Форумы ANCHEM.RU: Как отмыть колонку Agilent ZORBAX Eclipse AAA от фосфатного буфера

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Как отмыть колонку Agilent ZORBAX Eclipse AAA от фосфатного буфера >>>

  Ответов в этой теме: 40
  Страница: 1 2 3 4
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

vmu
Пользователь
Ранг: 1330

19.02.2019 // 22:59:44

Vilkaceraptor пишет:
А вот на колонке на бидистиляте давление ниже 130 не опускается.

Это при какой скорости потока и температуре? Какое давление было в тех же условиях в начале работы с колонкой?
Для такой колонки, как ваша (75 мм x 4.6 мм, 3.5 мкм), с водой в качестве ПФ при 20 °C и скорости потока 2 мл/мин давление 130 бар является нормальным.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Vilkaceraptor
Пользователь
Ранг: 10

20.02.2019 // 7:26:43

vmu пишет:
Это при какой скорости потока и температуре? Какое давление было в тех же условиях в начале работы с колонкой?
Для такой колонки, как ваша (75 мм x 4.6 мм, 3.5 мкм), с водой в качестве ПФ при 20 °C и скорости потока 2 мл/мин давление 130 бар является нормальным.

Всё верно 2мл/мин при комнатной температуре где-то 24-26 °C. Я вот точно не помню какое было давление до, но мне кажется в районе 110 бар.
Ещё такой вопрос по давлению, какое оно должно быть в норме на всём протяжении магистрали без подключённой колонки? ПФ - ACN+H2O 50:50, у меня держится в районе 20бар при потоке 2мл/мин.

SergeyK
Пользователь
Ранг: 2168

20.02.2019 // 8:16:06

Редактировано 2 раз(а)

Если хроматография происходит и пики симметричные, какая разница, какое давление? Можно испортить колонку и давление на ней не изменится, а работать будет нельзя.
Причем очень легко, оставьте ее в 20-50% щелочи на ночь, например, сорбент растворится, пики превратятся в двугорбых толстых верблюдов.

SergeyK
Пользователь
Ранг: 2168

20.02.2019 // 8:21:38

Редактировано 1 раз(а)

Vilkaceraptor пишет:

Да кстати, вот нашел Аджилентовскую фазу на ацетате, похожа на те что я видел в других местах, только добавили еще ЕДТА

The mobile phase for channel A is a 20 mM sodium acetate buffer containing 0.018 % (v/v) triethylamine (TEA), adjusted to pH 7.2 with 1 - 2 % acetic acid, and with 0.3 % tetrahydrofuran (THF) and 50 l EDTA stock solution added. The following instructions are for 500 ml of channel A buffer.

Это элюент для Hypersil ODS AA с добавками для регулирования селективности именно на этой неподвижной фазе, зачем он вам? Я не уверен, что он подойдет, пробуйте. Но это не буфер, у ацетатного буфера нет буферной емкости при pH=7.2, там все на ионной силе и вторичных взаимодействиях держится.
Когда вы моете обращеннофазную колонку чистой водой без органики, вода исключается из пор, вы моете сорбент только снаружи, а не изнутри, основная емкость сорбента в порах, нужно хотя бы 10-20% органики, чтобы их сольватировать.

Vilkaceraptor
Пользователь
Ранг: 10

20.02.2019 // 8:31:46

SergeyK пишет:
Если хроматография происходит и пики симметричные, какая разница, какое давление?

Пока стандарты не прокалывал, поэтому сказать не могу. Ну я думал через давление понять, всели я промыл как следует.

SergeyK пишет:
Когда вы моете обращеннофазную колонку чистой водой без органики, вода исключается из пор, вы моете сорбент только снаружи, а не изнутри, основная емкость сорбента в порах, нужно хотя бы 10-20% органики, чтобы их сольватировать.

Да, я уже проштудировал эту тему.
Спасибо всем за советы и что не оставили одного в беде. =)

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Журнал Методы и объекты химического анализа
Научно-практический журнал Научного Совета НАН Украины по проблеме "аналитическая химия", посвященный всем аспектам аналитической и биоаналитической химии. Учредитель журнала - Киевский национальный университет имени Тараса Шевченко

vmu
Пользователь
Ранг: 1330

20.02.2019 // 8:33:36

Vilkaceraptor пишет:
Ещё такой вопрос по давлению, какое оно должно быть в норме на всём протяжении магистрали без подключённой колонки? ПФ - ACN+H2O 50:50, у меня держится в районе 20бар при потоке 2мл/мин.

Это нормально.
Какое давление - без разницы, пока давление не слишком большое. Следить за давлением есть смысл. Если вчера 110 бар, сегодня 130 бар, то через несколько дней, возможно, будет 400 бар, и хроматография закончится, даже если пики еще нормально делятся. Правильная пробоподготовка и предколонка продлят жизнь колонки.

SergeyK
Пользователь
Ранг: 2168

20.02.2019 // 8:50:24

Редактировано 4 раз(а)

20 бар на капиллярах это нормально.

Противодавление при 25 С 130 бар:
habrastorage.org/webt/6t/y1/uv/6ty1uvkvy_fmxcq_kbwvqlc2jq0.png
Противодавление при 40 C 104 бар (как велят в 5980-3088_AAA_Datasheet.pdf www.labicom.cz/cogwpspogd/uploads/2016/07/5980-3088_AAA_Datasheet.pdf)
habrastorage.org/webt/hw/kh/tb/hwkhtb1gad4l2iyisgf2viffcyc.png
Это только лишь колонка.

Считать этим, это макрос для Excel, пилят его умные дяденьки из женевского университета, Eclipse AAA сделан по технологии XDB (eXtra Dense Bonding), поэтому я его выбрал в настройках стац. фазы:
epgl.unige.ch/labs/fanal/hplc_calculator en

Вы б поучились хроматографии хорошенько где-нибудь, перед тем как, перестали бы подземные стуки слышать. Потрясите работодателя своего, курсов как у дурака фантиков. А это далеко не самый простой анализ.

SergeyK
Пользователь
Ранг: 2168

20.02.2019 // 8:58:22

vmu пишет:
Если вчера 110 бар, сегодня 130 бар, то через несколько дней, возможно, будет 400 бар, и хроматография закончится, даже если пики еще нормально делятся.

Ну так именно динамику надо отслеживать, а не статику на отмытой колонке. Зарубежные коллеги-супостаты рекомендуют менять предколонку при увеличении противодавления на 10%.
Не верю, что давление может вырасти даже и на 30% без двоения пиков, не то что в два раза.

Vilkaceraptor
Пользователь
Ранг: 10

20.02.2019 // 10:17:19

vmu пишет:
Следить за давлением есть смысл. Если вчера 110 бар, сегодня 130 бар, то через несколько дней, возможно, будет 400 бар, и хроматография закончится, даже если пики еще нормально делятся. Правильная пробоподготовка и предколонка продлят жизнь колонки.

Ну с давлением проблемы начались именно после аминокислотного анализа, до этого вроде все нормально было. Слежу за тем, чтобы все было свежим и вовремя обслуживаю. предколонки есть, всегда установлены. Спрашивал про промывку предколонки, потому как она была новой, и засориться могла только так же, как и колонка. Жалко выкидывать.
Очень признателен Вам за советы и помощь.

quote]SergeyK пишет:
Вы б поучились хроматографии хорошенько где-нибудь, перед тем как, перестали бы подземные стуки слышать. Потрясите работодателя своего, курсов как у дурака фантиков. А это далеко не самый простой анализ.

Необходимость подучиться чувствую сам, но у нас в Казахстане не так легко найти хорошие практические курсы, в большинстве своем общие теоретические занятия. Ну и в бюджет упирается.
За ссылку на макрос спасибо отдельно. Даташит у меня такой в бумажном виде шёл с колонкой, именно по нему и готовил всё. Ошибки свои понял.
До этого делал простые анализы на консерванты и красители, с фосфатным буфером столкнулся впервые, меня предупреждали, что он противный, но вот пока сам практически не столкнулся даже не задумывался об этом. Собственно снего вся проблема и началась.
Благодарю за помощь и советы.

SergeyK
Пользователь
Ранг: 2168

20.02.2019 // 10:25:49

Редактировано 1 раз(а)

Предколонки точно также моются, противотоком. Плюс в том, что можно поток навалить побольше, быстрее отмыться. Если картридж, обязательно выньте его после дмсо из держателя и замочите в воде. Пластик телесного цвета его корпуса - это полиэфиркетон peek, он не очень любит дмсо.
Если предколонка картриджная, можно просто картридж перевернуть в держателе, если монолитная, нужен переходник с двумя мамами или колхозиться как-то к теплообменнику или любой другой маме на пути от насоса.
Помните, что пробу нужно разбавлять буфером, ждать и только потом центрифугировать или фильтровать, чтобы все что могло выпасть, выпало не в колонке при контакте с буфером, а раньше, в пробирке.
Ну и из-за дериватизации и пептидов колонки в этом анализе по десять лет не живут, год-два обычно. Плюс некислая среда, растворяется силикагель постепенно. Если накопите колонок, можно фрит снимать и фазу докладывать, но это колхоз и временно, как на заводе не набить.
Сейчас рекомендуют фазы poroshell hph-c18 или advance bio aaa для этого анализа, они более стойкие хотя бы к щелочной среде. Предколонки там монолитные, мама-папа.


Ответов в этой теме: 40 Страница: 1 2 3 4 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты