Определение активности 11b -гидроксистероид дегидрогеназы с помощью ВЭЖХ

Тезисы VII конференции "Аналитика Сибири и Дальнего Востока - 2004" »
Устные доклады » Секция 5. Анализ биологических, медицинских и фармацевтических объектов » ...

Определение активности 11b -гидроксистероид дегидрогеназы с помощью ВЭЖХ

О.П.Черкасова

Институт лазерной физики СО РАН, г. Новосибирск, 630090, пр. Академика Лаврентьева 13/3, факс (383-2)332067, e-mail: fedlaser.nsc.ru

11b -гидроксистероиддегидрогеназа (11b -ГСД) – ключевой фермент, осуществляющий пререцепторный метаболизм кортикостероидных гормонов. Различные изоформы данного фермента солокализованы с глюкокортикоидными и минералокортикоидными рецепторами и обнаружены в печени, почках, жировой и других тканях. Нарушение в активности этого фермента приводит к возникновению и развитию различных видов гипертензии, ожирению, патологиям сердечно-сосудистой и центральной нервной систем. Исследования 11b -ГСД начались сравнительно недавно и для понимания механизмов его действия необходимо создание адекватных методов определения активности фермента в различных тканях. Таким образом, цель работы состояла в разработке методики определения активности 11b -ГСД в гомогенатах почек крыс.

Активность 11b -ГСД определяли следующим способом: 100 мкл гомогената коры почки крысы инкубировали 1 час при 37° С в присутствии 12 нМ кортикостерона, 1,5 мМ НАДФ в 0.1 М натрий-фосфатном буфере рН 8,5. После добавления 100 мкл ацетонитрила и центрифугирования, 10 мкл реакционной смеси наносили на хроматографическую колонку размером 62х2 мм (Силасорб С_18,5 мкм). Хроматографический анализ проводили в градиенте от 28% до 45% ацетонитрила в воде, с длиной волны детектирования 240 нм. Активность фермента выражали в нмоль 11-дегидрокортикостерона, образованного за 1 минуту из 1 грамма ткани (нмоль мин^-1г^-1). Данным методом была определена активность11b -ГСД в почках гипертензивных крыс линии НИСАГ и нормотензивных крыс линии WAG. Были обнаружены существенные отличия в активности фермента 11b -ГСД как в исходном состоянии, так и при стрессе.

Таким образом, разработанная методика позволяет оперативно определять активность 11b -ГСД в гомогенатах почек при различных состояниях.