| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Определение органических кислот на ВЭЖХ >>>
|
 |
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
 19.11.2014 // 22:41:18
Чушь собачья- с разделением кислоты и аниона. Чел делала анализ при рН=2.9 и ничерта у нее не разделялось. Раздвоение пика может быть вызвано разными причинами, но никак не "раздельным определением" кислоты и ее сопряженного основания. И неважно, какой бред на эту тему тут "неоднократно обсуждался". |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
kump Пользователь Ранг: 3190 |
19.11.2014 // 22:53:26
Снижение рН среды устраняет раздвоение пика как при ВЭЖХ так и при ГХ проверено лично на практике. А вы делали подобного рода анализы? |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
20.11.2014 // 1:14:50
Редактировано 4 раз(а) Serga прав. Сам писал об этом выше, правда в намного более мягкой форме. Дискриминация хроматографической полосы происходит на первых стадиях сорбционного процесса, а в раздвоенном пике аналит уже в молекулярной форме. Kump, Вы просто немного неточно выразились в том посте. Насчет рН сэмпла, достаточно, чтобы оно было <pKa или равно pH элюента. Плюс, конечно, пробу просто нужно разбавлять/растворять элюентом, т.к. ионная сила инжектируемого раствора и компоненты матрицы то же могут играть роль в дискриминации, т.е. pH не единственный параметр, который влияет на дискриминацию в данной ситуации (органические кислоты, ОФ ВЭЖХ). Насчет раздвоение пиков органических кислот в ГХ в зависимости от pH проб (достаточно много работал и периодически работаю с органическими кислотами без дериватизации) - что-то не припомню такого (сплит/капиллярные колонки, прямой ввод/насадочные). Такое, конечно, может быть в сплите при работе в изократе, но это связано уже с дискриминацией состава пробы в испарителе. Ну, соотв. при работе с конденсацией растворителя - такое запросто может быть 
|
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
20.11.2014 // 2:02:11
Редактировано 2 раз(а) Скажем, она просто недостаточно высока (HA + H2O<>A- + H3O+). Скажем, если бы поток в капиллярах тракта был не ламинарным и/или коэффициенты мол. диффузии были бы, как в газах, и/или линейная скорость элюента в капиллярах тракта была бы значительно меньше, то было бы все ОК. А так, инжектированная жидкость входит в слой сорбента и ионы аналита просто "проскакивают" первые теоретические тарелки, пока не перейдут в молекулярную форму и не начнут/продолжат в другом "качестве" участвовать в сорбционном процессе ("ОФ механизм"). Кстати, объем инжекции при этом (дискриминация) тоже играет значительную роль. pH элюента тоже, отчасти, вносит свой вклад. |
||
|
kump Пользователь Ранг: 3190 |
20.11.2014 // 10:29:52
Калибровка-то делалась на ионной форме и при этом раздвоения не наблюдалось т.е. получается что ионы не проскакивали. Экстракт же из хлеба изначально содержит ионную форму (остаточный пропионат кальция и пропионовую кислоту, ради образования которой его и добавляют и которая образуется при высокой температуре за счёт гидролиза, и связывания образующегося гидроксида кальция имеющимся в хлебе углекислым газом. (Замедлитель черствения, консервант или что-то такое) Насчёт ГХ. Колонка FFAP 50м, сплит 1:30, водород, Температурную программу не помню, что-то от 120 до 180 или даже изотермия, водные экстракты из микробиологических сред, кислоты от С2 до С6, включая изомеры, выходили раздвоенными. Подкисление образцов 0,1н HCl (варварство конечно, но заставили) раздвоенность устранило. То же самое было и с водными растворами при калибровке. |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
20.11.2014 // 12:01:23
