| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Кто встречался с чем-либо подобным по УФ-спектру? >>>
|
 |
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
 01.06.2006 // 12:00:33
Редактировано 1 раз(а) Да не вопрос! Тут до Монреаля рукой подать!   Можно было бы и поближе найти и спецов, и оборудование. Если Вам хватило вещества на Уф-спектр, то его за глаза хватит на ЯМР с накоплением, а то и на ИК с Фурье. Пока это гораздо более распространенное оборудование на просторах России, и куда более информативное для установления структуры, чем ВЭЖХ-МС. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
valpet Пользователь Ранг: 45 |
01.06.2006 // 12:07:10
Редактировано 8 раз(а) Опа- на! (гадость, должно быть, невероятная)... Вовсе нет, нам они вполне нравятся. 
|
|||||
|
valpet Пользователь Ранг: 45 |
01.06.2006 // 12:37:03
Не совсем так. Спектр снят в кювете объемом 1 мкл. Ну а микроЯМР на просторах России еще и поискать надо, особенно в Сибири. |
|||||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
01.06.2006 // 13:59:02
Рекомендую все-таки поискать. В Москве много чего есть, и съездить туда будет не в пример дешевле. Не понял пассажа про Новосибирск. Какой именно был прибор и что такое бомбард? Вы что, FAB использовали? Зря, для таких случаев лучше ESI для мягкой ионизации ничего нет. Если подозрение, что кислота, то отрицательная ионизация пойдет на ура. И опять же, обязательно нужна возмржность снятия дочернего спектра столкновительной фрагментации. Наверняка в Москве у кого-нибудь есть ESI/MS/TOF прибор. Справки не так уж трудно навести. Позвоните Альберту Тарасовичу Лебедеву, Президенту ВМСО, когда он вернется с ASMS. |
|||||
|
valpet Пользователь Ранг: 45 |
02.06.2006 // 7:29:04
Спасибо. Когда совсем заткнемся и здесь то воспользуемся советом. А с Новосибирском я имел ввиду элетроспрей и химическую ионизацию и прямой ввод( в этом наверно и была ошибка). Если бы оба метода показали бы ну пусть разницу в дальтон или два то и несомневались бы. Но там где-то каша а где-то прут сопутствующие ионы те что в системе. образец то сходил с колонки в ацетонитриле с 0.05%ТФА. Вот она то и дала мощный ион ее да еще и с цинком. (последний вообще непонятно откуда пришел)Разумных объяснений нет. Подергались и образец кончился. в Красноярске вот вот запустят Agilent электрофорез и массспектрометрия. побалуемся сначала на нем. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
02.06.2006 // 13:55:53
Если под химической ионизацией Вы подразумеваете APCI, то многие сильно полярные или имеющие большую массу молекулы вообще могут не дать никакого сигнала. А у Вас вещество с полярными группами, да еще подозрение, что кислота. Так что ESI вполне хватит. Какого хрена TFA пихать - ваша кислота должна дать отрицательный ион, а в присутствии TFA Вы увидите только ее и ее кластеры - все остальное будет задавлено напрочь. Руки поотрывать надо! |
|||||
|
valpet Пользователь Ранг: 45 |
05.06.2006 // 7:24:57
Спасибо за совет. В качестве неуклюжего оправдания наших телодвижений добавим. 1.ТФА исходно добавлялалась как компонент, необходимый для подавления ионизации нашего вещества на колонке С18. Именно с ней пик не размывается и не пролетает насквозь. Далее концентрацию ее снизили до минимальной - 0.05%. Но все равно, если прикинуть концентрацию ТФА и нашей кислоты, то получится дикое превышение ТФА, и ясно, что ее ионы и будут преобладать в спектре. 2.Как мы теперь поняли- убираем совсем ТФА на финальном этапе и используем электроспрей? Ну что ж, попробуем как накопим вещества. 3.Мы не спецы в масспектрометрии. Мы лишь пользователи, приносящие неизвестный образец специалисту. |
|||||
|
Vladimir61 Пользователь Ранг: 63 |
05.06.2006 // 11:57:28
К сожалению автор темы так и не усвоил с чем имел дело! У нас простой квадруполь (LC/MSD)... Более подходящих приборов в окрестностях пока вроде нет. Основная проблема как раз в том, что чистого то вещества нет,есть смесь непонятной сложности с кучей привнесенных по ходу обогащения примесей. Мне приносили собранные после Милихрома фракции для которых была известна относительная концентрации искомого вещества (по "свечению"). На первом этапе совместной работы оказалось, что хорошо видны только ионы аддукты перхлорат аниона со всем, что попалось (у них использовался перхлоратный буфер)... Во второй раз патрнеры принесли фракции с трифторуксусной кислотой (моё предупреждение о нежелательности её использования они забыли)... Сложность матрицы и мизерность концентрации не позволили однозначно выявить ионы концентрация которых в этих фракциях была бы пропорцианальна их "свечению". (В основном режим электроспрея, сканирование и положительных и отрицательных ионов в различных диапазонах) Для фракции с максимальным "свечением" пытались получить масс-спектр высокого разрешения - не вышло (либо совсем не летучие, либо очень тяжелое) |
|||||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
05.06.2006 // 13:59:13
Времени на развернутый ответ сейчас нет, но замечу, что исходная постановка вопроса в свете сказанного вовсе теряет смысл, ибо представленный УФ спектр может с большим успехом относиться также к посторонней(им) примеси(ям). |
|||||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
06.06.2006 // 13:50:03
