил). Предел обнаружения был порядка 0.1 нг/мл при заколе 10 мкл (MRM режим детекции). Возможно наблюдаемая мной ионизация специфична для типа прибора (я работал на Waters), но эпинефрин и норэпинефрин в ионом источнике легко теряют воду и доминантными сигналами являются [M-H2O+H], а не [M+H], видимо засчет формирования стабильного бензильного катиона. Качество хроматографии было удовлетворительным, но время удерживания было очень маленьким даже с 2 % ацетонитрила и пики были с "с хвостами" (что можно увидеть и в методе Waters, если присмотреться внимательнее, так как хроматограмма там растянута на 20 мин). После предварительных экспериметнов я не дошел до анализа реальных образцов, так как необходимость пробоподготовки охладила пыл заказчика. Не могу сказать, чтобы я был в восторге от колонки Atlantis применительно к этому методу, но как то она сработала. Но в целом колонка хорошая, в хозяйстве пригодится Все таки попробуйте еще раз колонку Primesep 200 с МС детектором, но замените TFA из приведенного вами метода на муравьиную или уксусную кислоту, так как TFA вызывает значительное подавление сигнала электроспрея.
|
||
|
AA_Alex Пользователь Ранг: 372 |
28.04.2007 // 7:37:00
Уважаемый Павел, большое Вам спасибо за подробную информацию, думаю она будет нам очень полезна. Если не затруднит, опишите, какую пробоподготовку, "охладившую пыл заказчика" Вы делали, так как нам тоже, по-видимому, придется это проходить. В первую очередь, по-видимому, экстрагировать из дрозофилы надо будет не хлорной к-той, а муравьиной? Правда я не уверен, что она будет осаждать белки. Впрочем, у меня есть патроны Оазис-МСХ, так что можно будет перерастворить образец уже после очистки. Попробую еще, конечно и с Праймсепом. Еще раз спасибо, С уважением, Александр. |
||
|
AA_Alex Пользователь Ранг: 372 |
02.05.2007 // 10:15:49
Уважаемый Влад, напишите свой е-мейл, я Вам скину свои контактные телефоны. С уваженеим, Александр |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 10 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
