Форумы ANCHEM.RU: Водорастворимые витамины на ВЭЖХ Agilent 1200

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Водорастворимые витамины на ВЭЖХ Agilent 1200 >>>

  Ответов в этой теме: 26
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

FeCsiTin
Пользователь
Ранг: 23

04.09.2013 // 12:31:20

Редактировано 2 раз(а)

FeroxDS пишет:
Стандартные растворы витаминов готовлю из расчета 50мг на 50мл. Так чтобы концентрация была 1мг на 1 мл.
витамины В2 ФК меньше заявленного

Поделитесь, пожалуйста, как и в чём Вам удалось растворить В2 и Вс в таких концентрациях? У меня максимум 50 и 200 мг/л соответственно (в воде).

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

AA_Alex
Пользователь
Ранг: 372

05.09.2013 // 6:45:45

Редактировано 1 раз(а)

FeroxDS пишет:
Добрый день! Снова я со своими витаминами.
Во первых, Спасибо большое за советы всем! Отдельное спасибо Алексу.

Алекс, в общем поэкспериментировал я согласно Вашим советам и получил очень даже хорошие результаты. Но есть несколько новых вопросов.
Во первых, я использую гептансульфонат Na, Вы же в своих постах пишете гептилсульфонат, одно ли это и тоже? Просто гептансульфонат Na достаточно дорогая вещь, у нас она стоит за 25г - 50000тг (10000 руб вашими), может гептилсульфонат дешевая замена? В моих исследованиях у меня результат стал стабильным при концентрации 300 мг/л., рН 3,0,

Также хотел узнать, как вы осаждаете молоко? Я вот пробовал ТХУ и ТФУ, всё прекрасно осаждается, но у меня есть подозрение, что именно на этом этапе я теряю часть своих витаминов.

И еще один может глупый вопрос, но все таки. Если скажем взять две одинаковые колонки и последовательно соединить их, можно ли таким образом получить лучшее разделение продуктов?

Еще раз всем спасибо за советы!
С уважением!

Пожалуйста.
Гептансульфонат и гептилсульфонат одно и то же. Что-то вы его дорого покупаете. Попробуйте в БиоХимМаке
www.bcmst.ru/
По-моему, я покупал что-то около 1000руб за 5г.

По поводу осаждения. Попробуйте осаждать хлорной кислотой (HClO4) - 0.1 или 0.2Н, хотя, как мне кажется, принципиальных различий с ТХУ не будет. Чтобы оценить потери аналита при пробоподготовке обычно пользуют какой-нибудь внутренний стандарт. Можно еще попробовать методом добавок - добавить в образец известное, на порядок большее количество витамина и посмотреть баланс после пробоподготовки.

По поводу последовательного соединения двух колонок. Я не пробовал, но что-то мне кажется, что этого делать не стоит. Ну, во всяком случае, я не видел/слышал, чтобы так кто-то делал, и это неспроста. Можете, конечно, поэкспериментировать, но зачем? Обычно разделение улучшают варьируя состав элюента. Думаю, сейчас кто-нибудь из мэтров это откомментирует.

FeroxDS
Пользователь
Ранг: 15

05.09.2013 // 9:23:03

Редактировано 1 раз(а)

FeCsiTin пишет:
Поделитесь, пожалуйста, как и в чём Вам удалось растворить В2 и Вс в таких концентрациях? У меня максимум 50 и 200 мг/л соответственно (в воде).

Добрый день!
В2 и ФК растворяю в NaOH 0,1Н р-ре. Почему в них? Ну я искал по справочникам и фармокопеям и там было указанно, что рибофлавин и фолиевая кислота плохо растворимы в воде и спиртах, хорошо растворимы в едких щелочах. Поскольку остальные витамины я растворяю в 0,1н НСl, поэтому решил разбавить эти два таком же растворе только щелочи. Как то пробовал р-рить их в рабочих буферных растворах, ничего из этого не вышло в стандарте была сильная взвесь. Да кстати растворение проводил в ультразвуковой бане при комнатной температуре. минут 5-10.

FeroxDS
Пользователь
Ранг: 15

05.09.2013 // 9:37:58

AA_Alex пишет:
Что-то вы его дорого покупаете. По-моему, я покупал что-то около 1000руб за 5г.

Чтобы оценить потери аналита при пробоподготовке обычно пользуют какой-нибудь внутренний стандарт. Можно еще попробовать методом добавок

По поводу цены, скорее всего наши местные барыги вот так сильно накручивают цены.

Метод добавок я использую и получаю приемлемые результаты. Но вот в молочных продуктах и в детском питании добавки показывают примерно те количества которые я добавляю а витамины самого продукта как правило всегда идут с занижением. И я вот понять не могу, где у меня идут потери, во время пробоподготовки (не полная экстракция) или во время осаждения (может чего разрушается)?

А что можно использовать в качестве внутреннего стандарта для витаминов?

Еще раз спасибо!
С уважением!

chem4690
Пользователь
Ранг: 132

05.09.2013 // 11:30:07

FeroxDS пишет:
И еще один может глупый вопрос, но все таки. Если скажем взять две одинаковые колонки и последовательно соединить их, можно ли таким образом получить лучшее разделение продуктов?

В гель-проникающей хроматографии очень часто так и делают, чтобы получить приемлимое разделение-но это связано с низкой эффективностью колонок (особенно в широком диапозоне). Тогда Комбинация колонок приведет к улучшению формы пиков и лучшему разделению.

У Вас же, скорее всего, такой фокус преимуществ не даст, потому что эффективность Ваших колонок высокая и уже пики не станут. Даже, скорее всего, наоборот, станут шире, поскольку увеличится размывание пиков во второй колонке на соединениях. А то что не делится на Вашей колонке так, на двух тоже не поделится. Так что я бы даже и пробовать не стал. Лучше обратить больше внимания на выбор подвижной фазы и градиента.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Аналитический центр ЗАО «РОСА»
Специализированный научно-аналитический центр в области аналитического контроля качества воды и других объектов окружающей среды.

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

10.09.2013 // 8:02:56

Кажется, я на этот же вопрос отвечал????

www.chromforum.ru/viewtopic.php?f=19&t=310

Алекс все правильно говорит. Это нетривиальная задача даже для профи.

Витамин В1 в этой системе не удерживается, и определяется неправильно. В3, скорее, тоже.

кое-какие мои наработки можно посмотреть
здесь www.chromforum.ru/viewtopic.php?f=47&t=285
и здесь www.chromforum.ru/viewtopic.php?f=47&t=286

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

10.09.2013 // 8:06:06

при увеличении длины колонки в 2 раза разрешение возрастет в 1.4 раза при увеличении времени анализа в 4 раза (при фиксированной скорости потока)

это имеет смысл если только
1) вещества удерживаются.
2) разделение изократическое, или близко к нему.

здесь градиент с неудерживаемыми пиками. что ни бери - ничего не изменится. надо учиться хроматографии

cholesterol
Пользователь
Ранг: 109

10.09.2013 // 21:58:33

КонстантинС пишет:
при увеличении длины колонки в 2 раза разрешение возрастет в 1.4 раза при увеличении времени анализа в 4 раза (при фиксированной скорости потока)

Разрешение увеличится в 1,4 раза, а время анализа в 2 раза.

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

11.09.2013 // 7:34:13

cholesterol пишет:

КонстантинС пишет:
при увеличении длины колонки в 2 раза разрешение возрастет в 1.4 раза при увеличении времени анализа в 4 раза (при фиксированной скорости потока)
Разрешение увеличится в 1,4 раза, а время анализа в 2 раза.

тьфу, при фиксированном давлении - хотел сказать

FeroxDS
Пользователь
Ранг: 15

11.09.2013 // 9:09:06

Константин, Холестерол спасибо!
Константин, да действительно, на том форуме это тоже мой вопрос. В тот момент необходимо было быстро получить ответ, здесь никто не отвечал, вот и написал везде где смог.

КонстантинС пишет:
при увеличении длины колонки в 2 раза разрешение возрастет в 1.4 раза.
здесь градиент с неудерживаемыми пиками. что ни бери - ничего не изменится. надо учиться хроматографии

Ну так учусь, оттого и вопросов столько.
По поводу последовательно соединенных колонок, мои мысли были таковы: если на одной 150мм колонке прошло определенное разделение, то пропустив её через вторую такую же моно будет получить лучшее разделение. То есть именно через две одинаковые, а не через одну с удвоенной длиной.
Проводил такой эксперимент (правда на двух разных колонках), запускал витамины на колонке с длинной 150мм и 250мм при одних и тех же условиях. Колонки еще раз повторюсь разные (1. Rigel, 2.Agilent bonus RP). Время выхода безусловно увеличилось, но расстояние между пиками осталось прежним. Сами же пики стали шире. Опять таки теоретически я предполагал, что на 250мм пики будут такими же, как и на 150мм, а вот расстояние между ними измениться. Понимаю, что может это оттого что колонки разные.
По поводу внутреннего стандарта для водорастворимых витаминов не подскажите?
И еще вопрос, Вы когда нибудь мёд на водорастворимые витамины проверяли?
С уважением!


Ответов в этой теме: 26 Страница: 1 2 3 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты