Форумы ANCHEM.RU: объем петли инжектора

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

объем петли инжектора >>>

  Ответов в этой теме: 21
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

petrovps
Пользователь
Ранг: 22

29.10.2013 // 23:28:22

cholesterol пишет:
Для Вашей колонки объем вкола должен быть не более 2 мкл, если вещество выходит с k=2 и не более 15 мкл с k=20.

При использовании ручного инжектора вводимый объем должен быть либо ≤ 50%, или ≥ 200% от объема петли для обеспечения максимальной точности.

При инъекции в растворителях, которые сильнее, чем подвижная фаза, образец проскакивает вниз по колонке пока растворитель полностью не смешается с подвижной фазой, т.е. часть колонки просто не используется для разделения и вместо 100 мм колонки вы получаете разделение как 80 мм колонке или того меньше.

А провал базовой линии из-за этого возможен?

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

kvot
Пользователь
Ранг: 165

30.10.2013 // 7:16:59

Редактировано 1 раз(а)

petrovps пишет:
Вколоть разные объемы наверное не получится, нет у нас петель с меньшим объемом. Белки осаждали ацетонитрилом, поначалу все шло хорошо, построили калибровку. Вскоре система стала вести себя неадекватно, на хроматограмме в одно и то же время сначала наблюдается провал базовой линии, а потом подъем. И самый интенсивный сигнал 222 m/z (метод ионизации ESI). Конус, линзу и фильтр ионов почистил как написано в мануале, но картинка не изменилась. Систему промывал, колонку тоже. Вот и подумал, что перегрузил колонку большими объемами пробы, а теперь примеси ползут постоянно

Кстати, может все гораздо проще - предколонку пора поменять?

Давление выросло?

petrovps
Пользователь
Ранг: 22

30.10.2013 // 9:26:06

Давление не выросло, предколонка новая

cholesterol
Пользователь
Ранг: 109

30.10.2013 // 22:08:21

petrovps пишет:
А провал базовой линии из-за этого возможен?

Возможны всякие неприятности, флуктуации базовой линии, разрушения пиков (особенно рано выходящих веществ), могут плыть времена удерживания и т.д.

Вы когда холостой вкол делаете, наблюдаете провалы базовой линии?

В качестве совета могу предложить разбавлять пробу в 2 раза слабым компонентом подвижной фазы перед заколом.

petrovps
Пользователь
Ранг: 22

30.10.2013 // 23:05:14

cholesterol пишет:
Вы когда холостой вкол делаете, наблюдаете провалы базовой линии?

При холостом вколе также провал наблюдался.

cholesterol пишет:
В качестве совета могу предложить разбавлять пробу в 2 раза слабым компонентом подвижной фазы перед заколом.

Попробовал сегодня разбавить пробу фазой и получил кусочки слизи в растворе (и эта дрянь попадала в колонку от каждого вкола). Сделал так: снял колонку, поставил вместо нее новую предколонку и подключил к массу. Ввел сначала фазу, а потом ацетонитрил. В обоих случаях получил хроматограммы без провалов и прежних сигналов грязи. Получается, что мы загадили колонку. Подскажите, пожалуйста, как лучше попытаться отмыть колонку.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

МВИ ФР.1.31.2010.07434 "Методика выполнения измерений массовой концентрации неионогенных поверхностно-активных веществ (НПАВ) в питьевых, природных и сточных водах на основе экстракции и последующего разделения в трёхфазной системе методом ИК-спектрофотометрии на концентратомере КН-2м"
ПНД Ф 14.1:2:4.256-09 Диапазон измерения массовых концентраций НПАВ в природных и сточных водах - от 0,05 до 100,0 мг/л, в питьевых водах - от 0,05 до 1,0 мг/л

[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]

cholesterol
Пользователь
Ранг: 109

31.10.2013 // 1:01:46

petrovps пишет:
[Подскажите, пожалуйста, как лучше попытаться отмыть колонку.

Простая промывка колонки от протеинсодержащих примесей:

Повторяющийся градиент от 100% 0,1% TFA в воде до 100% 0,1% TFA в IPA (изопропанол) при низкой скорости потока (высокая вязкость элюента).

Если не помогает, то можно попробовать жесткую промывку колонки от протеинсодержащих примесей:

Для этого понадобится:

1) 1% AcOH в воде
2) 1% TFA в воде
3) 0,1% TFA в воде : IPA (40 : 60 v/v) (элюент сильно вязкий, использовать низкую скорость)
4) TEA : IPA (40:60 v/v) (довести 0,25N фосфорную кислоту до pH=2,5 с помощью TEA и затем смешать с IPA)
5) 5-8 М водный раствор мочевины или гуанидина (довести до pH=6-8)
6) 0,5-1,0 M водный раствор хлорида, фосфата или сульфата натрия (pH=7,0)
7) DMSO-вода или DMF-вода (50:50 v/v)
8) IPA

Промыть колонку 20 объемами каждого из приготовленных растворов, при этом не забывать промывать колонку после каждого пункта IPA (кроме пункта 5).

После промывания колонки водным раствором мочевины или гуанидина удалить остатки последних, промывая колонку 40-50 объемами воды

Мне помогала в 100% случаях простая промывка, но колонки я сильно не загаживал.

А, вообще, ознакомитесь с этой статьей там многое написано как регенерировать колонки www.lcgceurope.com/lcgceurope/data/articlestandard/lcgceurope/262003/61538/article.pdf

kvot
Пользователь
Ранг: 165

31.10.2013 // 2:44:28

petrovps пишет:
Давление не выросло, предколонка новая

Диаметр частиц - 2,4 мкм, "слизь" образуется, давление не выросло. Как эта "слизь" в колонке расположилась, что совсем не дает сопротивления?
Не знаю, может глупый совет, может эту "слизь" попробовать отцентирфугировать, жидкость декантировать, а остаток попробовать по растворять в пробирке, таким образом подобрать растворитель. И колонку попробовать все таки мыть обратным током, чтобы не гонять "слизь" по всей колонке, т.к. скорее всего она села в начале. Хотя при таких объемах пробы и самой колонки.....
И получается предклонка не работает в этом случае.

AA_Alex
Пользователь
Ранг: 372

31.10.2013 // 7:07:11

Редактировано 1 раз(а)

В общем, Вам надо серьезно подумать над пробоподготовкой.
1. Осаждение белков ацетонитрилом далеко не самый эффективный метод.
2. "Слизь" - скорее всего не белки, а какие-нибудь полисахариды, протеогликаны или хз что еще - в плазме крови много всего.
3. Есть стандартные методы пробоподготовки с использование ТФЭ именно (разработанные/заточенные) для плазмы, и именно для ВЭЖХ-МС.
Может не надо изобретать ничего, а просто поискать статьи по Вашим препаратам? (Например запросить "substancename+SPE+HPLC-MS")

И почему такая секретность - "что определяем не могу назвать"?
Если это не какая-то экзотика, возможно, кто-то уже с этим сталкивался и проходил. Чего по граблям-то ходить?

Yrhu
Пользователь
Ранг: 154

13.06.2024 // 7:01:26

Добрый день. А можно как нибудь прочистить забитую петлю дозатора 20 мкл?

vmu
Пользователь
Ранг: 1330

13.06.2024 // 8:28:37

Редактировано 1 раз(а)

Yrhu пишет:
Добрый день. А можно как нибудь прочистить забитую петлю дозатора 20 мкл?

Отсоединить выходной конец петли, включить насос. Если по достижению максимального рабочего давления насоса засор не выбьется из петли - выкинуть забившуюся петлю, поставить новую. Можно попробовать такую же промывку, но в обратном направлении. При желании можно, конечно, снять и повымачивать забитую петлю в растворителях, кислотах, щелочах, потрясти на ультразвуке, но проще заменить.

P.S. Для начала надо убедиться, что засор именно в петле, а не в иных участках жидкостного тракта хроматографа.


Ответов в этой теме: 21 Страница: 1 2 3 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты