| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Стерины. Выделение, очистка >>>
|
 |
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
 28.02.2012 // 22:21:11
Редактировано 7 раз(а) Я бы предложил начать с аналитической ТСХ, чтобы понять какие классы липидов и веществ помимо ТАГ в нём есть, а во-вторых решить что именно из этого вас интересует и как с этим работать. По своему опыту могу сказать, что мне удавалось собирать достаточное для ГХ-МС количество неполярных фракций всего из 100 мг хлороформного экстракта с помощью препаративной ТСХ на силикагеле. Например, нативных эфиров ЖК с низшими одноатомными спиртами, которых не более 0,5% от массы экстракта: Пластинку с силикагелем, предварительно пропитанную 0,001% метанольным или ацетоновым р-ром 2'7'-дихлорфлюоресцеина, нанести масло(экстракт) и в системе н-гексан:диэтиловый эфир 95:5 или 96:4 разогнать. ТАГи и всё прочее "полярное" останется на уровне Rf 0.3, а вот выше ТАГ можно будет собрать эфиры каротиноидов, эфиры стеринов, углеводороды от кутикулярных восков и прочее "неполярное". Если нужно выделить ТАГи и другие ацилглицерины, следует взять систему н-гексан:диэтиловый эфир 7:3.. В общем, не стоит забывать старый добрый тонкий слой — в подобных вопросах он как раз идеален  И прибор не засрёте Старшие коллеги говорят, что работая с насыпным слоем, можно разово делить до 700 мг масла. Я подобным уже не пользовался, так как с началом работы на хромассе концентрация аналитов уменьшилась. Там, где раньше нужно было мг 50 - на набивной колонке, например, теперь можно обойтись 100 мкг Поэтому для некоторых целей вполне хватает ТСХ-пластин ёмкостью до 25 мг.*** Если же хочется непременно омылить и собрать неомыляемые компоненты, то в неомыляемых вероятнее всего окажутся пигменты, фенолы, свободные стерины, высшие жирные спирты, продукты деградации органических соединений и т.д. в зависимости от объекта и способа экстракции. Но я бы рекомендовал омылять не в водном растворе — выход маленький, а ТАГи так вообще можно часами кипятить без особого профита, и не в метанольном, а в 10% KOH в 90% водном этаноле или метаноле — что больше нравится. В метаноле выход выше. Если же взять чистый спирт, то непременно образуются эфиры. В водном этого не случается. Однако, не стоит забывать, многое из вас интересующего не любит горячей щелочи — рискуете на ГХ-МС поймать только ножки, да рожки. Можно попробовать мягкое омыление с помощью гидроокиси тетраметиламмония или применить ферментный гидролиз - холестерол-эстеразами, например, но они аццки дорогие. Но оба последних метода требуют фракций, максимально свободных от эфиров глицерина с жирными кислотами. *** Если какие-то методические подробности нужны по ТСХ растительных липидов, то спрашивайте — подскажу, дабы заново не изобретать велосипеда вам P.S. Если минорных компоментов хочется получить "ведёрное" количество, то можно заморочиться, при условии, что не жалко а. времени, б. терпения, в. - растворителей, препаративной колоночной хроматографией на окиси алюминия. Но я бы начал с ТСХ, т.к., имхо, без неё в вашем случае не обойтись, даже если работать с "промывкой масла" спиртом, часть ТАГ все-равно в нем растворится, а колоть, скажем, углеводороды с ТАГами - кощунство для системы! |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
28.02.2012 // 22:40:13
Редактировано 1 раз(а) Для стеринов хорошая ПФ - это н-гексан:диэтиловый эфир:ледяная уксусная 70:30:2. Какая была у вас? (Кстати, картинку так и не удаётся посмотреть) Во-вторых, зачем вы мучаетесь с обугливанием серной кислотой, если есть универсальный проявитель: 4% р-р фосфорномолибденовой кислоты в 50% этаноле\метаноле\изопропаноле (на ваш вкус)? Достаточно после опрыскивания 5-8 минут выдержать пластинку в сушильном шкафу при +120 градусах. В-третьих, для стеринов и их эфиров существует специфическая реакция — окрашивание по Либерману-Бурхарду: пластинку проявляют смесью концентрированной серной:ледяной уксусной 1:1. При выдерживании в сушильном шкафу появляются сиреневые и розовые пятна стеринов. Но для этой реакции лучше работать на стеклянных пластинах со спечённым слоем силикагеля или такие, где сорбент закреплён гипсом. Если возьмёте крахмальную, то всё осыпется и ничего не увидите. P.S. А чем вас не устраивает препаративный тонкий слой для выделения стеринов? ) |
|||||
|
Дмитрий (anchem.ru) Администратор Модератор форума Ранг: 4450 |
29.02.2012 // 0:52:26
Редактировано 3 раз(а) к сожалению ТСХ задействовать нет возможности  просто вопрос - удается ли увидеть больше минорных компонентов через экстракцию метанолом или этанолом? Как я и писал выше, мы не собираемся при этом колоть вместе с перешедшими ТАГами, все будет упарено и перерастворено в гексане, а дальше стандартная процедура с метанольным 10% КОН. Просто есть предположение что изменится отношение минорных компонентов по отношению к ТАГам (нам бы еще порядок ).простой этерификацией (иправлено вместо неверного "омыления") и заколом - уже сделали, видим только три из 5 терпенов, обнаруженных анализом паровой фазы (через продувку и улавливание, затем термодесорбция). Ничего более из интересного увидеть не удалось - только метиловые эфиры. Снижать сплит не хочется, и так основной компонент с перегрузом на колонке... Полного фракционирования добиваться задача не стоит. Нужно просто зацепить максимум компонентов при минимальных трудозатратах для сравнения. |
|||||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
29.02.2012 // 0:57:31
Редактировано 1 раз(а) В спирт легко уйдут и стерины, и моноглицериды и куча прочей дряни, который в одном анализе разделить не получится и можно загадать прибор. Если не хочется снижать сплит, можно попробовать в методе анализа прописать выключение детектора на период выхода основного пика javascript:smileyInsert(topicform.message, '  ');Плюс, терпены\изопреноиды могут блестяще разваливаться еще в испарителе. К ним лучше HPLC-DAD |
|||||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
29.02.2012 // 0:59:13
Редактировано 1 раз(а) Пользователь удалил свое сообщение |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Дмитрий (anchem.ru) Администратор Модератор форума Ранг: 4450 |
29.02.2012 // 1:00:06
Редактировано 1 раз(а) глицериды не страшны - так как этерификация (иправлено вместо неверного "омыления"). а вот "выключение детектора", то есть видимо катода - это примерно как страусу голову в песок... не вижу - значит на колонку и в источник ничего не идет
|
|||||
|
Дмитрий (anchem.ru) Администратор Модератор форума Ранг: 4450 |
29.02.2012 // 1:03:20
Вот тут совсем не соглашусь мыть просто инжектор надо и дезактивировать, и снижать температуру. И что мне толку от HPLC, если нам идентификация нужна?
|
|||||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
29.02.2012 // 1:09:21
Редактировано 1 раз(а) Я не знаю что у вас за объект и как мы это масло получали. Поэтому по умолчанию рассматриваю полную схему "экстракта" в котором может быть все - от ТАГ, ДАГ, МАГ, МГДГ, СГДГ до свободного бета-каротина, лютеина etc. Омыление тотального экстракта даст вам столько артефактов, что замучаетесь нобели считать. И... я пока не видел ни одной статьи по ГХ бета-каротина или фитоена - чем не изопреноиды, которые прекрасно разваливаются еще до входа в колонку? А многое еще развалится при омылении )
|
|||||
|
Witaliy Пользователь Ранг: 171 |
29.02.2012 // 1:10:05
Дмитрий, если нет возможности сделать ТСХ, то можно выполнить пробоподготовку и экстракцией (хотя это и похуже). В фармакопеях встречал примерно такой вариант: 20г масла+ 50 мл гексана, экстракция смесью 75:25 метанолом:вода. Метанольный экстракт упаривают под вакуумом, перерастворяют в хлоформе. Метод для антиоксидантов в маслах. Делал год назад на гх/мс, ничего не упаривал .
|
|||||
|
Witaliy Пользователь Ранг: 171 |
29.02.2012 // 1:17:40
Да, вспомнил, перед отделением метанольного экстракта дополнительно охлаждал около двух часов (если есть центрифуга, можно метанольный охлажденный экстракт еще и "покрутить"). Триглицеридов практически не видел (работал на 15м колонке). |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 40
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
