Форумы ANCHEM.RU: Ион-парная хроматография

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Ион-парная хроматография >>>

  Ответов в этой теме: 18
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Ион-парная хроматография

darya1907
Пользователь
Ранг: 9

08.08.2017 // 14:27:13

Добрый день, уважаемые коллеги!
Очень нужен Ваш совет. Я подбираю условия для разделения технологических примесей в АФС. На данный момент оптимальными условиями, обеспечивающими наилучшее разделение, является вот такая хроматографическая система: колонка -Waters Xbridge С 18, 3.5 мкм, 4,6*150 мм;
Элюент А -3 mM TBAHS рН 2,2 (Н3РО4); Элюент В -ACN; Растворитель - 50% EtOH.
Режим элюирования - градиентный. Начальные условия: A:B (73:27).
Но есть проблема, с которой никак не удается справиться - в начале хроматограммы после каждого закола появляется системный пик, площадь которого не воспроизводится для заколов разных растворов. Она воспроизводится для нескольких заколов из одной виалы, но может сильно отличаться для одного и того же раствора в разных виалах.
Я пробовала менять растворитель (этанол, метанол, ацетонитрил в разных соотношениях с водой), также пробовала растворять субстанцию в подвижной фазе (отдельно в 3 mM TBAHS, в 0,02% Н3РО4, в смеси 70% 3 mM TBAHS-30% ACN), но АФС не растворяется в таких условиях. Субстанция растворима в воде, спиртах. Также я пробовала менять ион-парную добавку (тетрагексиламмония гидросульфат, тетрабутиламмония гидроксид), но ситуация с растворимостью повторяется.
Подскажите, пожалуйста, как можно избавиться от этого системного пика?

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

OldBrave
VIP Member
Ранг: 1330

08.08.2017 // 21:22:20

Редактировано 1 раз(а)

1. Попробуйте использовать в качестве растворителя воду.
Как определяете, что вернулись к начальным условиям?

Шушечка
Пользователь
Ранг: 518

09.08.2017 // 8:21:47

darya1907 пишет:
Добрый день, уважаемые коллеги!
Очень нужен Ваш совет. Я подбираю условия для разделения технологических примесей в АФС. На данный момент оптимальными условиями, обеспечивающими наилучшее разделение, является вот такая хроматографическая система: колонка -Waters Xbridge С 18, 3.5 мкм, 4,6*150 мм;
Элюент А -3 mM TBAHS рН 2,2 (Н3РО4); Элюент В -ACN; Растворитель - 50% EtOH.
Режим элюирования - градиентный. Начальные условия: A:B (73:27).
Но есть проблема, с которой никак не удается справиться - в начале хроматограммы после каждого закола появляется системный пик, площадь которого не воспроизводится для заколов разных растворов. Она воспроизводится для нескольких заколов из одной виалы, но может сильно отличаться для одного и того же раствора в разных виалах.
Я пробовала менять растворитель (этанол, метанол, ацетонитрил в разных соотношениях с водой), также пробовала растворять субстанцию в подвижной фазе (отдельно в 3 mM TBAHS, в 0,02% Н3РО4, в смеси 70% 3 mM TBAHS-30% ACN), но АФС не растворяется в таких условиях. Субстанция растворима в воде, спиртах. Также я пробовала менять ион-парную добавку (тетрагексиламмония гидросульфат, тетрабутиламмония гидроксид), но ситуация с растворимостью повторяется.
Подскажите, пожалуйста, как можно избавиться от этого системного пика?

А конечные какие условия?

Avet
Пользователь
Ранг: 1086

09.08.2017 // 12:44:51

Чтобы разобраться, для начала приведите, пожалуйста, всю таблицу градиента, от начала до конца

darya1907
Пользователь
Ранг: 9

10.08.2017 // 15:18:38

Avet пишет:
Чтобы разобраться, для начала приведите, пожалуйста, всю таблицу градиента, от начала до конца

Таблица градиента такая:
Время, мин El A, %
0 27
30 45
35 72
40 72
45 90
55 90
56 27
65 27
Я пробовала в самом начале добавлять изократику при начальном соотношении, но это не помогает. Пробовала уравновешивать в конце 30 минут, также безуспешно.

darya1907
Пользователь
Ранг: 9

10.08.2017 // 15:21:15

OldBrave пишет:
1. Попробуйте использовать в качестве растворителя воду.
Как определяете, что вернулись к начальным условиям?

На воде наблюдается такая же ситуация, как и на других растворителях - системный пик так и есть и разный по площади.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Журнал Заводская лаборатория. Диагностика материалов
Eжемесячный научно-технический журнал по аналитической химии, физическим, механическим и математическим методам исследования и сертификации веществ и материалов. Основан в январе 1932 г.

SergeyK
Пользователь
Ранг: 2168

10.08.2017 // 15:35:23

Редактировано 1 раз(а)

darya1907 пишет:
На воде наблюдается такая же ситуация, как и на других растворителях - системный пик так и есть и разный по площади.

Может просто отстанете от него, раз он системный и не имеет отношения к аналиту?
Я понимаю ваше стремление работать процентной нормализацией, но может лучше построить градуировку по внешнему стандарту?

darya1907
Пользователь
Ранг: 9

10.08.2017 // 17:56:11

Редактировано 1 раз(а)

Дело в том, что площадь пика меняется непредсказуемым образом, бывает, что на хроматограмме испытуемого раствора она гораздо больше. Даже фаза, смешанная в начальном соотношении элюентов, которую я одновременно разливаю в 2 разных виалы и последовательно закалываю, может сильно отличаться по площади этого системного пика. Поскольку методика на примеси и на испытуемом растворе площадь пика может быть значительно больше, чем на растворителе, то хотелось бы от него избавиться или добиться его воспроизводимости.

SergeyK
Пользователь
Ранг: 2168

10.08.2017 // 18:34:03

Не буду дублировать все вопросы из своего прошлого сообщения.

OldBrave
VIP Member
Ранг: 1330

10.08.2017 // 20:32:20

Редактировано 3 раз(а)

darya1907 пишет:
Дело в том, что площадь пика меняется непредсказуемым образом...

Наблюдаемый эффект характерен для систем с неконтролируемым pH. Зачем в элюент добавляется H3PO4? Для предсказуемости и контроля рН лучше использовать фосфатный буфер (10-20 мМоль). Подобрать рН так, чтобы Ваш товар растворялся в исходном элюенте.
Конечный состав элюента с 90% ACN - плохо, в сочетании с H3PO4 может привести к выпадению фосфатов на колонке с последующим их неконтролируемым "вылетом" при возврате к начальным условиям или со следующим вколом. Для ИПХ максимум неводной фазы 60-70% . Время удерживания можно скорректировать повышением температуры колонки, скажем до 50С.

darya1907
Пользователь
Ранг: 9

11.08.2017 // 11:25:28

SergeyK пишет:
Не буду дублировать все вопросы из своего прошлого сообщения.

Я и собираюсь рассчитывать содержание примесей методом внешнего стандарта.


Ответов в этой теме: 18 Страница: 1 2 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты