Форумы ANCHEM.RU: ВЭЖХ. Как лучше подкислить н-гексан?

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ВЭЖХ. Как лучше подкислить н-гексан? >>>

  Ответов в этой теме: 47
  Страница: 1 2 3 4 5
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

virtu
VIP Member
Ранг: 2135

01.07.2016 // 20:57:07

Редактировано 1 раз(а)

Chamomillablue пишет:
может, стоит добавить 0,01-0,05% TFA или лучше взять ледяную уксусную? Сычёв о последней пишет как об очень нужном элементе в деле адсорбционной модификации силикагеля для получения воспроизводимости времен удерживания и площадей...

Не надо добавлять ТФУК. Если руки чешутся, то возьмите УК. При помощи УК меняется режим из адсорбционного в распределительный, который тоже имеет свои плюсы и минусы. Но, такой переход работает и при увеличении концентрации ИПС (и другого полярного модификатора) выше определенного уровня. Минус работы с УК, как и с любым сильным модификатором элюента, в том, что нужно очень точно и аккуратно оптимизировать его концентрацию. Небольшой перебор - будет красивый пик, но на 4-ой минуте

Chamomillablue пишет:
или вообще заменить ИПС на... Et2O?

Попробуйте.

Chamomillablue пишет:
если сделать А/Б 55/45, ТАГи появляются на 7 минуте, но пик всё-равно двухвершинный с правым хвостом, полагаю, дальше увеличивать долю ИПС нет смысла, и без градиента (легкого) тут уже не пройти.

Попробуйте градиент делать не с нуля, а с определенной концентрации ИПС. Пробу при этом растворяйте в стартовом составе элюента.

Chamomillablue пишет:
Если же сделать градиент плавный, то, полагаю, подъем нулевой линии можно будет просто учесть при интегрировании?

Конечно.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

01.07.2016 // 23:56:40

virtu пишет:
[Минус работы с УК, как и с любым сильным модификатором элюента, в том, что нужно очень точно и аккуратно оптимизировать его концентрацию. Небольшой перебор - будет красивый пик, но на 4-ой минуте

Сегодня добавил к 0,5% раствору ИПС (раствор Б) УК до её доли в 0,1%. Стали появляться АсДАГи холмистым пологим пиком при А/Б 60/40. Похоже, они начинают делиться между собой по степени ненасыщенности/массе?
При А/Б 20/80 у холма появляются 4 острые вершины. Думаю, при 100% Б они сольются в один пик, вот только где при этом окажутся ТАГи? (
Сплошная мука )))

G.Baram
VIP Member
Ранг: 211

02.07.2016 // 12:40:43

Чтобы упорядочить дискуссию, хочу сделать несколько замечаний общего плана.
1. Никакая кислота в гексане диссоциировать не может, поэтому добавлять её в гексан смысла нет. Приливать водную кислоту в гексан тем более бесполезно, потому что она с гексаном не смешается.
2. Триацилглицерины и ацетаты моноацилглицеринов - вещества не ионогенные и их форма от рН никак не зависит. Другими словами, от величины рН (а в гексане понятие "рН" весьма условное, поскольку ионов водорода в гексане практически быть не может) хроматографическая подвижность названных веществ не зависит.
3. Хроматографировать названные вещества на силикагеле трудно, т.к. их хроматографическая подвижность очень сильно зависит от содержания в элюенте воды, содержание которой даже в гексане может колебаться от 0,001 до 0,01%, если специально не сушить гексан и не хранить его в атмосфере, не содержащей пары воды. Чтобы вода не мешала, в гексан добавляют 0,1-1 % изопропанола. Может оказаться, что элюент при этом станет слишком сильным и аналиты выйдут в свободном объеме.
Вывод: хроматография триглициридов на силикагеле - процедура плохо воспроизводимая и относится к "высшему пилотажу".
4. Градиентная хроматография на силикагеле - плохое решение. Вернуть колонку в исходное состояние (регенерировать) трудно и долго. В зависимости от параметров градиента это потребует прокачивания начального элюента (элюент А) в объеме 10-50 мертвых объемов колонки. По этой причине подавляющее число методик разделения на силикагеле изократические.
5. Триглицириды намного легче хроматографировать на колонке с обращенной фазой типа С18 или С8. Элюент здесь должен быть сильным. Например: метанол-изопропанол (50:50). Лучше всего применять градиент от метанола до смеси метанола с изопропанолом (50:50; 25:75) в зависимости от конкретной обращенной фазы. Если метанол и изопропанол хорошего качества, то детектирование при 212 нм вполне возможно.

...Примерно так

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

02.07.2016 // 15:56:10

Редактировано 2 раз(а)

G.Baram пишет:
Чтобы упорядочить дискуссию, хочу сделать несколько замечаний общего плана.
1. Никакая кислота в гексане диссоциировать не может, поэтому добавлять её в гексан смысла нет. Приливать водную кислоту в гексан тем более бесполезно, потому что она с гексаном не смешается.
2. Триацилглицерины и ацетаты моноацилглицеринов - вещества не ионогенные и их форма от рН никак не зависит. Другими словами, от величины рН (а в гексане понятие "рН" весьма условное, поскольку ионов водорода в гексане практически быть не может) хроматографическая подвижность названных веществ не зависит.
3. Хроматографировать названные вещества на силикагеле трудно, т.к. их хроматографическая подвижность очень сильно зависит от содержания в элюенте воды, содержание которой даже в гексане может колебаться от 0,001 до 0,01%, если специально не сушить гексан и не хранить его в атмосфере, не содержащей пары воды. Чтобы вода не мешала, в гексан добавляют 0,1-1 % изопропанола. Может оказаться, что элюент при этом станет слишком сильным и аналиты выйдут в свободном объеме.
Вывод: хроматография триглициридов на силикагеле - процедура плохо воспроизводимая и относится к "высшему пилотажу".
4. Градиентная хроматография на силикагеле - плохое решение. Вернуть колонку в исходное состояние (регенерировать) трудно и долго. В зависимости от параметров градиента это потребует прокачивания начального элюента (элюент А) в объеме 10-50 мертвых объемов колонки. По этой причине подавляющее число методик разделения на силикагеле изократические.
5. Триглицириды намного легче хроматографировать на колонке с обращенной фазой типа С18 или С8. Элюент здесь должен быть сильным. Например: метанол-изопропанол (50:50). Лучше всего применять градиент от метанола до смеси метанола с изопропанолом (50:50; 25:75) в зависимости от конкретной обращенной фазы. Если метанол и изопропанол хорошего качества, то детектирование при 212 нм вполне возможно.

...Примерно так

Про С18 я думал, но проблема в том, что на С18 ТАГи начинают делиться между собой по молекулярным видам, а мне нужно в экстракте определить ТАГ, АсДАГ, ДАГ и 2-МАГ, по-возможности максимально быстро.
Раньше для этой цели я использовал пТСХ с ГЖХ-МС собранных фракций. Это слишком трудоёмко и долго, особенно когда счет идёт на десятки образцов

в условиях аналитической ТСХ на силикагеле ТАГ от АсДАГ отлично делятся в системе гексан:эфир:ледяная уксусная 80:20:0,05. Можно ли такую ПФ перенести на ВЭЖХ? И вообще, как-то соотносятся ПФ и результаты разделения на ТСХ с ВЭЖХ?
Я нашел довольно много в литературе примеров решения моей задачи на НФ ВЭЖХ, но! Там почти всегда градиент с изократической составляющей и работа на CAD или ELSD. У меня в распоряжении только рефрактометр, который не видит пики ТАГ даже при концентрации последних в 15 мг/мл (петля на 20 мкл), и DAD. Вот и пытаюсь изголяться..
Сегодня в ПФ Гексан/ИПС/УК 497-2,5-0,5 получил пики ТАГ и АсДАГ с временами удерживания 4,2-4,4 и 7,6-7,8 мин соответственно. У ТАГ коэффициент асимметричности пика 1,3-1,4, а вот для АсДАГ -- 0,6-0,7.
Но это изократический режим. Можно ли с такими параметрами уже думать о калибровочной кривой или продолжить подбирать ПФ?

cholesterol
Пользователь
Ранг: 109

03.07.2016 // 12:05:06

Редактировано 1 раз(а)

В книге "Lipid analysis. Isolation, separation, identification and lipidonic analysis." (4 издание) доступно изложено как делить Ваши соединения.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

ЦКП Технологии получения новых наноструктурированных материалов и их комплексное исследование
Приборное и научно-методическое обеспечение прецизионных измерений основных физико- химических характеристик и получение наноструктурированных материалов.

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

03.07.2016 // 12:17:16

Редактировано 1 раз(а)

cholesterol пишет:
В книге "Lipid analysis. Isolation, separation, identification and lipidonic analysis." (4 издание) доступно изложено как делить Ваши соединения.