По поводу прибора: обычный квадрупольный МС детектор для таких задач, действительно, совершенно непригоден. Спектра фрагментации получить нельзя, а это очень важный источник информации. Разрешение масс-спектра низкое, поэтому точной массы узнать невозможно. А учитывая невысокую степень чистоты образца и то, что это вещество ранее никто, как я понимаю, не выделял и не описывал, эксперименты с таким прибором столь же малоинформативны, как приведенный УФ спектр и гадание на кофейной гуще. Таким образом, в результате последовательных уточнений постановка задачи проясняется, а вместе с тем возрастают и требования к прибору и к квалификации работающих на нем. Минимальное требование прежнее - тройной квадруполь, но теперь уже в связке с жидкостным хроматографом, ибо чистота образца доверия не внушает. Учитывая, что вещество ранее не описанное, то время-пролетная ступень уже становится весьма желательной - точные массы основного иона и фрагментов позволят сузить круг подходящих брутто-формул. Ионная ловушка тоже была бы нелишней, ибо позволит ставить эксперименты с последовательной фрагментацией. Так что я настоятельно советую поискать контактов в Москве. Далее, еще раз напомню, что трифторуксусная кислота (и хлорная тоже) при отрицательной ионизации не только сама дает сильный сигнал (молекулярный ион + кластеры), но еще подавляет в тысячи раз ионизацию других веществ. Впрочем, она подавляет сигнал и при положительной ионизации, но не так сильно. Но она летуча. Поэтому основную ее массу можно удалить упариванием под небольшим вакуумом. Если есть возможность повторить очистку с трихлоруксусной кислотой, то последнюю достаточно легко можно проэкстрагировать из воды в эфир в несколько приемов (при условии, что целевое вещество достаточно полярно и в эфир не пойдет). Для того, чтобы можно было получить максимальный объем информации из ВЭЖХ-МС/МС экспериментов, надо разработать МС-совместимую хроматографию, дабы хотя бы отсечь целевое вещество от той же трифторуксусной кислоты, которой и после упаривания останется достаточно много. Если есть желание получить ионизацию и в положительной, и в отрицательной областях, то лучше ацетата аммония для создания ионной силы и легкого забуферивания ничего, к сожалению, нет (разве что, пропионат). Да и то, лучше не превышать 10мМ. pH регулируется отношением аммония и уксусной кислоты, понятно, что буферная емкость никудышная, поэтому, чем меньше останется трифторуксусной кислоты в пробе, тем лучше. В связи с этим, возрастает требование к колонке. Мало того, что она должна быть максимально чистая (лучше всего несколько суток мытья, даже для абсолютно новой колонки), но и выбранный обращеннофазовый сорбент должен давать красивые пики как для оснований, так и для кислот в подобных подвижных фазах без каких-либо ион-парных агентов. Обычно у тех, кто занимается ВЭЖХ-МС такие колонки есть, но учитывая малое количество вещества, ваше знание его хроматографического поведения будет необходимо для правильного подбора количества органики и рН. Удерживание не должно быть сильным, в то же время колонка должна полностью отделять трифторуксусную кислоту. Желательно применять трех- или шести- ходовой клапан дабы вырезать пик(и) трифторуксусной кислоты и других основных примесей и направлять их мимо источника ионизации. Если Ваше вещество поглощает в УФ или обладает флуоресцецией, то перед источником следует пометить соответствующий детектор, который Вам даст точное время выхода интересующего пика. Ввиду сильного химического шума, эксперименты по поиску основного иона в первом квадруполе надо проводить с вычетом спектра, полученного непосредственно перед (или после) выхода целевого пика, ибо пик этот может быть виден на УФ или флуориметрическом детекторе (кстати, может подойти и электрохимический - свечение обычно связано с окислительно-восстановительными реакциями), но совершенно потонет в шуме в масс-спетрометре, особенно если брать большие диапазоны масс. Начинать надо всегда с малых массовых разрешений. Для начала надо зацепиться за ион, дальше пойдет легче. Стоит также помнить, что многие вещества при положительной ES ионизации дают ионы не только (а иногда и не столько) с протоном, а и с аммонием, щелочными, щелочноземельными и другими металлами. Могут быть и кластеры с участием растворителей как при положительной, так и при отрицательной ионизации. При отрицательной возможны также кластеры с TFA. Вещества с большой молекулярной массой и/или с несколькими легко ионизирующимися функциональными группами дают многозарядные ионы (которые легко распознаются при высоком массовом разрешении). Матобеспечение современных приборов позволяет планировать и осуществлять сложные эксперименты с обратной связью, позволяющие вытащить максимальную информацию из минимального числа вколов, но я этими вопросами не владею, это надо к специалистам по метаболизму. Впрочем, все это публикуется, и можно найти в литературе описание различных методических подходов. Советую внимательно провести литературный поиск с учетом специфики задачи, количества вещества, а также воозможностей того(тех) приборов, на который(е) Вам удасться выйти. Правильное планирование экспериментов позволит Вам сэкномить время (свое и того, чей прибор вам придется использовать), потратить меньше ценного вещества и получить больше информации. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 45
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
