| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Стабильность производных после дериватизации аминокислот с ОРА >>>
|
 |
|
Роман VIP Member Ранг: 327 |
 18.08.2004 // 16:26:42
Редактировано 9 раз(а) Приготовление растворов и реактивов. 1. ПРИГОТОВЛЕНИЕ БУФЕРНОГО РАСТВОРА С рH 2,2 19,6 г лимоннокислого трехзамещенного натрия растворяют в 200-300 мл деионизованной воды, приливают 16,6 мл концентрированной соляной кислоты, 1 мл фенола и объем доводят до метки 1 л в мерной колбе деионизованной водой. рН измеряют на рН-метре и при необходимости корректируют раствором гидроокиси натрия с массовой долей 50% или концентрированной соляной кислотой. 2. ПРИГОТОВЛЕНИЕ АЦЕТАТНОГО БУФЕРА (концентрация 50 ммоль/л, рН=5,9) 4.1 грамма ацетата натрия (СН3СООNa) растворить в 900 мл бидистиллированной воды. Добавить уксусной кислоты (CH3COOH) до значения рН 5.9. Довести раствор бидистиллированной водой до объема 1000 мл. 3. ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПОДВИЖНОЙ ФАЗЫ «В» Приготовить смесь, состоящую из 15 мл тетрагидрофурана (C4H  ) и 985 мл ацетатного буфера (см. пункт 2). Отфильтруйте полученный раствор через аппарат для фильтрования подвижной фазы и заполните им емкость для подачи растворителя в насос хроматографа.4. ПРИГОТОВЛЕНИЕ БОРАТНОГО БУФЕРА (концентрация 40 ммоль/л, рН=9,5) 2,47 грамма борной кислоты (Н3ВО3) разбавляют в 90 мл бидистиллированной воды. Доводят рН гидрооксидом натрия или калия (NaOH или КОН) до значения 9,5. Разбавить до объема 100 мл бидистиллированной водой. 5. ПРИГОТОВЛЕНИЕ ДЕРИВАТИЗАЦИОННОГО РЕАГЕНТА (концентрация 40 ммоль/л) 27 мг орто-фталевого альдегида (С8Н6О2) растворяют в 500 мкл 99% этилового спирта (C2H5OH), затем добавляют 40 мкл 2-меркаптоэтанола (SHCH2CH2OH). К смеси вносят 4,5 мл боратного буфера (см. пункт 4.2.4). Раствор можно хранить в течение недели в холодильнике. Для стабильности добавлять каждуюю неделю по 20 мкл 2-меркаптоэтанола (вообще больше 2-х недель лучше раствор не хранить) 6. ПРИГОТОВЛЕНИЕ СТАНДАРТНОГО РАСТВОРА АМИНОКИСЛОТ Стандартный раствор аминокислот с концентрацией 2,5 ммоль/л разбавляют в 1000 раствором соляной кислоты с концентрацией 0,1моль/л. Затем проводят дериватизацию. К 10 мкл стандартного раствора добавляют 10 мкл дериватизационного реагента (см. 5), перемешивают и оставляют на 1-2 минуты для завершения реакции. Теперь о Brij 35: На самом деле это обычный ПАВ (по моему гексилсульфонат). Я использовал октилсульфонат. Но, этот реагент также является еще и ион-парной добавкой, поэтому времена выхода некоторых АА могут измениться. Скажу, что как то уж радикально добавление ПАВ не сказалось на стабильности деривативов, а вот двойная доза меркаптоэтанола влияет гораздо эффективней  Условия анализа Колонка: Pecosphere 3 x 3 C18 (33 x 4.6 мм, 3 мкм) Подвижная фаза: А: Метанол В: 1,5% ТГФ в растворе ацетата натрия с концентрацией 50 ммоль/л ( pH=5.9) Градиент: Линейный градиент А от 10% до 80% за 6.5 мин Скорость подвижной фазы: 2.5 мл/мин Условия дететектирования: флуоресценция, Ex - 340 нм, Em – 450 нм. С уважением, Роман |
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
19.08.2004 // 10:51:52
Мне не нужно было бы столько подробностей, но у меня есть две коррективы. 1. Brij35 - это не ионогенный ПАВ, подобный Тритону Х100 или Твину20. 2. Подвижная фаза у Вас не содержит меркаптоэтанола, а это приводит к тому, что наблюдается гашение флуоресценции растворенным в ПФ кислородом - как это не прискорбно. Поэтому для того, чтобы исключить этот момент, добавьте в ПФ либо метабисульфит натрия ~ 0,1%, либо тотже меркаптоэтанол в количестве ~ 0,001%. А также проверьте тетрагидрофуран на предмет наличия перекисей. Они тоже могут разваливать дериваты с ОФА. |
|
Роман VIP Member Ранг: 327 |
19.08.2004 // 15:39:14
Эти подробности не для Вас! На счет тридцать пятого бриджа Вы правы, а вот рекомендации по поводу создания всяких супов из ПФ не принимаются  С уважением, Роман |
|
Senya Пользователь Ранг: 49 |
21.08.2004 // 8:09:42
Светлана, если Вас не затруднит скинте мне на мыло методику по определению ак с ОФА. Я же в свою очередь могу поделиться с Вами методикой с использованием ФТК производных ак. Мое е-маил: senko2002@tut.by Заранее спасибо. |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
