Определение кортикостероидных гормонов в надпочечниках крыс и мышей с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии

Тезисы VII конференции "Аналитика Сибири и Дальнего Востока - 2004" »
Стендовые доклады » Стендовая Секция V. Анализ биологических, медицинских и фармацевтических объектов » ...

Определение кортикостероидных гормонов в надпочечниках крыс и мышей с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии

Черкасова О.П., Федоров В.И.

Институт лазерной физики СО РАН, г. Новосибирск, 630090, пр. Академика Лаврентьева 13/3, факс (383-2)332067, e-mail: fedlaser.nsc.ru

При определения кортикостероидных гормонов наиболее селективными являются хроматографические методы анализа. Использование микроколоночной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) позволяет проводить анализ стероидных гормонов в небольших количествах биологического материала.

Нами разработан метод определения кортикостероидных гормонов в индивидуальных надпочечниках крыс и мышей. Надпочечник взвешивали на торсионных весах и переносили в стеклянный гомогенизатор, находящийся в ледяной ванне. Затем в гомогенизатор добавляли 0,5 мл (для мышей) или 2,5 мл (для крыс) охлажденного ацетона (ч.д.а.) и тщательно растирали до полного измельчения ткани. К гомогенату добавляли внутренний стандарт (ацетат кортизона) и центрифугировали. Супернатант упаривали в токе азота при 40° С. Сухой остаток растворяли в 24 мкл раствора ацетонитрила в воде (45:55). Для анализа использовали 8 мкл экстракта. Хроматографический анализ проводили на колонке размером 62х2 мм (Силасорб С₁₈, 5 мкм). В качестве элюента использовали ступенчатый градиент ацетонитрила от 28% до 45%. Хроматографические пики регистрировали по поглощению при 240 нм. Кортикостероидные гормоны идентифицировали по временам удерживания стандартных веществ. В надпочечниках обнаружены альдостерон, 11-дегидрокортикостерон, кортикостерон, дезоксикортикостерон с временами удерживания 5.15± 0.05, 10.45± 0.02, 11.02± 0.02 и 15.17± 0.07 мин, соответственно (n=5). Количество гормонов в надпочечнике определяли по линейным калибровочным графикам.

Таким образом, разработанный нами метод позволяет одновременно определять целый ряд кортикостероидных гормонов в индивидуальном надпочечнике мелких лабораторных животных.