Этот факт потерял Спасибо Значит дело, как писал выше, в компонентах матрицы. Вообщем, что говорить - с большой вероятностью все будет ОК, если ТС начнет разбавлять пробы и стандарты элюентом.Это неизвестно. Хлеб же это не вода. Да, это дискриминация состава пробы в испарителе. Классика, так сказать. |
||
|
kump Пользователь Ранг: 3190 |
20.11.2014 // 12:18:12
Интересно, может ли СТ ввести пропионат и пропионовую к-ту и по временам удерживания посмотреть совпадает ли время выходов с вершинами раздвоенных пиков? Или это за пределами возможного? Поясните пожалуйста насчёт дискриминации в испарителе, и почему эффект исчезает при подкислении? Вы в своих работах наверное кололи всё-таки не водные растворы кислот? А меня заставили Когда-то с Вами мы про это говорили. |
||
|
chemistan Пользователь Ранг: 25 |
20.11.2014 // 15:37:24
Э-э-э, господа, я работаю на ВЭЖХ, не на ГХ! Пропионат кальция и пропионвую кислоту отдельно не пробовала, но можно проверить. Есть и то , и это в чистом виде. Все-таки пики в образцах не стабильны, то есть раздвоение, то нет, несмотря на подкисление пробы. Возможно, нужно пробовать на другой колонке... |
||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
20.11.2014 // 20:48:22
Редактировано 1 раз(а) Кто бы сомневался. Они знают. Сейчас речь не о вас. Мы стараемся понять суть ионизации. Если сказано, что рН раствора 2,9, это означает, что пропионовая кислота (рКа= 4,87) в этом растворе существует практически полностью в протонированной форме. (И неважно, что ты изначально совал в этот раствор соль этой кислоты). Согласно ур-я Хендерсона-Хассельбаха, доля ионизированной формы при этом рН составляет около 1%. Остальные 99- в виде С2Н5СООН. Сбавив рН до 2.0 вы уменьшите ее долю до ~0,11 %. (Возникает вопрос- нафига заставлять вас еще понижать рН элюента, если это ничего не даст, кроме увеличения риска погубить колонку? Не говоря уже о бессмысленном утверждении о возможности разделения ионной и неионной формы?) Как совершенно справедливо заметил пользователь абр на предыдущей странице, скорость установления равновесия очень велика, чтоб можно было отделять одну форму от другой. Другое дело, что спецэффекты от неправильного подбора растворителя для пробы в ОФ ВЭЖХ могут быть весьма разнообразными, включая и раздвоение пиков, и их безобразное искажение, но это имеет более сложные причины, нежели соотношение ионизированной и "не" форм. Наконец, определять напрямую пропионовую кислоту в ВЭЖХ- это моветон. Нельзя прибегнуть к модификации? |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
21.11.2014 // 15:51:21
Это бессмысленный эксперимент, т.к. там же равновесие и все будет зависить от рН раствора. Грамотный эксперимент - это проколоть ряд стандартов с разным pH (2-10 c шагом 2, например). Плюс, конечно, нужно еще взять разные концентрации (LLOQ-HLOQ, например) и разные объемы инжекции (1-30мкл). Уменьшение остаточной сорбции аналитов в игле (т.е. игла в испаритель входит "чистая" с солянкой), т.е. при вводе способом холодная игла/горячая игла (т.е. когда жидкость выводится из иглы перед инжекцией). Затем следующий этап - испарение пробы (тут многое зависит от лайнера, способа ввода, инертном материале в лайнере и степени его "инертности"). В целом, на этом этапе происходит "задержка" перехода определенной части аналитов в газовую фазу из-за чего мы наблюдаем дискриминацию и т.к. у нас нет концентрирования на колонке (т.е. начальная температура колонки недостаточно низка), то мы и наблюдаем "кривой" пик. "Задержка" может быть вызвана избыточной адсорбционной активностью материала (например, кварцевой ваты) в лайнере (при вводе способом холодная игла). Солянка, здесь выступает, как "конкурент-деактиватор". Это только одно из возможных развитий события. Водные и не водные. Да, вспомнил
|
| |
||
|
Ответов в этой теме: 21
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
