Форумы ANCHEM.RU: Липиды. Идентификация триглицеридов

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Липиды. Идентификация триглицеридов >>>

  Ответов в этой теме: 26
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Липиды. Идентификация триглицеридов

OldBrave
VIP Member
Ранг: 1333

05.11.2008 // 10:44:01

Редактировано 1 раз(а)

Уважаемые коллеги!
Сейчас широко используются в анализе жиров методы AOCS Ce 5b-89 b Ce 5c-93. Оба метода основаны на разделении ВЭЖХ триглицеридов (ТАГ) на колонке с обратной фазой с применением в качестве элюента смеси ацетон-ацетонитрил с RI детектором. Однако, худо-бедно разделенные триглицериды в основном остаются не идентифицироваными.
Есть ли у кого предложения или, что еще лучше, решения проблемы надежной идентификации ТАГ при анализе методом ВЭЖХ, примеры такой идентификации для стандартных растительных масел?

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Алексей (СамГУ)
Пользователь
Ранг: 367

05.11.2008 // 14:53:58

OldBrave пишет:
Уважаемые коллеги!
Сейчас широко используются в анализе жиров методы AOCS Ce 5b-89 b Ce 5c-93. Оба метода основаны на разделении ВЭЖХ триглицеридов (ТАГ) на колонке с обратной фазой с применением в качестве элюента смеси ацетон-ацетонитрил с RI детектором. Однако, худо-бедно разделенные триглицериды в основном остаются не идентифицироваными.
Есть ли у кого предложения или, что еще лучше, решения проблемы надежной идентификации ТАГ при анализе методом ВЭЖХ, примеры такой идентификации для стандартных растительтных масел?

У SigmaAldrich можно закупить ряд триглицеридов с известным строением молекулы. Но лучше прежде чем покупать просмотрите литературу по вашим растительным маслам (конкретно каким?) J. of Chromatography A, это вам поможет закупить именно те стандарты которые нужны, так как они дорого стоят. Еще вариант более сложный: препаративно или на аналитической колонке (10-20 раз пропустить) отделить ваши триглицериды в чистом виде, далее гидролизовать их (1M KOH в метаноле) и определить жирные кислоты для каждого триглицерида (для ЖК кстати есть стандарты тоже и тоже не дешиво стоят). Еще как вариант отдать на ВЭЖХ-МС (в МГУ например).

OldBrave
VIP Member
Ранг: 1333

05.11.2008 // 15:43:14

Алексей (СамГУ) пишет:
У SigmaAldrich можно закупить ряд триглицеридов с известным строением молекулы. Но лучше прежде чем покупать просмотрите литературу по вашим растительным маслам (конкретно каким?) J. of Chromatography A, это вам поможет закупить именно те стандарты которые нужны, так как они дорого стоят. Еще вариант более сложный: препаративно или на аналитической колонке (10-20 раз пропустить) отделить ваши триглицериды в чистом виде, далее гидролизовать их (1M KOH в метаноле) и определить жирные кислоты для каждого триглицерида (для ЖК кстати есть стандарты тоже и тоже не дешиво стоят). Еще как вариант отдать на ВЭЖХ-МС (в МГУ например).

К сожалению, стандартные ТАГ как правило имеют в составе только один вид жирной кислоты (тристеараты, тримиристаты и т.д.). Что касается второго, то это не аналитика, т.к. "пропустить" 10-20 раз смесь из 50-200 и более ТАГ и затем метилировать каждый компонент, - это не реально. Есть другие, а не общие соображения?

Spectrometrist
Пользователь
Ранг: 777

05.11.2008 // 16:14:24

Редактировано 1 раз(а)

Я сразу извинюсь если ответ слегка не по теме.

Триацилглицериды отлично видны в електроспрей масс спектрометрии как аддукты с катионом аммония, или лития или натрия. Чутье сумашедшее, так что проблема не в том что их не увидеть, а так чтоб динамический диапазон не убило.

Масс спек померит точную массу и вы будете знать количество атомов углерода : двойных связей суммарно в трех цепях. Квантифицировать можно по однму или двум стандартам, допуская что они все ТАГ летят одинаково независимо от остатков жирных кислот.

Если делать МС/МС, жирные кислоты отваливаются параллельно со всех трех позиций и по разности масс можно понять какие они были и (в принципе) квантифицировать каждую форму. Т.е. в МС эксперимене вы определите что у вас , скажем 1 пмоль/мкл ТАГ 50:2, а в МС/МС что этот 50:2 сложен из, (например)

(18:1/18:1/14:0 , 75% и 16:0/16:1/18:1, 25%)

Но точную локализацию остатков (кто в какой точно позиции) на смеси изобарных ТАГ скорее всего не померить

Другое ограничение то что положение и конфигурацию двойной(ых) связи(ей) вы знать тоже не будете.

Если что, спрашивайте дальше, я набросал конспективно т.к. не уверен полезно ли это в вашем случае

hisamazu
Пользователь
Ранг: 707

05.11.2008 // 17:07:59

OldBrave пишет:
Уважаемые коллеги!
Сейчас широко используются в анализе жиров методы AOCS Ce 5b-89 b Ce 5c-93. Оба метода основаны на разделении ВЭЖХ триглицеридов (ТАГ) на колонке с обратной фазой с применением в качестве элюента смеси ацетон-ацетонитрил с RI детектором. Однако, худо-бедно разделенные триглицериды в основном остаются не идентифицироваными.
Есть ли у кого предложения или, что еще лучше, решения проблемы надежной идентификации ТАГ при анализе методом ВЭЖХ, примеры такой идентификации для стандартных растительтных масел?

Прошу прощения, если не пригодится. Про ВЭЖХ-таки не слышала, но скажем, ЯМР-спектрометры цис- и транс- изомеры в маргаринах вполне отличают и меряют отдельно (есть стандартные программы). Есть шанс, что их разработки в пищевой промышленности можно приспособить к Вашему случаю. Если нужны контакты в отечественных лабораториях- пишите, сообщу. hisamazu{coбaчkа}rambler.ru

OldBrave
VIP Member
Ранг: 1333

07.11.2008 // 10:52:25

Редактировано 9 раз(а)

Spectrometrist пишет:
Триацилглицериды отлично видны в электроспрей масс спектрометрии как аддукты с катионом аммония...
Масс спек померит точную массу и вы будете знать количество атомов углерода...
Если делать МС/МС...

Большое спасибо за наводку: LC/MSD, APCI, MS-MS, EICs и
М=218,03+28,03*m+26,02*n
Однако хотелось узнать об идентификации ТАГ ВЭЖХ без MSD.
Есть ли примеры идентификации ТАГ растительных жиров, разделенных на обратной фазе?

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Вольта, Научно-техническая фирма, ООО
ООО «Научно-техническая фирма «Вольта» разрабатывает и предлагает современные приборы для химического анализа и пробоподготовки к нему, а также приборы для научных исследований, которые успешно эксплуатируются в научно-исследовательских лабораториях НИИ и университетов, в промышленных, экологических и химико-технологических лабораториях крупных промышленных предприятий, в лабораториях водоканалов и ЦГиЭ.

Spectrometrist
Пользователь
Ранг: 777

07.11.2008 // 14:39:12

Редактировано 1 раз(а)

OldBrave пишет:

Большое спасибо за наводку: LC/MSD, APCI, MS-MS, EICs и
М=218,03+28,03*m+26,02*n

Вообще то ТАГ для меня сильно побочный интерес и я не в теме до деталей, но:

- я не в курсе как они себя поведут на APCI и как там оно будет с кластерами. Проверьте, на всякий случай, наверняка статей полно.

- я так понимаю что формула вверху считает что количество атомов углерода в жирных кислотах четное? - это не совсем так, а в некоторых организмах (детали в литературе) и совсем не так. В растениях, например, червях и бактериях branched chain fatty acids and odd numbered fatty acids просто полно

- в mammalians они тоже есть, но мало и не уверен что в ТАГ они заметны, но кто их знает. В фосфолипидах мы их видели

Я бы был поосторожней с этим, пару раз мы нажглись здорово, т.е. это все "обьективная реальность" а не экзотика.

Удачи!

Pavel
Пользователь
Ранг: 81

10.11.2008 // 6:10:07

Я не думаю, что у этой задачи есть простые решения особенно с использованием только ВЭЖХ. Достаточно много информации о разделении можно найти здесь (англ):
www.cyberlipid.org/acylglyt/acyl0006.htm
Вот пожалуй метод, который ближе всего к вашему решению, но с использованием двухмерной ВЭЖХ:
www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18062980?ordinalpos=1&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.Pubmed_RVDocSum

OldBrave
VIP Member
Ранг: 1333

11.11.2008 // 14:17:48

Pavel пишет:
Я не думаю, что у этой задачи есть простые решения...

Спасибо за ссылки! Двумерная ВЭЖХ - это та еще заморочка...

OldBrave
VIP Member
Ранг: 1333

11.11.2008 // 14:22:09

Spectrometrist пишет:

- я так понимаю что формула вверху считает что количество атомов углерода в жирных кислотах четное? - это не совсем так...

Спасибо! Полностью с вами согласен, часто встречается в составе ТАГ маргариновая к-та (С15:0).

lyo89
Пользователь
Ранг: 136

17.11.2008 // 12:12:23

OldBrave пишет:

Spectrometrist пишет:
- я так понимаю что формула вверху считает что количество атомов углерода в жирных кислотах четное? - это не совсем так...

Спасибо! Полностью с вами согласен, часто встречается в составе ТАГ маргариновая к-та (С15:0).

ЭЭЭ скорее 17:0.
Четное количество атомов в жирах животного/растительного происхождения объясняется биосинтезом через ацетилкоэнзимА(эт если я помню биохимию). Нечетное к-во атомов - в жирах микроорганизмов. Кстати - в молочном жире присутствуют кислоты с нечетным числом атомов - что объясняется наличием бактерий - симбиотов в их ЖКТ
ТАГ(сливочное масло, пальмя, кокос) успешно делятся по числу атомов углерода(смотрели до С54) ГХ(колонка 12-15 м 0,25 внутренний, фаза силикон 0,1 мкм, можно с фенилом, желателен сплитлес - он колумн - не пробовал).
Особенность ВАЖНАЯ - газ носитель - водород(это, почему то, не всех радует %-) )


Ответов в этой теме: 26 Страница: 1 2 3 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты