Форумы ANCHEM.RU: Проблемы с автосемплером HPLC

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Проблемы с автосемплером HPLC >>>

Ответов в этой теме: 7

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Проблемы с автосемплером HPLC

boberk
Пользователь
Ранг: 105

10.10.2014 // 16:43:36

Добрый день.

Имеем проблему с работой автосемплера SIL-30ACmp (Shimadzu).
До этого всегда использовали ручные.

Проблема в том, что отсутствует воспроизводимость в серии инжекций. Начиная со второй инжекции острота пика серьезно ухудшается (МФ - ACN и 0.1% HCOOH, градиент, 0-3-4 мин - 10-30-10% ACN) (рис. 1).

А в изократическом режиме (15%ACN) основной пик выходит двойным горбом (рис. 2).

А также выходит пик приблизительно на 0,56 мин (мертвое время - 0,52) неизвестной природы (рис. 1 и 2).
Связываем это с влиянием автосемплера. Каким - не знаем.

Как вы считаете, что это может быть?
Спасибо.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

cholesterol
Пользователь
Ранг: 109

10.10.2014 // 17:33:12

1. Возможно у Вас не полностью уравновешивается колонка и из-за этого первый закол так отличается от всех последующих. Попробуйте увеличить время уравновешивания после закола до 5-10 объемов колонки, либо не учитывайте данные первого закола.
2. Основной пик выходит горбом из-за того, что растворитель в котором растворена проба отличается от состава подвижной фазы и, скорее всего, обладает большей элюирующей силой, чем подвижная фаза.
3. Такая синусоидальная базовая линия из-за того, что миксер плохо смешивает подвижную фазу. Либо увеличивайте объем миксера, либо предварительно готовьте элюент А: буфер А с 10%ACN, а элюент В: буфер А с 30%ACN.
Пик на 0,56 мин это см. пункт 2. Желательно чтобы состав промывочного раствора для автосэмплера не сильно отличался от состава подвижной фазы.

boberk
Пользователь
Ранг: 105

13.10.2014 // 10:32:17

Большое спасибо.

boberk
Пользователь
Ранг: 105

28.01.2015 // 15:53:05

Редактировано 1 раз(а)

Пользователь удалил свое сообщение

virtu
VIP Member
Ранг: 2135

28.01.2015 // 18:46:28

Редактировано 3 раз(а)

boberk пишет:
Теперь считаем, что виноваты насосы.

Да, это видно еще на первых картинках. Поставьте старый миксер. Клапана насосов есть на замену? Если нет - попробуйте помыть (клапан разбирать обязательно, если это возможно). Еще иногда помогает прокачивание дегазированной воды со скоростью в 50-80% от максимально возможной (без колонки, конечно же).

Пик 0.56мин - это нормально (рефрактометрический пик).

Уширение пика аналита - скорее всего не связано с "барашками" на базовой линии, а вызвано некорректными хром. условиями (т.е., как правильно заметили выше, физ.-хим. равновесие не успевает восстанавливаться).

Дискриминация хром. полосы (горб) - есть вероятность, что неверный выбор растворителя пробы и относительно большой объем инжекции.

Волгин
VIP Member
Ранг: 1327

28.01.2015 // 19:40:35

Приготовьте 15%-ный раствор ACN (остальное - по Вашей методике), продегазируйте (скажем, фильтрованием под вакуумом) и покачайте его сначала одним насосом, затем другим. По характеру базовой линии Вы скорее всего определите, в каком насосе клапан(ы) неисправны. Только при бОльшем усилении сигнала. Зная, в каком насосе неисправность, мойте и чистите их , как указал великий Virtu

, кстати часто помогает прокачка изопропанолом. И попробуйте воспроизвести тест-хроматограмму колонки: не исключено, что сорбент просел.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

УФ-Вид спектрофотометр Varian CARY 50
Недорогой прибор для рутинных измерений с широкими возможностями по расширению за счет большого выбора различных приставок и аксессуаров для анализа как жидких, так и твердых образцов

[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]

Osokin
Пользователь
Ранг: 54

28.01.2015 // 20:02:02

Редактировано 1 раз(а)

Мне кажется, что это работа клапанов LPG. У Вас LPG или HPG?
Если LPG, то далее мои предположения. Было 2% ацетонитрила (видимо на одной линии чистый ацетонитрил), клапан открывался с одной скоростью, стало 5%, стал открываться в 2,5 раза чаще. Колебания участились. Правда, я не понял - это давление или поглощение детектора?

В общем, какая вводная, такое и предположение.

boberk
Пользователь
Ранг: 105

29.01.2015 // 10:22:08

Редактировано 3 раз(а)

Прошу прощения за дезинформацию.
Написал не в ту тему. Сейчас напишу в правильную www.anchem.ru/forum/read.asp?id=18829
Еще раз прошу прощения за отнятое время.


Ответов в этой теме: 7	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты