| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Есть ли тут ЯМР-щики? Помогите разобраться ( >>>
|
 |
| Автор | Тема: Есть ли тут ЯМР-щики? Помогите разобраться ( | |||||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
 18.08.2011 // 19:06:00
Редактировано 1 раз(а) Добрый день! Есть в наличии два ЯМР-спектра: 1H и 13С, снятые с триацилглицеринов обычного состава. Вопрос: можно ли по ним показать, что бета-углеродный атом (sn-2 положение) глицеринового остатка этерифицирован преимущественно насыщенными жирными кислотами, а альфа-атомы - ненасыщенными? Сами спектры и сопутствующие файлы здесь: Дело в том, что по результатам неполного деацилирования этилмагнийбромидом получается, что до 70% триглицеридов масла нашего объекта содержат в центральном положении насыщенную кислоту (Миристиновую - Пальмитиновую - Стеариновую или Арахиновую), а ненасыщенные, наоборот, занимают крайние положения. Всё бы здорово, но у нас - растительное масло, и это противоречит всем положениям о синтезе ТАГ у растений. Методику деацилирования перепроверили как только можно - результат один. На подсолнечном масле все нормально выходит, на нашем - вот такая вот ерунда. Может ли в этой проблеме помочь ЯМР? То есть подтвердить или опровергнуть результаты деацилирования? Как я предполагаю, если центральный углеродный атом в 70% случаев этерифицирован насыщенными кислотами, то на него влияние двойных связей, пардон за терминологию, должно быть меньше, чем на соседние и это, наверное, как-то должно отразиться на спектре... Данное предположение опирается и на результаты исследований Джованны Влахов - вот тут выложен ее обзор G. Vlahov Application of NMR to the study of olive oils. Progress in Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy. - Vol. 35. - 1999. - pp. 341-357: Но, увы, ни я, ни мои коллеги ни разу не спецы в ЯМР, а потому разобраться проблематично. Начинали, было, подобное исследование в ИОХе, но всё заглохло - как-то они спустили на тормозах, в итоге спектры лежат мертвым грузом, мы зашли в тупик. Сил выделять и чистить бесконечное количество раз ТАГи для нескончаемой серии деацилирований уже нет - результат все-равно не меняется ( |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
 19.08.2011 // 14:27:59
Только на основании представленных данных (статья и спектры), в первом приближении (т.к. условия неизвестны_внутр. стандарт и т.д., корректность статьи тоже, плюс в статье используется более высокое разрешение при 13C-NMR): 1. 13С-NMR: 173.32ppm - карбонильный атом углерода нас. ЖК (1,3), 173.28ppm - КАУ ненас. ЖК (1,3), 172.87ppm - КАУ ненас. ЖК (2). 2. Соотв. в положении sn-2 Ваших ТАГов преимущественно (>97%) находится ненас. ЖК. Конечно, нужно оптимизировать условия 13C-NMR. З.Ы.: Тоже не спец в ЯМР  Такие задачи решаются и ESI(APCI)-MS/MS (IT, QqQ, QTOF etc.). |
|||||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
19.08.2011 // 15:56:35
Спасибо! ) Тогда я уже ничего не понимаю... Почему метод, безотказно действовавший 15 лет, перестал работать ((( |
|||||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
19.08.2011 // 18:15:15
Дело темное... Надо разбираться, причин может быть много: от "примесей" в сэмпле до различных "ошибок" при выполнении методики и т.д. Насчет ЯМР: Если Вы смотрели представленную статью в том месте, где автор пишет насчет анализа диапазона 13С-NMR 172-174ppm, то понимаете какая тонкая эта работа и какие хар-ки при этом нужны (точность, разрешение и т.д.). Шаг влево или вправо и все. |
|||||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
19.08.2011 // 18:53:57
Редактировано 3 раз(а) Сэмплы хроматографически чистые - контроль по ТСХ.. Ацильная миграция возможна... но чтобы в таких масштабах - хз (Есть подозрение на чистоту эфира - в нем часто заводятся перекиси - но они бы тогда и подсолнечное масло рушили и появлялилсь бы всякие оксо-кислоты, но на GC ничего подобного нет. Есть возможность, конечно, снять на 600 MHz с сэмпла в 200 мг - как и описано в той статье... У нас есть, правда в печатном виде, и 2D-NMR COSY, TOCSY и прочие серии... но для нас это тёмный лес.. А насчет точности и достоверности этой статьи сомнений мало - Джованна Влахов крупный европейский специалист в области ЯМР оливкового масла - у нее несколько патентов ЕС на определение региона производства и установление фальсификации с помощью ЯМР "сырого" масла.. Да и опубликовано, как я понимаю, это все в приличном журнале... Но, так как масло оливы довольно типично по составу, а наши сэмплы значительно различаются, то перенести ее результаты трудно... без ЯМРщика никак... По поводу альтернативных методов анализа тоже мониторил - результаты там получаются не сильно лучше и мало опыта наработано вообще, если верить публикациям Byrdwell. Например, снимали мы ESI HRMS с этих ТАГ - в итоге лес пиков, наложение пиков изобарных ионов и понять в принципе невозможно что к чему - груда осколков... Все эти методы хороши для экспериментальных работ с чистыми молекулярными видами типа трипальмитата, триолеата и т.д. а когда помесь, включающая в себя до 560 "изомеров", но ничего не работает. Неполное деацилирование по Гриньяру или липазами до сих пор остается единственным воспроизводимым методом... А вообще, СПАСИБО Вам! А то ночами не сплю и даже поговорить на эту тему не с кем, а варение в собственном соку еще никогда ни к чему полезному не приводило! )) |
|||||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
19.08.2011 // 19:02:48
Редактировано 1 раз(а) Пользователь удалил свое сообщение |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
19.08.2011 // 20:36:02
Это вовсе не означает, что там не может быть "примесей", во-первых, ТСХ "не блещет" эффективностью, во-вторых, ограничения метода детектирования.
ГХ здесь не показатель. Дело все в том, что "примеси" могут просто менять Вашу методику, т.к. одни реакции будут идти с другой скоростью, будут идти побочные реакции, а некоторые реакции не будут идти вообще. Здесь надо "химизм" смотреть.
У Вас 13С-NMR снят где-то при 70-75MHz, а лучше бы (как в статье) где-то 150-300MHz. Просто Вам при "стандартных" условиях сняли и все. Вообще, здесь 2D нужно 13С-1H: HMBC и HSQC A 2D 1H-1H COSY здесь без особого толка (для подтверждения в каком положении нас./ненас. ЖК). Трудно, не значит невозможно. Тут дело в задаче, если ТАГов много, то это просто увеличивает сложность задачи и трудоемкость. Конечно, в случае сложных смесей необходим предварительный HPLC/TLC etc., т.е. LC-MS/MS, и, конечно же, если у Вас подобная смесь, то от ESI-HRMS ничего хорошего не стоило ждать. Во-первых, при идентификации ТАГ методом МС нужен МС/МС, а не просто МС. Во-вторых, "разработки" есть, просто здесь есть тонкости, зависящие от задачи и от конфигурации используемого оборудования (метод ионизации, тип масс-анализатора). Большой минус (относительно ЯМР) такого "подхода" это трудоемкость в случае поиска ответа на вопрос: какие ЖК преобладают в sn-2 положении сложной смеси ТАГов, т.к. работать приходится с отдельными ТАГами. Выбор ЯМР, конечно, в этом случае более разумен. |
|||||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
19.08.2011 // 20:51:43
Меня смущает, что результат 68-70% насыщенных кислот в sn-2 положении завидно воспроизводится во времени (повторяли на одном и том же виде с интервалом в 3 месяца), но и для масел разной стадии зрелости (собирали в динамике по трем точкам: глобулярный зародыш - зрелый зародыш - зрелый плод). И даже на урожаях разных лет... Есть идея на грани отчаянного безумства попросить Джованну Влахов руководить данной частью исследования и стать соавтором, но за державу обидно как-то.. Пока пытаюсь найти кого-нибудь здесь. |
|||||
|
Witaliy Пользователь Ранг: 171 |
19.08.2011 // 21:29:06
Сразу замечу, что я, к сожалению, не сильно много сталкивался с определением жирнокислотного состава во второй позиции. Но мои знакомые довольно много использовали в работе для этих целей ISO 6800-2001. У нас на Украине есть его утверждённый переводной вариант "ДСТУ ISO 6800-2001 Жиры и масла животные и растительные. Определение состава жирных кислот во 2-й позиции триглицеридных молекул (ISO 6800:1997, IDT)". Попробуйте воспользоваться. |
|||||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
19.08.2011 // 21:34:27
Редактировано 1 раз(а)
Спасибо за участие, но именно этот метод и дал сбой: "Принцип методу заключається в частковому ферментному гідролізу тригліцеридних молекул з утворенням 2-моногліцеридів, які потім виділяються методом ТСХ..." Подобной методой мы пользуемся не один десяток лет и липазами, и этилмагнийбромидом... В данном случае он, увы, не сработал ( |
|||||
|
Witaliy Пользователь Ранг: 171 |
19.08.2011 // 22:00:28
Да... В таком случае могу только посоветовать проверить пробоподготовку методом добавок. Проанализируйте одновременно Ваш образец, какое-либо масло/жир (подберите исходя из ЖКС Вашего образца - можно два варианта: сильно отличающегося по составу и близкого состава) и их смесь 50/50. Проанализируйте полученные результаты - получите выводы о влиянии пробоподготовки (в том числе возможно присутствующих примесей). |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