Эта книга у меня на столе

но в ней нет требуемого.
Если что, Бардвелла я тоже смотрел

virtu
VIP Member
Ранг: 2135

03.07.2016 // 12:40:37

Chamomillablue пишет:
Похоже, они начинают делиться между собой по степени ненасыщенности/массе?

Разделение идёт по полярности, плюс этот режим более селективен к изомерам, чем ОФ ВЭЖХ.

Chamomillablue пишет:
При А/Б 20/80 у холма появляются 4 острые вершины. Думаю, при 100% Б они сольются в один пик, вот только где при этом окажутся ТАГи? (

Вам нужно, чтобы аналиты были в группах, которые Вы можете идентифицировать, т.е. не обязательно, чтобы вся группа была в одном пике, группа аналитов может быть и частично или полностью разделенными пиками. Конечно, лучше, когда итая группа выходит в одном пике, но это не всегда возможно.

Chamomillablue пишет: Сплошная мука )))

Это хроматография

virtu
VIP Member
Ранг: 2135

03.07.2016 // 13:02:03

Редактировано 1 раз(а)

Chamomillablue пишет:
Про С18 я думал, но проблема в том, что на С18 ТАГи начинают делиться между собой по молекулярным видам, а мне нужно в экстракте определить ТАГ, АсДАГ, ДАГ и 2-МАГ, по-возможности максимально быстро.

Да, ОФ ВЭЖХ здесь точно не подойдет.

Chamomillablue пишет:
в условиях аналитической ТСХ на силикагеле ТАГ от АсДАГ отлично делятся в системе гексан:эфир:ледяная уксусная 80:20:0,05. Можно ли такую ПФ перенести на ВЭЖХ?

Можно, но надо будет его ещё дополнительно оптимизировать.

Chamomillablue пишет:
И вообще, как-то соотносятся ПФ и результаты разделения на ТСХ с ВЭЖХ?

Скажем, соотносятся в каких-то основных местах, например, порядок выхода аналитов, когда расстояние между пятнами большое. Но, разрешение в ВЭЖХ существенно выше (т.е. там, где на ТСХ будет одно пятно, на ВЭЖХ будет 4 пика), плюс нет связующего и силикагель не контактирует с атмосферой (насыщение влагой и т.д.) и т.д.

Chamomillablue пишет:
Сегодня в ПФ Гексан/ИПС/УК 497-2,5-0,5 получил пики ТАГ и АсДАГ с временами удерживания 4,2-4,4 и 7,6-7,8 мин соответственно. У ТАГ коэффициент асимметричности пика 1,3-1,4, а вот для АсДАГ -- 0,6-0,7. Можно ли с такими параметрами уже думать о калибровочной кривой или продолжить подбирать ПФ?

Проколите холостую пробу, а затем несколько реальных проб, по которым можно оценить правильность результатов. Если холостая будет нормальная и результаты тоже, то можете калиброваться и т.д. Самое опасное - это "наложения", которые могут быть при анализе реальных проб, т.к. ТАГи выходят очень рано, а там, в реальных условиях, да и на 212 нм, может ещё что-то лезть.

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

03.07.2016 // 13:29:08

virtu пишет:
Проколите холостую пробу, а затем несколько реальных проб, по которым можно оценить правильность результатов. Если холостая будет нормальная и результаты тоже, то можете калиброваться и т.д. Самое опасное - это "наложения", которые могут быть при анализе реальных проб, т.к. ТАГи выходят очень рано, а там, в реальных условиях, да и на 212 нм, может ещё что-то лезть.

В общем, я понял, что без легкого градиента сложно обойтись. Для ТАГ оптимально содержание примерно 0,4% ИПС в гексане, для АсДАГ нужно где-то 0,7-0,9.
Ну либо попробовать добавку с меньшей элюирующей силой...

cholesterol
Пользователь
Ранг: 109

03.07.2016 // 18:56:03

Chamomillablue пишет:

cholesterol пишет:
В книге "Lipid analysis. Isolation, separation, identification and lipidonic analysis." (4 издание) доступно изложено как делить Ваши соединения.
Эта книга у меня на столе но в ней нет требуемого.
Если что, Бардвелла я тоже смотрел

А ведь и правда мало что есть. Единственное упоминание это система гексан-эфир-уксусная кислота (87-12-1), которая похожа на Вашу (гексан:эфир:ледяная уксусная 80:20:0,05). Возможно ее стоит попробовать на ПФ ВЭЖХ, тем более, если вы говорите, что она дает отличные результаты на ТСХ.


Ответов в этой теме: 47 Страница: 1 2 3 4 5 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты