Форумы ANCHEM.RU: ВЭЖХ. Как лучше подкислить н-гексан?

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ВЭЖХ. Как лучше подкислить н-гексан? >>>

  Ответов в этой теме: 47
  Страница: 1 2 3 4 5
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

virtu
VIP Member
Ранг: 2135

29.06.2016 // 1:05:42

Chamomillablue пишет:
Как долго промывать iPrOH/водой и т.д.? Фосфорной нет, увы.. И цветность проконтролировать как-то непросто, по-моему у ВЭЖХ колонки

Попробуйте ИПС : Вода 1:9 при потоке 0.2 - 0.4 мл/мин оставить на ночь. Очевидно, что перед и после "операции" нужно промыть колонку ИПС (не менее 40 мл). Честно сказать, сильно сомневаюсь, что какие-либо промывки Вам сильно помогут. Полностью восстановить силикагель для адсорбционной НФ ВЭЖХ после использованных Вами элюентов, на мой взгляд, невозможно. Но Вы обязательно попробуйте.

Chamomillablue пишет:
И когда в норме должны элюироваться ТАГи на такой колонке, если 4 минуты -- это слишком рано?

Да, при потоке 1.0 мл/мин, можно сказать, что они вообще не удерживаются сорбентом. Кстати, есть немаленькая вероятность, что ацетаты МАГов и ДАГов тоже не удерживаются и выходят вместе с ТАГами в одном пике.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Lipids
Пользователь
Ранг: 459

29.06.2016 // 4:40:58

Chamomillablue пишет:
Как долго промывать iPrOH/водой и т.д.? Фосфорной нет, увы.. И цветность проконтролировать как-то непросто, по-моему у ВЭЖХ колонки
И когда в норме должны элюироваться ТАГи на такой колонке, если 4 минуты -- это слишком рано?

А это зависит от того, что у вас на колонке. Качать надо не быстро, следя за давлением. Фосфорную кислоту постарайтесь найти - она очень хорошо счищает с силикагеля грязь и хорошо активирует силанольные группы.

Насчет времен выхода - на 4 минуте выходят углеводороды, насколько я помню, а этиловые-метиловые эфиры минуте на 6-7, ТАГи - еще позднее. Минут 8-10.

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

29.06.2016 // 10:19:07

virtu пишет:
Попробуйте ИПС : Вода 1:9 при потоке 0.2 - 0.4 мл/мин оставить на ночь. Очевидно, что перед и после "операции" нужно промыть колонку ИПС (не менее 40 мл). Честно сказать, сильно сомневаюсь, что какие-либо промывки Вам сильно помогут. Полностью восстановить силикагель для адсорбционной НФ ВЭЖХ после использованных Вами элюентов, на мой взгляд, невозможно. Но Вы обязательно попробуйте.

То есть, теперь эта колонка годится только для того метода, которым мы пользовались ранее, т.е. для фосфолипидов в той ПФ с серной к-той? или она вообще больше ни для чего не годится?
Меня несколько удивило это... ведь метод не с потолка взяли, а нашли в одной статье из весьма приличного журнала, да и Сычёв в своей книге писал, что только минеральные кислоты нужно использовать, чтобы не модифицировать силикагель, как это бывает при работе с органическими

virtu
VIP Member
Ранг: 2135

29.06.2016 // 11:17:33

Chamomillablue пишет:
То есть, теперь эта колонка годится только для того метода, которым мы пользовались ранее, т.е. для фосфолипидов в той ПФ с серной к-той?

Не только. На этой колонке можно решать ещё много различных задач в других режимах. Попробуйте помыть, если не поможет, то ищите новую колонку для текущей задачи.

Chamomillablue пишет:
Меня несколько удивило это... ведь метод не с потолка взяли, а нашли в одной статье из весьма приличного журнала

Ну, а где здесь противоречие? В статье разве написано и доказано, что после такого элюента можно без проблем вернуться в адсорбционный нормально-фазовый режим?

Chamomillablue пишет:
да и Сычёв в своей книге писал, что только минеральные кислоты нужно использовать, чтобы не модифицировать силикагель, как это бывает при работе с органическими

Непонятный и спорный тезис. Лучше читайте классику (и не только) от Снайдера и др.

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

29.06.2016 // 19:16:47

Редактировано 1 раз(а)

Похоже, с колонкой все более или менее нормально.
Сегодня взял у коллег новую точно такую же.
Чистым гексаном раствор масла 1,5 мг/мл не элюируется и за 45 минут -- пика ТАГов не видно. Добавление же 1% 2-пропанола приводит к тому, что их пик совпадает с системным.
1% ИПС даёт 2 отдельных пика для системного пика и ТАГ: 3,2 и 4 минуты.
Сделать долю ещё меньше в условиях бинарного градиента не смогу -- у насоса LC 20AP 1% при скорости 1 мл/мин -- потолок

Как лучше поступить? Заменить чем-нибудь ИПС или попробовать градиент от 0 до 2-3% за какое-то относительно длительное время (за 10-15 минут, допустим), чтобы нулевая не шалила?
Смущает, что после выхода большого пика ТАГ нулевая линия поднимается и долго не возвращается к нулю.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

ВЭЖХ/МС Thermo Fisher Scientific Exactive™
Новый масс-спектрометр высокого разрешения, построенный на базе орбитальной ловушки Orbitrap™. Высокое разрешение, точное определение массы, быстрое сканирование делают этот прибор идеальным как для скрининга компонентов в сложных смесях, так и при исследованиях, требующих предельной точности анализа.

[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]

Lipids
Пользователь
Ранг: 459

29.06.2016 // 19:53:29

Chamomillablue пишет:
Сделать долю ещё меньше в условиях бинарного градиента не смогу -- у насоса LC 20AP 1% при скорости 1 мл/мин -- потолок

Вы приготовьте 1% (вариант, 1-2-3%) ИПА в гексане - раствор Б, а раствор А - чистый гексан.

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

29.06.2016 // 20:18:10

Lipids пишет:
Вы приготовьте 1% (вариант, 1-2-3%) ИПА в гексане - раствор Б, а раствор А - чистый гексан.

О! Чукча эту мысль не подумал, хотя таким приёмом уже пользовался. Спасибо!

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

29.06.2016 // 22:56:43

Lipids пишет:
Вы приготовьте 1% (вариант, 1-2-3%) ИПА в гексане - раствор Б, а раствор А - чистый гексан.

Попробовал сделать градиент ИПА с 0 до 5% за 25 минут -- ТАГи появляются на 17-й минуте, пик хороший, симметричный и т.д., но! после этого пика нулевая не возвращается к нулю, а очень долго фонит на стабильно высоком уровне (около 50 мАU), к концу анализа, когда система возвращается к 100% гексану, все нормализуется. Причем, подъем линии происходит РЕЗКО и сразу после пика ТАГов.
Я с таким не сталкивался... что это может быть?

virtu
VIP Member
Ранг: 2135

30.06.2016 // 10:54:35

Редактировано 1 раз(а)

Chamomillablue пишет:Я с таким не сталкивался... что это может быть?

Выложите, плиз, картинки. Плюс, не забывайте, у Вас градиент, поэтому дрейф базовой, особенно на 212нм, неизбежен.

Да, и лучше Вам изократ подобрать (см. Lipids), либо градиент не с нуля ИПС делать. В текущих условиях время уравновешивания будет относительно большим.

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

30.06.2016 // 17:35:51

Редактировано 5 раз(а)

Lipids пишет:
Вы приготовьте 1% (вариант, 1-2-3%) ИПА в гексане - раствор Б, а раствор А - чистый гексан.

Взял 5% ИПС в гексане, на 8 минуте ТАГи появляются при соотношении 60:40 А/Б, но пик уродливый, сильно хвостит, с двумя-тремя вершинами, похоже, ТАГи начинаются уже между собой делиться.
может, стоит добавить 0,01-0,05% TFA или лучше взять ледяную уксусную? Сычёв о последней пишет как об очень нужном элементе в деле адсорбционной модификации силикагеля для получения воспроизводимости времен удерживания и площадей...
или вообще заменить ИПС на... Et2O?
если сделать А/Б 55/45, ТАГи появляются на 7 минуте, но пик всё-равно двухвершинный с правым хвостом, полагаю, дальше увеличивать долю ИПС нет смысла, и без градиента (легкого) тут уже не пройти.
Поглядел старые статьи, часто используют градиент гексан-МТБЭ для таких целей, но такого зверя у нас не водится..

Если же сделать градиент плавный, то, полагаю, подъем нулевой линии можно будет просто учесть при интегрировании?


Ответов в этой теме: 47 Страница: 1 2 3 4 5 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты