Использование алкогольдегидрогеназы для определения содержания этанола в биологическом материале

Тезисы VII конференции "Аналитика Сибири и Дальнего Востока - 2004" »
Устные доклады » Секция 5. Анализ биологических, медицинских и фармацевтических объектов » ...

Использование алкогольдегидрогеназы для определения содержания этанола в биологическом материале

Рогожин В.В., Рогожина Т.В.

Якутская государственная сельскохозяйственная академия,
677007, г. Якутск, ул. Красильникова, 15, E-mail: vrogozhinmail.ru

Этанол является самым распространенным соединением растительных и животных тканей, так как может служить энергетическим субстратом клеток, регулировать интенсивность перекисного окисления липидов и проницаемость клеточных мембран. Этанол в тканях живых организмов способен окисляться в присутствии НАД алкогольдегидрогеназой (АДГ).

Используя лиофилизированные препараты АДГ из семян пшеницы, нами разработан селективный способ определения содержания этанола в биологическом материале. Для этого предварительно путем микроперегонки отделяли этанол от сыворотки крови или гомогената ткани, внося 3 мл биоматериала в пенициллиновый флакон. Туда же помещали стеклянные или пластмассовые открытые капсулы, объемом 0,8-1 мл, так чтобы верхний слой капсулы был на 4-5 мл выше уровня сыворотки во флаконе. В капсулы опускали наконечники охлаждающей системы. Затем нагревали флаконы на водяной бане при 80^оС в течение 1 ч. Подготовленная проба может храниться в закрытой капсуле несколько дней.

Перед определением этанола в исследуемом образце строили калибровочную кривую. Для этого определяли активность приготовленного перед измерением раствора АДГ от концентрации стандартных растворов этанола, внося в спектрофотометрическую кювету 1 мл 0,1 М глицин/NaOH буферного раствора, рН 10, 0,1мл 36 мМ водного раствора НАД, 0,1 мл иоднитротетразолиевого фиолетового, с исходной концентрацией 3,8 мг/мл и по 0,2 мл раствора этанола с концентрацией от 0,75 до 75 мМ. Реакцию инициировали введением 0,2 мл раствора АДГ (активностью 24 МЕ). Измерение оптической плотности фиксировали при длине волны 510 нм на спектофотометре или ФЭКе. Для определения содержания этанола в исследуемом биоматериале вместо раствора этанола с известной концентрацией вносили в кювету 0,2 мл отгона из капсулы. Используя калибровочную кривую устанавливали концентрацию этанола в образце.

Изобретение может быть использовано в медицине, при проведении судебно-медицинской экспертизы, или с целью диагностики предрасположенности к алкоголизму в наркологической практике, а также работниками ГБДД.