Форумы ANCHEM.RU: Вопрос по технике подготовки ТСХпластины по методике USP

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Вопрос по технике подготовки ТСХпластины по методике USP >>>

Ответов в этой теме: 9

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Вопрос по технике подготовки ТСХпластины по методике USP

Avet
Пользователь
Ранг: 1086

03.07.2011 // 19:01:48

Уважаемые коллеги-аналитики! Ниже привожу оригинальный текст из статьи USP по идентификации sterols методои ТСХ. Перевод мне не нужен, с текстом все ясно. Но как понимать технику подготовки пластины, в частности. что считать application zone? Т.е. хотел бы уточнить, правильно ли понял я.
Absorbent: Chromatograpgic plate coated with 0.25-mm silica gel having an application zone that was previosly dipped under 3 cm of a solution prepared by dissolving 13 mg/ml of potassium hydroxide in methanol and water (49:1)
Developing solvent system: Hexanes and ether (7:3)
И падающие "на хвост" вопросы:
1. Почему Hexanes? Т.е. почему множественное число?
2. Как по-Вашему, подготовив пластину указанным выше способом, сколько времени ее желательно высушивать и как (комн.темп., нагревание?), т.к. она содержит воду, а элюент - гидрофобная смесь.
Заранее благодарю всех откликнувшихся

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

03.07.2011 // 19:37:59

Avet пишет:
Как по-Вашему, подготовив пластину указанным выше способом, сколько времени ее желательно высушивать и как (комн.темп., нагревание?), т.к. она содержит воду, а элюент - гидрофобная смесь.

Для устранения мономолекулярного водного слоя с поверхности ТСХ-пластины, ее выдерживают в сушильном шкафу при 105 градусах в течение 2-4 часов. По крайней мере, у нас такой вариант работает безотказно )

Avet
Пользователь
Ранг: 1086

03.07.2011 // 22:02:47

Chamomillablue пишет:

Avet пишет:
Как по-Вашему, подготовив пластину указанным выше способом, сколько времени ее желательно высушивать и как (комн.темп., нагревание?), т.к. она содержит воду, а элюент - гидрофобная смесь.
Для устранения мономолекулярного водного слоя с поверхности ТСХ-пластины, ее выдерживают в сушильном шкафу при 105 градусах в течение 2-4 часов. По крайней мере, у нас такой вариант работает безотказно )

Благодарю Вас за ответ, но мой вопрос несколько иной - то, что Вы описали, это обычная общая фармакопейная методика подготовки пластин. Меня же интересует все-таки методика USP, которая мною описана.

Garry
VIP Member
Ранг: 1076

04.07.2011 // 13:11:37

Avet пишет:
Уважаемые коллеги-аналитики! Ниже привожу оригинальный текст из статьи USP по идентификации sterols методои ТСХ. Перевод мне не нужен, с текстом все ясно. Но как понимать технику подготовки пластины, в частности. что считать application zone? Т.е. хотел бы уточнить, правильно ли понял я.
Absorbent: Chromatograpgic plate coated with 0.25-mm silica gel having an application zone that was previosly dipped under 3 cm of a solution prepared by dissolving 13 mg/ml of potassium hydroxide in methanol and water (49:1)
Developing solvent system: Hexanes and ether (7:3)
И падающие "на хвост" вопросы:
1. Почему Hexanes? Т.е. почему множественное число?
2. Как по-Вашему, подготовив пластину указанным выше способом, сколько времени ее желательно высушивать и как (комн.темп., нагревание?), т.к. она содержит воду, а элюент - гидрофобная смесь.
Заранее благодарю всех откликнувшихся

Эта обработка называется импрегнацией. Пластинку на высоту 3 см от зоны аппликации (нанесения проб) смачивают раствором щелочи в смеси метанол:вода (зануривают одним концом в резервуар с раствором на необходимую высоту) и естественно после этого высушивают для воспроизводимости условий в сушильном шкафу определенное и одинаковое время. Далее наносят образцы со стандартами. Такая зонная импрегнация позволяет существенно улучшить разделение веществ.

Александр Васильевич
Пользователь
Ранг: 7

04.07.2011 // 13:21:09

1. Про "гексаны" - гляньте в монографию "Реактивы". Меня тоже в свое время это заинтересовало: Точно не помню, но вроде бы у них это особая форма слова, обозначающая просто "гексан".
2. По поводу обработки пластины - опять же гляньте в монографию "ТСХ", нередко в частных монографиях приводятся только какие-то особые действия, а общие надо брать из общей монографии.

Avet
Пользователь
Ранг: 1086

04.07.2011 // 17:47:28

Редактировано 3 раз(а)

Garry пишет:

Avet пишет:
Уважаемые коллеги-аналитики! Ниже привожу оригинальный текст из статьи USP по идентификации sterols методои ТСХ. Перевод мне не нужен, с текстом все ясно. Но как понимать технику подготовки пластины, в частности. что считать application zone? Т.е. хотел бы уточнить, правильно ли понял я.
Absorbent: Chromatograpgic plate coated with 0.25-mm silica gel having an application zone that was previosly dipped under 3 cm of a solution prepared by dissolving 13 mg/ml of potassium hydroxide in methanol and water (49:1)
Developing solvent system: Hexanes and ether (7:3)
И падающие "на хвост" вопросы:
1. Почему Hexanes? Т.е. почему множественное число?
2. Как по-Вашему, подготовив пластину указанным выше способом, сколько времени ее желательно высушивать и как (комн.темп., нагревание?), т.к. она содержит воду, а элюент - гидрофобная смесь.
Заранее благодарю всех откликнувшихся
Эта обработка называется импрегнацией. Пластинку на высоту 3 см от зоны аппликации (нанесения проб) смачивают раствором щелочи в смеси метанол:вода (зануривают одним концом в резервуар с раствором на необходимую высоту) и естественно после этого высушивают для воспроизводимости условий в сушильном шкафу определенное и одинаковое время. Далее наносят образцы со стандартами. Такая зонная импрегнация позволяет существенно улучшить разделение веществ.

Уважаемый Garry! Я весьма признателен Вам за ответ. Ваши советы всегда точны и очень высокопрофессиональны. Хочу все-таки детализировать, правильно ли я понял: если место нанесения пробы находится на линии старта в 2 см от нижнего края пластины (т.е. это и есть application zone), то пластину надо погрузить в указанный раствор на глубину 2+3=5 см. Или погрузить пластину нижним краем на 3 см? Как верно, по-Вашему, трактовать данную статью USP?

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Микроскоп бинокулярный UV-1390В
Высококлассный микроскоп, предназначенный для исследований в проходящем свете и светлом поле. Служит для биохимических, патологоанатомических, цитологических, гематологических, урологических, дерматологических, биологических и общеклинических исследований в лабораториях любого типа медицинских учреждений. Увеличение: 40х-1500х. Объективы: IOS планахроматические, 4х, 10х, 20х, 40х и 100х МИ

[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]

Garry
VIP Member
Ранг: 1076

05.07.2011 // 13:40:06

Уважаемый Avet, если Вы собираетесь наносить образцы на высоте 2 см, то естественно, зона импрегнации должна занимать 3 см от места нанесения (аппликации). Т.е. общий уровень смачивания 5 см (2+3). Видимо по методике принципиально важно, чтобы разделяемые вещества прошли по импрегнированому слою, ширина -3 см которого достаточна. Как сами понимаете, смоченная полоса до зоны аппликации не имеет никакого функционального значения, поскольку ингредиенты ПФ никоим образом взаимодействовать со щелочью не могут. Поэтому щелочь предназначена, скажем для фиксации в слое кислых соединений или же для модификации химических структур, позволяющей разделяться близкородственным соединениям.

Avet
Пользователь
Ранг: 1086

05.07.2011 // 15:34:30

Garry пишет:
Уважаемый Avet, если Вы собираетесь наносить образцы на высоте 2 см, то естественно, зона импрегнации должна занимать 3 см от места нанесения (аппликации). Т.е. общий уровень смачивания 5 см (2+3). Видимо по методике принципиально важно, чтобы разделяемые вещества прошли по импрегнированому слою, ширина -3 см которого достаточна. Как сами понимаете, смоченная полоса до зоны аппликации не имеет никакого функционального значения, поскольку ингредиенты ПФ никоим образом взаимодействовать со щелочью не могут. Поэтому щелочь предназначена, скажем для фиксации в слое кислых соединений или же для модификации химических структур, позволяющей разделяться близкородственным соединениям.

Уважаемый Garry! Ваш ответ, как всегда, точный, профессиональный и исчерпывающий. Вопросов у меня больше нет. Огромное спасибо!

Avet
Пользователь
Ранг: 1086

08.07.2011 // 21:19:13

Уважаемый Garry! Все-таки приходится продолжать тему, т.к. проблемы все-таки имеют место быть.
1) Как по-Вашему, сколько времени нужно выдержать нижнюю часть пластины (5 см) для импрегнирования в вышеуказанном растворе? (Чтобы слой силикагеля потом не облез при высушивании пластины при 100 град 1 час)
2) Как Вы относитесь к опрыскиванию нижней части пластины (5 см высоты) вышеуказанным импрегнирующим раствором? Если положительно, то как следует высушить после этого пластину (так же - 100 гред 1 час)?
Заранее признателен за совет.

Garry
VIP Member
Ранг: 1076

09.07.2011 // 22:36:22

Avet пишет:
Уважаемый Garry! Все-таки приходится продолжать тему, т.к. проблемы все-таки имеют место быть.
1) Как по-Вашему, сколько времени нужно выдержать нижнюю часть пластины (5 см) для импрегнирования в вышеуказанном растворе? (Чтобы слой силикагеля потом не облез при высушивании пластины при 100 град 1 час)
2) Как Вы относитесь к опрыскиванию нижней части пластины (5 см высоты) вышеуказанным импрегнирующим раствором? Если положительно, то как следует высушить после этого пластину (так же - 100 гред 1 час)?
Заранее признателен за совет.

А какими пластинами Вы пользуетесь? Такая "беда" характерна для пластин с органическим байндером. В принципе варианты могут быть следующие:
1. Использовать Мерковские.
2. Процесс импрегнации не более пары-тройки секунд : окунули и вытащили.
3. Сушить вовсе я не говорил, что при 100 С в течение часа. Градусов 60 С достаточно. Можно и феном . Концентрация щелочи не такая уж и большая, чтобы слой отвалить. Причина в пластинках.
4. Опрыскивание - процесс не очень прецизионен, т.е где 5 см, там свободно будет и больше и менее равномерно. Поэтому в методике специально упоминается - dipping.


Ответов в этой теме: 9	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты