| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
ВЭЖХ арахидоновой кислоты >>>
|
 |
| Автор | Тема: ВЭЖХ арахидоновой кислоты | |||||
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
 13.08.2009 // 23:05:46
Коллеги не подскажите где бы посмотреть УФ спектр арахидоновой кислоты и / или липидов, ее включающих? Хотелось бы прогнать пару стандартов с УФ детекцией чтобы соптимизироваться по колонке и подвижной фазе, прежде чем лезть на масс спек. Сравнительно низкое чутье не пугает. Я посмотрел несколько древних статей, методы очень невнятно описаны и вроде авторы брали 235 нм и (почему то) 280 нм, подозреваю это то что им давал детектор автоматом. Или не сомневаться и тупо лезть в короткие волны, типа 210 и меньше. Но не хотелось бы по многим причинам. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
13.08.2009 // 23:35:33
А на ДАДе запустить и "соптимизироваться"? Пути господни неисповедимы и заведомо дрянно поглощающие соединения вдруг начинают "светиться" при совершенно нормальных длинах волн. Во всяком случае, лучше, чем на достойных им коротких УФ. Очевидно, "имеет значение" чистота элюентов. Пример- артемизинин. Циклический сложный эфир, простая эфирная группа и перекисная. И ничего больше. Чему там поглощать? Выясняется, что эта штука лучше видна при 266 нм, чем при 205 или 220. Так что, "соптимизировать" можно даже на не очень чистых растворителях. Чувствительность- кака, конечно. Но 100 ррм увидит легко. Или тебе надо меньше смотреть? |
|||||
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
14.08.2009 // 0:37:21
У меня простенький УФ детектор без матрицы. Чисто вспомогательный, пользую только когда надо траблшутить хроматограф. |
|||||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
14.08.2009 // 1:55:27
Редактировано 1 раз(а) Думаю, с 234-235 нм не ошибетесь, видно будет. А почему не видите стандарт в LC-MS, мне не понятно. Мы эту кислоту не делали, но c EPA/DHA (омега-3) проблем не было. Отрицательный электроспрей, подвижная фаза ацетонитрил/вода с 0.01% уксусной кислоты на любой хорошей обращенке (для отделения от изомеров лучше всего дифенильные или бифенильные фазы). Если, конечно, Вам не нужны пг/мл, тогда без дериватизации не обойтись... Да, есть одно соображение... Прежде чем пытаться работать с отрицательной ионизацией, надо хорошо отмыться от малейших следов муравьиной и, особенно, трифторуксусной кислоты в системе (насосы, колонки, источник). Это может занять пару дней, прежде, чем получите приличный сигнал. |
|||||
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
14.08.2009 // 2:18:15
Спасибо! Тут все несколько запутаннее. Мне нужно посмотреть инозитолфосфаты природные и синтетические, в том числе с необычными кислотами. Покопавшись в литературе, увидел что народ заметил что хроматография работает на каких то колонках, но на большинстве нет, вроде как фаза глотате их безвозвратно (?!). Для анализа народ лезет в выский рН добавляя тонны аминов (казалось бы, зачем? они и так анионы даже при 5.0?). На прямом вводе мы видим что они пугающе легко колятся орифисной фрагментацией. Поскольку пугатся чужих призраков не хочется, я подумал, возьмем каие то стандарты (они продаются), там довольно много липидов с арахидоновой кислотой, она должна худо-бедно светить в УФ и посмотрим без масс спека чего происходит - слезают / не слезают, хвостят, есть ли память и т.д. Да, и нельзя ли как то без аминов в элюете. Стандарты (относительно) дешевы, так что грузить могу сколь надо. Отсюда вопрос по УФ. В интернете ссылок масса, но ясного спектра или хотя бы максимумов я не нашел, либо нужна подписка ня датабазы (ради одного то спектра?!). Вот, собственно, отсюда и вопрос Уточнение: а почему так мучительно отмываться от кислот? Какой-то 5-7 буфер "не спасет отца русской демократии"?. Кластеры в коротких массах мне не мешают, я глядеть то буду от 700 |
|||||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
14.08.2009 // 3:55:55
Не, с таким добром я не работал, только со свободными кислотами (или после омыления). Так что ничем помочь не могу, надо серьезно смотреть литературу. Одно могу сказать, что после метилирования диазометаном инозитолфосфаты будут, скорее всего, достаточно хорошо детектироваться в положительном APCI, но боюсь, это вас не устроит из-за сложности пробоподготовки. А TFA очень сильно глушит сигнал при отрицательной ионизации, поэтому для достижения хорошей чувствительности приходится долго отмывать, если перед этим с ней работал. Уксусная тоже глушит, но уже не так сильно, и 0.01% в подвижной фазе - тот разумный компромисс, при котором у карбоксикислот уже хорошая форма пика, но еще приличный отклик. С солями в ПФ сигнал обычно хуже. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
14.08.2009 // 4:14:26
Редактировано 1 раз(а) Посмотрел, ужаснулся: не завидую... Попробуйте запросить УФ спектр у этого поставщика: |
|||||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
14.08.2009 // 6:49:17
Так тут на форуме (года 3 назад) уже было обсуждение этой проблемы. Во всяком случае, как их разделяют на ВЭЖХ, эти фосфолипиды. Тут есть спецы на эту тему. Кажется, нужно не с поисков спектров начинать, а с поиска условий разделения. Они там достаточно непривычные. Если поиском пройтись? |
|||||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
14.08.2009 // 10:34:18
1. Снимите спэктр раствора стандарта АК просто на СФ (если есть, конечно). 2. Сделайте три вкола: 210, 220, 230 (235)нм. 280нм - мне кажется, явно не туда - ни разу не видел. Может люди примеси какие-либо еще смотрели? 3. Не понимаю зачем нужны тонны аминов - можно и по-другому изменить хроматографическое поведение. Конечно, надо конкретно по задаче смотреть. 4. С хроматографией, скорее всего, будут трудности. Я так понимаю, что конкретный "список" искомых соединений Вам неизвестен? |
|||||
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
14.08.2009 // 17:29:24
Облом. Коллеги нашли статью - рекомендую для архива: Quantitation of individual phospholipid molecular species by UV absorption measurements. McHowat J, Jones JH, Creer MH. J Lipid Res. 1996 Nov;37(11):2450-60. PMID: 8978496 Арахидоновая и ее липиды светят на 203 нм максимум, на 220 уже < 10%. И правда, двойные связи же там не кон'югированные (матчасть надо продолжать учить, увы), каждая светит за себя лично. Вполне реально работать на 210, но тогда и с буфером надо поаккуратней, никаких там формиатов / ацетатов Спасибо всем откликнувшимся! |
|||||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
14.08.2009 // 18:15:39
Вы (Islander научил, обижается на ТЫ  ) попробуй сначала. Ты чего такой простой-то, как 3 рубля мелочью? Верите всякой фигне. Не стоит так доверяться теории. В ВЭЖХ возможно все. Я тоже думал, что пероксиды фиг увидишь в УФ. Еще как видно! Не ррм, конечно, но видно. А чем мой артемизинин хуже твоей эйкозантетраеновой кислоты? Но его же тоже видно. (Ты знаешь, что такое артемизинин?) На крайний случай примени прием непрямой детекции, замени полярность на обратную и смотри себе ее на фоне поглощающего элюента. ЗЫ Ненавижу липиды и карбоновые кислоты, в частности. Сам не знаю, почему. А не проще устроить тотальный гидролиз и смотреть фосфатидилинозиты по собственно инозиту? |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
