| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Изопропанол или ТГФ вместо ацетонитрильного градиента >>>
|
 |
| Автор | Тема: Изопропанол или ТГФ вместо ацетонитрильного градиента | |||||
|
igorchem Пользователь Ранг: 333 |
 21.10.2015 // 19:06:37
Редактировано 1 раз(а) Добрый день, попробовал на днях разделить смесь пептидов используя градиент ацетонитрила с водой 0-40% с добавлением 0.1% уксусной кислоты (ТФУ пока не приехала) и результаты понравились, пики, вернее гора пиков получилась. Есть большое желание в связи со спецификой сенсора, отказаться от ПФ, в которой есть CN группа, да и азот вообще. O, C, H, F, Cl - подойдут, а вот азота хотелось бы избежать. Сейчас смотрю в сторону ТГФ и изопропанола, понятно тоже градиент. В описанию к тем колонкам, что у меня есть (С18, С8, CN, фениловая) везде рекомендуют градиент ацетонитрила, и, как я понимаю, с завода они были залиты именно ацетонитрильным раствором. Скажите, пожалуйста 1. можно ли перейти на другую ПФ и какую (изопропанол, ТГФ или еще что-то), 2. в каком растворе консервировать колонки Спасибо! |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
21.10.2015 // 22:04:36
Никакой разницы, только взять надо в 3 раза меньше. И от изопропанола будет бешеное давление, а от ТГФ будет вонять 
|
|||||
|
igorchem Пользователь Ранг: 333 |
21.10.2015 // 22:51:58
ой, вот же я тормоз и про давление сразу не подумал, спасибо большое, что надоумили. Скажите, пожалуйста, а правильно ли я понимаю, что ацетон вместо ацетонитрила обычно не применяют из-за того, что он в УФ имеет линии? А если у меня детектор другого типа и мне эти линии "ультрофиолетовы", то я могу попольозовать ацетон вместо ацетонитрила? Если да, вдруг кого-то не затруднит сказать в каких разумно пропорциях? Спасибо! |
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
22.10.2015 // 11:52:14
Да, из-за УФ поглощения его применяют нечасто. Да, без УФ разницы никакой. По идее, он как ТГФ, так что его надо взять тоже раза в 3 меньше. |
|||||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
22.10.2015 // 12:19:43
Ацетонитрил для ВЭЖХ - это, как кровь для человека Это очень плохо, что Ваш детектор не любит ацетонитрил. Метанол, в данной ситуации, является намного более подходящей заменой, чем ИПС и тем более ТГФ.
|
|||||
|
igorchem Пользователь Ранг: 333 |
22.10.2015 // 15:01:12
Редактировано 1 раз(а) Скажите, пожалуйста, а если сравнить метанол и ацетон, вроде у последнего вязкость почти в 2 раза меньше, что было бы предпочтительнее? если делить вещества, содержащие азот, пептиды например, то ПФ очень желательно иметь без содержания азота, тогда детектирование по азоту получается очень быстрым и можно в реальном времени на хорошей скорости (около 10мл/мин) видеть пики и даже чуть-чуть больше, то есть спектры (я еще так не делал, но почти уверен, что так получится на основе экспериментов с моим сенсором). Если в разделяемой смеси у меня азота нет, то детектор будет работать только на возбуждении Н и С, что конечно хуже для скорости (думаю раз так в 20, а то и в 50), но тогда я могу использовать ацетонитрил как все нормальные люди. Просто хочу выжать из своей методики все, что можно
|
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1327 |
22.10.2015 // 16:34:17
Редактировано 1 раз(а) ТГФ очень ядовит, вонюч, склонен к образованию гидроперекисей, которые в свою очередь взрывоопасны при высушивании и очень реакционноспособны, зачастую по отношению к объекту исследования. Изопропанол и его смеси с водой очень вязки, но если у Вас колонки с 10-микронным сорбентом или очень низкая по сравнению с обычным анализом объемная подача насоса, то прокатит. То же самое, но в меньшей степени относится к этанолу и в еще меньшей - к метанолу. Но спирты легко образуют сложные эфиры с кислотами, часто используемыми для перевода пептидов в заряженное или наоборот незаряженное, в зависимости от природы пептида, состояние. А сложные эфиры, особенно метилтрифторацетат - весьма летучи. Вам нужны пузыри в Вашем детекторе? Можно слегка защелачивать спиртовую подвижную фазу, но необходимо контролировать степень защелачивания: при рН > 9, а то и 8 многие основанные на силикагеле неподвижные фазы начинают растворяться. Ацетон также весьма вонюч и нехорошо действует на печень. Кроме того он сам весьма реакционноспособен и как в кислых, так и в щелочных условиях способен ди- и полимеризоваться. Реакция правда достаточно медленная и сразу после приготовления (в течение нескольких часов) можно работать. Последнее впрочем нужно проверять, поскольку с сильными кислотами и щелочами в смеси с ацетоном я не работал. |
|||||
|
igorchem Пользователь Ранг: 333 |
22.10.2015 // 17:20:07
а про полимеризацию ацетона-то я тоже забыл, забьется сразу колонка-то, не дело это. А этилацетат, в качестве компонента градиетна с водным раствором спирта, пользуют? Вдруг кто знает и что-то за или против такого, скажите, пожалуйста! Я понимаю, что можно просто водой без градиента делить, но будет плохо и пики сильно размажутся, чего не хочется. Но все в поисках разумной ПФ без азота для обращенки. |
|||||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1327 |
22.10.2015 // 18:50:08
Редактировано 1 раз(а) Ну, не настолько это страшно! Во всяком случае попробовать стоит. |
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
22.10.2015 // 20:05:16
Редактировано 1 раз(а) Ацетонитрил применяется только из-за УФ детектирования, в остальном он легко заменяется чем угодно другим. Я бы ориентировался на ТГФ, поскольку привычка использовать его в обращенной-фазе есть, да и надо его максимум 30%, можно его отдельно один раз развести водой и такой раствор и использовать. В гидрофильной все будет получаться даже лучше, чем с ацетонитрилом, но... тут его доля будет около 60-70%, то есть в плане капилляров - только сталь. Ну, в ионной без проблем... В эксклюзии это вообще стандартный растворитель. В нормальной фазе - тоже (в смеси с гексаном). Ацетон тоже забавно, только привычки не наработано. Ацетон обычно кладут когда работают с каротеноидами (они красные, там УФ не нужен). А формально - не должно быть никаких проблем. |
|||||
|
igorchem Пользователь Ранг: 333 |
22.10.2015 // 21:35:45
Редактировано 5 раз(а) буду пробовать, игра стоит свеч, при потоке 10мл/мин я ожидаю чувствительность моего сенсора по азоту примерно 200нг пептида на пик, а при потоке 0.1мл/мин, примерно 5нг на пик. Отпишусь как попробую, очень надеюсь, что получится похвалиться А по поводу ТГФ на PEEK капилляры, пожалуйста, посвятите! У меня сейчас помпа, колонки, семплеры, инжекторы, и все соединения между ними - сталь, а вот сам сенсор - там все сложнее - мне надо было соединять его внутренний кварц с внешним миром и я использовал UPP-630, который соединяется в PEEK капилляр длиной около 30см и через еще один UPP-630 уже на металл. Теоретически я могу перейти на сталь везде, оставив UPP-630 в качестве переходника, но ужасно не хотелось бы. Тем более, что я уже забил на мысль гонять мой сенсор под давлением. Скажите, пожалуйста, правда, что ТГФ PEEK-овский капилляр и Tefzel-овский юнион может разъесть? EDIT: да, правда, сам нашел, вот же засада. Значит, буду ацетон пробовать. Жалко, ТГФ даже под рукой есть, хотя и ацетон - тоже, только не понятно насколько чистый. EDIT++: вот засада, PEEK от ацетона тоже портится! А на сталь я быстро не перейду, там все очень не тривиально... |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
