Форумы ANCHEM.RU: Выбор детектора для препаративной ВЭЖХ

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Выбор детектора для препаративной ВЭЖХ >>>

  Ответов в этой теме: 46
  Страница: 1 2 3 4 5
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

Osokin
Пользователь
Ранг: 54

17.07.2014 // 11:15:32

IvanStyskin пишет:
Смешение на низком в препе, тем же чем и в аналитике чревато пузярыми. Вероятность на порядок выше только на таких расходах.
Дегазатор там предполагается?
www.degasi.com/degasi-prep/

Не могу согласиться. На аналитике при низкой линейной скорости потока вероятность "застревания" позырька воздуха в ячейке на порядки выше, чем в препе. В препаративе все вылетает и даже не "засвечивается". Так что надо учитывать расход элюента (масштаб препа). Еще, правда, многое завист и от конструкции ячейки детектора.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Osokin
Пользователь
Ранг: 54

17.07.2014 // 11:25:31

Chamomillablue пишет:

IvanStyskin пишет:
Смешение на низком в препе, тем же чем и в аналитике чревато пузярыми. Вероятность на порядок выше только на таких расходах.
Дегазатор там предполагается?
www.degasi.com/degasi-prep/
Система планируется такая:
— дегазатор мембранный вакуумный, 5-канальный;
— клапан выбора растворителей 2-позиционный;
— насос высокого давления с двойным микроплунжерным механизмом, диапазон скорости потока 0,01-150 мл/мин;
— переключатель колонок ручной;
— миксер 4,5 мл для аналитического режима;
— два инжектора для ручного ввода пробы;
петли инжектора объёмами 20, 500, 1000, 2000 мкл
— держатель аналитических и препаративных колонок;
— детектор рефрактометрический в комплектации для препаративного режима;
— диодно-матричный детектор в комплектации для препаративного режима;
— коллектор фракций;
— устройство автоматической промывки плунжеров насоса.
ну и ПО и ПК

DAD нужен для того, чтобы была возможность анализировать пигменты и флавоноиды в большом количестве высших и низших растений...

А зачем Вам насос на 150 мл/мин? Вы собираетесь работать с колонками больше 100 мм? Тогда даже петля 2 мл маленькая. И раз такой диапазон головок насоса - тогда Вам нужен градиент на стороне низкого давления. И вот почему: если будете работать на низких расходах, например 20 мл/мин (для колонок ID 21,2 мм) с HPG, то Вы будете работать в диапазоне от 0 до 20/150 = 13% диапазона насоса. В таком случае градиент будет получаться невоспроизводимым на низких %% (ошибка подачи увеличится). LPG без разницы какой поток - он работает с задаваемой частотой. Но тут нужно будет при малых потоках задавать высокую частоту срабатывания клапанов, чтобы ровно отрабатывался градиент.

SIG
Пользователь
Ранг: 1214

17.07.2014 // 12:20:43

Да, кстати это верно. Не пытайтесь объеденить полумикро- и макрохроматографию в одном приборе. Если головки сменные, это не так страшно, но в Вашем случае на низких потоках вероятны проблемы, описанные уважаемым Osokin'ым. Чью систему в итоге выбрали? И еще важная вещь - Вы уверенны, что Ваш коллектор справится с такими потоками. Обычно коллекторы на 10 мл/мин и 150 мл в минуту как минимум имеют совершенно разный обвес. Да, ну и подумайте, с какими реально колонками Вы собираетесь работать. 50 мм уже не очень дешево, а 100 и более - запредельно дорого. И кроме того, чем больше колонка, тем меньше рабочее давление. То есть мега-насосы могут попросту не прокачать 10 мм полупреп-колонку.
И последнее - смогут ли Ваши детекторы работать с большими и маленькими потоками без смены ячейки? Тут пришлось по необходимости делать аналитику на УФ с полупрепаративной ячейкой - пики и шум были дай боже. Привезли аналитичекую - все встало на свои места.

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

17.07.2014 // 18:21:42

Редактировано 1 раз(а)

Osokin пишет:
А зачем Вам насос на 150 мл/мин? Вы собираетесь работать с колонками больше 100 мм? Тогда даже петля 2 мл маленькая.

Такой насос нам ставят в КП, т.е. ещё можно обсудить и, полагаю, взять модель с меньшими потоками.
Склоняюсь к тому, что препаративных колонок диаметром 10 мм (250 мм длиной) будет достаточно -- нам, всё-таки, ведёрные объёмы не нужны, ну, может, максимум 20 мм. И то, препаратив нужен в основном для получения фракций для последующих анализов, а, располагая микровиалами ЯМР, можно работать от 5 мг для углеродных спектров. Так что, большие объёмы/потоки вряд ли понадобятся.

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

17.07.2014 // 18:23:35

Редактировано 1 раз(а)

SIG пишет:
Чью систему в итоге выбрали?

Пока присматриваемся к LC-20 Prominence, но, наверняка обяжут проводить аукцион и т.д., так что количество вариантов увеличится.
Но пока симпатизирую именно ей, точнее тем, кто их поставляет — менеджеры нереально терпеливы и исполнительны. Остальные компании на запрос либо не ответили, либо, узнав, что запрос связан с формированием заявки на грант, который ещё не известно поддержат или нет, деликатно самоустранились.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Журнал «Химическая и биологическая безопасность»
Межотраслевой реферативный журнал, включающий проблемно-ориентированные подборки рефератов научных публикаций, патентных, законодательных и нормативных правовых документов. Издается в ВИНИТИ РАН с 2001 г.

SIG
Пользователь
Ранг: 1214

17.07.2014 // 21:24:48

По секрету скажу, что обладая приборным временем, можно без всяких микровиал в обычных 5 мм ампулах и обычных дейтерорастворителях иметь приличные углеродные спектры с 1 мг, скажем, порфиринов. Мы такое делали, но копить нужно ночь.

Подумайте еще раз по количествам. На колонке 21 мм можно наработать в несколько проходов существенно больше, чем 5 мг. Мы недавно делали себе стандарт - 99,8 по ВЭЖХ чистота - 1 г вещества наработали за 50 циклов на колонке 20 *250 мм в ручном режиме безо всякой автоматизации. Потратили 1 рабочий день. Думаю, что максимального потока 50 мл/мин Вам хватит для всех развлечений. И давление такой насос дает побольше, так как на толстых колонках оно совсем маленькое.

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

18.07.2014 // 1:02:04

Редактировано 1 раз(а)

SIG пишет:
По секрету скажу, что обладая приборным временем, можно без всяких микровиал в обычных 5 мм ампулах и обычных дейтерорастворителях иметь приличные углеродные спектры с 1 мг, скажем, порфиринов. Мы такое делали, но копить нужно ночь.

Подумайте еще раз по количествам. На колонке 21 мм можно наработать в несколько проходов существенно больше, чем 5 мг. Мы недавно делали себе стандарт - 99,8 по ВЭЖХ чистота - 1 г вещества наработали за 50 циклов на колонке 20 *250 мм в ручном режиме безо всякой автоматизации. Потратили 1 рабочий день. Думаю, что максимального потока 50 мл/мин Вам хватит для всех развлечений. И давление такой насос дает побольше, так как на толстых колонках оно совсем маленькое.

Я немного погуглил, средняя нагрузка на 21 мм колонку (250 мм длина, 5 микрон частицы) -- 300 мг -- в нашем случае этого за глаза хватает, так что, Вы правы, 150 мл/мин точно не нужно. Надеюсь, это хоть как-то снизит стоимость системы, да вот евро не кстати подрос

)
По поводу ЯМР специфика такова, как мне объясняли ЯМРщики в ИОХе, что в смеси изомеров (в данном случае молекулярных видов ТАГ и ДАГ) сигнал от молекул каждого вида падает пропорционально квадрату концентрации этого вида в смеси, так что 5 мг -- это минимум для всей ночи в микровиале SHIGEMI на 600 МГц спектрометре.
Спасибо за ценные советы!

Osokin
Пользователь
Ранг: 54

18.07.2014 // 14:21:24

Chamomillablue пишет:
Я немного погуглил, средняя нагрузка на 21 мм колонку (250 мм длина, 5 микрон частицы) -- 300 мг -- в нашем случае этого за глаза хватает, так что, Вы правы, 150 мл/мин точно не нужно. Надеюсь, это хоть как-то снизит стоимость системы, да вот евро не кстати подрос )

1. Не обольщайтесь, что 300 мг - зависит от самих разделяемых соединений и сложности смеси. Иногда и 100 мг за ввод не удается хорошо поделить.
2. Если преп в градиенте при скорости (обычно) 20 мл/мин, то для такой колонки 5 мкм и не обязательно. 7-10 мкм - не сильно изменит картину, но давление снизит - точно! Да и стоимость колонки чуть пониже будет.
В итоге. Если я Вас правильно понял: Вам нужно устанавливать состав из растительных экстрактов, в основном - полифенолы? Желательно для Вас препартив и аналитика на одном приборе? А препаратив должен получать фракции не менее 10 мг каждого копонента для ЯМР (5 мг) и прочих идентификаций. Очень интересно.

