Определение концентрации этанола в выдыхаемом воздухе

Тезисы VII конференции "Аналитика Сибири и Дальнего Востока - 2004" »
Стендовые доклады » Стендовая Секция V. Анализ биологических, медицинских и фармацевтических объектов » ...

Определение концентрации этанола в выдыхаемом воздухе

Рогожин В.В., Рогожина Т.В.

Якутская государственная сельскохозяйственная академия, 677007, г. Якутск, ул. Красильникова, 15, E-mail: vrogozhinmail.ru

В основе метода определения концентрации этанола в выдыхаемом воздухе используется реакция окисления этанола в присутствии НАД, катализируемая алкогольлегидрогеназой (АДГ), с последующим фотометрированием. В отличии от обычных методов определения этанола, чувствительность и специфичность способа повышается за счет использования алкогольдегидрогеназы из семян пшеницы и проявления реакции с помощью высокочувствительного соединения иоднитротетразолиевого фиолетового, который позволяет анализировать результат реакции по характерной окраске в видимой области поглощения .Для проведения анализа используется лиофилизированный препарат АДГ, стабильность препарата поддерживается за счет добавки глицина и НАД (1 мг АДГ и 2 мг НАД), который перед проведением анализа растворяют в 2 мл 0,1 М глицин-NaOH буферном растворе с pH 10, через который медленно барботируют выдыхаемый воздух. Объем барботируемого воздуха равен 1 литру (можно брать 2 или 3 л). Для проявления реакции окисления этанола в раствор вносят 0,05 мл 5,4 мг/мл иоднитротетразолиевого фиолетового. Реакцию останавливают через 10 мин добавляя в инкубируемую смесь 1 мл 0,2 М соляной кислоты. Контролем служит пробирка, содержащая аналогичные реагенты, через которую воздух не барботировали. Расчет концентрации этанола проводили по следующей формуле:

где D_опыт и D_контр - оптические плотности раствора в опытной и контрольной пробах при 510 нм; V - общий объем барботируемого через индикаторный раствор выдыхаемого воздуха, л; 6,57 - коэффициент пересчета 1 мкг этанола на 1 л выдыхаемого воздуха. При наличии этанола в выдыхаемом воздухе раствор окрашивается в красный цвет, окраска которого при фиксации соляной кислотой может сохраняться в течение 4-6 недель при хранении раствора в темноте при +4^оС. Предложенный способ позволяет повысить чувствительность определения этанола до 10-12 раз, по сравнению с обычными методами.

Изобретение может быть использовано работниками ГБДД.