| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
ВЭЖХ: Метотрексат в плазме крови >>>
|
 |
| Автор | Тема: ВЭЖХ: Метотрексат в плазме крови | |||||
|
KseniyaZ Пользователь Ранг: 5 |
 10.11.2008 // 13:36:39
Добрый день! Я "новичок" на форуме. Почитала вопросы и ответы, понравилось, все очень дельно и ни один из вопросов не остается без внимания!! Я тоже с проблемкой. Оч. недавно начала заниматься ВЭЖХ анализом медпрепаратов в плазме, до этого делала анализ в растворах и проблемы, которые возникали, решались проще. Если кто-то может подсказать... Пытаемся количественно оценить Метотрексат в плазме пациентов, которые принимали этот препарат. Пробы (кровь) отбирали через определенное количество времени у пациентов. Короче, в плазме получаются заниженные концентрации Метотрексата, хотя стандарт замечательно "выходит" и дает симметричный пик, калибровка 0,998! Белок осаждаем трихлоруксусной кислотой в этаноле. ПФ: буфер+TRIS рН 5,7 : МеОН+МеСN 85:15, Kromasil. При других методиках пик не выходит вообще. Подозрение, что не правильно выделяем из пробы. Может кто сталкивался с этим препаратом? Чего не так делаем? |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
G.Baram VIP Member Ранг: 211 |
10.11.2008 // 13:47:26
Редактировано 1 раз(а) Здесь лежит кандидатская диссертация по определению лекарств (в том числе и метотрексата) в крови. В ней есть все необходимые Вам методики. Полезна будет и глава в книге (ссылка 69) на сайте: |
|||||
|
KseniyaZ Пользователь Ранг: 5 |
10.11.2008 // 15:04:29
Спасибо, уважаемый! Эту диссертацию мы уже наизусть выучили, банально, но нет на нее перхлората лития и никто нам его не купит!  Спасибо за помощь большое!
|
|||||
|
tired Пользователь Ранг: 110 |
10.11.2008 // 19:05:19
_________________ Сталкивался с подобной проблемой при анализе препаратов крови. Попробуйте следующее: 1. Использовать свежеприготовленные пробы (стандарта и препарата). 2. Попробуйте проанализировать содержание метотрексата в белковом осадке. 3. С чего вы вообще взяли что содержание мт заниженное? 4. Не могли ли вы "потерять" мт при получении плазмы? |
|||||
|
KseniyaZ Пользователь Ранг: 5 |
13.11.2008 // 16:32:28
Спасибо, советом воспользовались! Плазму готовим не мы, ее уже присылают на анализ. У нас в расоряжении только ВЭЖХ. Как можно проверить препарат в осажденном белке? О заниженных результатах говорит шеф и не принемает результат! |
|||||
|
KseniyaZ Пользователь Ранг: 5 |
13.11.2008 // 16:34:06
Простите, может глупость спрошу... Есть ли принципиальное отличие пробоподготовок сыворотки и плазмы и условий анализа ВЭЖХ? |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
aleks_s Пользователь Ранг: 24 |
13.11.2008 // 18:07:46
Так вы и градуировочные стандарты готовьте в плазме, матрица должна совпадать... |
|||||
|
tired Пользователь Ранг: 110 |
13.11.2008 // 20:14:56
При получении плазмы из крови пациентов ее отделяют скорее всего центрифугированием (осаждаются эритроциты). Вещество в крови (в вашем случае мт) могут быть связаны с эритроцитом или с альбумином. Ваше методика оправдана только в том случае если метотрексат связан с альбумином крови, иначе он осаждается с эритроцитами, но некоторое его количество все же присутствует в плазме - отсюда вы можете получать заниженные результаты. Второй вариант, если вещество связано с альбумином. В этом случае при осаждении белка (пробоподготовки раствора) вы можете осаждать и мт вместе с ним (также как и в первом случае ).Вот такие пирожки с котятами  Но, что самое интересное, возможно (и скорее всего) мт переносится и эритроцитами и в плазме крови (почитайте литературу). и, еще раз повторю возможно, вы теряете мт и на стадии получения плазмы и на стадии получения пробы из плазмы. Но для выводов необходимо знать насколько занижены у Вас результаты.Для получения сведений о мт в осадке: проведите многократную экстракцию избирательным для мт экстрагентом. Затем концентрируйте его, разбавляйте элюентом и в колонку. Но сначала поробуйте напрямую поработать не с плазмой - с кровью... При осаждении белка вашим раствором будет наблюдаться гемолиз эритроцитов - далее центрифугируйте и в колонку - посмотрите, изменятся ли результаты при таком раскладе.Далее вопросы: 1. У Вас получаются симметричные пики? 2. Как рассчитываете концентрацию? |
|||||
|
tired Пользователь Ранг: 110 |
13.11.2008 // 20:39:40
гы... стандарты в биоматериалах? свежую плазму? начальство жаба задушит)))) а консервированную использовать нельзя - цитрат там. может помешать. лучше изотонический раствор или просто воду на крайний случай - будет то же самое. |
|||||
|
aleks_s Пользователь Ранг: 24 |
13.11.2008 // 20:58:15
Готовя стандарты в плазме, вы и увидите есть ли препарат в осажденном белке, сравнив с вашими предыдущими калибровками и таким образом подтвердите результаты. |
|||||
|
tired Пользователь Ранг: 110 |
14.11.2008 // 7:53:10
Вы предполагаете, что при добавлении стандарта мт напрямую в плазму вы сможете смоделировать все связи с белком? а затем сравнить концентрацию стандарта в обычном растворе и концентрацию стандарта в плазме? Ввозможно, и стоит попробовать, НО пробы крови пациентов содержат уже не сам мт, а его метаболиты, и предсказать связывание метаболитов с плазмой вряд ли возможно... (сейчас пошел смотреть фармакокинетику мт - как что-то найду - отпишусь)
|
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