Если это так, я бы задумался о том, что Вам придется работать с 2 колонками - 21,2*250 (150) мм, 10 мкм для предварительного фракционирования и 10*250 мм, 5мкм для более тонкого разделения. Иначе чистых фракций для ЯМР Вам не видать. Может даже взял бы вместо ID 21,2 мм - колонку с ID 30 мм. Большая длина в препе не так важна в градиенте, тем более для фракционирования. Потоки 30 мл/мин (30 мм) и 7-8 мл/мин (10 мм). Не забудьте предколонки к 21,2 и 30 мм колонкам, правда я не знаю какая предварительная очистка Ваших объектов.
И берёте 2 ячейки - препаративную и аналитическую к DAD?
Извините за...

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

18.07.2014 // 18:35:11

Редактировано 2 раз(а)

Osokin пишет:
Если я Вас правильно понял: Вам нужно устанавливать состав из растительных экстрактов, в основном - полифенолы? Желательно для Вас препартив и аналитика на одном приборе? А препаратив должен получать фракции не менее 10 мг каждого копонента для ЯМР (5 мг) и прочих идентификаций. Очень интересно.

Да, вы правы, но про ЯМР -- это я в перспективе, хотя, иногда прибегаем к этому методу. Это в общем, а в частности, в нашем объекте, например, есть нечто, что в условиях ТСХ для нейтральных ацилглицеринов "идёт" чуть ниже sn-2-моноацилглицеринов, но не является ни фосфо-, ни сульфо- липидом, основное подозрение на то, что это sn-2-ацил-3-ацетилглицерин, но доказать можно только с помощью ЯМР. Выделить фракциию препаративно, да ещё и сохранив нативность вещества, предотвращая миграцию ацила из sn-2 в sn-1 положение, в количествах, приемлемых для двумерной ЯМР, почти не реально с помощью колоночной или тонкослойной хроматографии -- вот в подобных случаях и надеемся, что выручит HPLC с возможностью сбора фракций. А сделать это критически надо, так как если это подтвердится, то ряд взглядов принятой сегодня биохимии растений придётся подкорректировать, так что дело чести, как понимаете

Хотя, прибор не покупается только под одну задачу -- подобные проблемы встречаются часто, я лишь пример привёл

В целом, система берётся для липидомных исследований, пигментных пулов, в том числе, эфиров каротиноидов, которые в тонком слое не хотят отделяться от прочих нейтральных липидов как не изголяйся. Ну и вторичные метаболиты, полагаю, тоже придётся идентифицировать, особенно если работать с коллекциями клеточных культур редких растений.
Т.е. нужна машинка более или менее универсальная, потому и DAD как must have, возможно, позднее докупим хотя бы базовый квадрупольный MS, если финансирование сохранится.
Пытался у Shimadzu узнать про насосы с меньшими потоками, у них, увы, либо 10, либо 20, либо 150 -- на 50 нет ничего. Но по поводу их нового LC 20AD Prominence клянутся что:

Flow-rate accuracy: No more than ± 1% (water, 1 mL/min, 10 MPa, 20 - 30 °C constant temperature)
Flow-rate precision: No more than 0.1 %RSD or 0.02 minSD, whichever is greater

И, конечно же, хочется иметь в одном приборе аналитическую и препаративную линию, так как, если я правильно понимаю, отработав условия разделения на аналитической колонке, можно их масштабировать на препаративную, без особой потери в качестве разделения (верю в этом вопросе виденным примерам разделения в литературе) — что позволит экономить растворители

)

cholesterol
Пользователь
Ранг: 109

30.07.2014 // 19:14:17

Chamomillablue пишет:

Обычно на колонке 10*250 вполне можно и 50-100-200 мг можно поделить, а уж Ваши 30 мг тем более. Скорости потока на таких колонках редко когда больше 6 мл/мин, так что берите просто насос LC-20AT, он, вроде, до 20 мл/мин. Для Ваших задач подойдет.


Ответов в этой теме: 46 Страница: 1 2 3 4 5 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты