Форумы ANCHEM.RU: Определение родственных примесей N(2)-L-аланина-L-глутамина

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Определение родственных примесей N(2)-L-аланина-L-глутамина >>>

  Ответов в этой теме: 15
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Определение родственных примесей N(2)-L-аланина-L-глутамина

Natasha Viktorovna
Пользователь
Ранг: 12

30.11.2020 // 5:13:53

Редактировано 3 раз(а)

День добрый коллеги. Отрабатываем методику "Колличественное определение и Определение родственных примесей N(2)-L-аланил-L-глутамина" методом ВЭЖХ. Одним из условий хроматографирования является(дословно):

1 Длина волны определения:
1.1 L-аланил-L-глутамин. Количественное определение.
215нм/4 нм ширина полосы
1.2. 1.1 L-аланил-L-глутамин. Родственные примеси
200 нм/4 нм ширина полосы

2 Длина волны сравнения
2.1 L-аланил-L-глутамин. Количественное определение.

550 нм/100 нм ширина полосы
2.2. 1.1 L-аланил-L-глутамин. Родственные примеси
550 нм/100 нм ширина полосы.

Вопрос в том, что за длина волны сравнения. У нас обычный спектрофотометрический детектор, на котором можно установить одну длину волны. Возможно ли на нем выполнять такой анализ?

И еще одно условие: Температура колонки-16 град.
Для чего такая температура? Только ли для того, что бы увеличить время выхода, или есть какой-то другой подводный камень?

В названии темы опечатка. Прошу прощения.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

vmu
Пользователь
Ранг: 1330

30.11.2020 // 6:39:33

Редактировано 1 раз(а)

Для такого анализа вам нужен детектор с диодной матрицей (DAD, PDA, ДМД). На нем можно выставить длину волну сравнения (reference wavelength). Не факт, что в этой методике в ней есть какой-то смысл, но если она прописана в методике и если вы обязаны работать строго по методике, то вам придется ее использовать. Обычно ее используют при градиентном элюировании, где иногда она позволяет снизить дрейф базовой линии. Если же вы делаете анализ "для себя", то, весьма вероятно, без волны сравнения можно обойтись. Но для работы одновременно с 200 и 215 нм все равно нужен многоканальный детектор.

С температурой колонки подводных камней быть не должно. Помимо увеличения времени удерживания, снижение температуры может быть необходимым для обеспечения нужной селективности, чтобы поделить те или иные критичные пары пиков. Но тоже не факт, что 16 градусов тут дают существенный выигрыш в сравнении с 20-25 градусов. Если вы укажете тип колонки и подвижную фазу, обсуждение будет более предметным.

Natasha Viktorovna
Пользователь
Ранг: 12

30.11.2020 // 8:09:23

vmu пишет:
Для такого анализа вам нужен детектор с диодной матрицей (DAD, PDA, ДМД). На нем можно выставить длину волну сравнения (reference wavelength). Не факт, что в этой методике в ней есть какой-то смысл, но если она прописана в методике и если вы обязаны работать строго по методике, то вам придется ее использовать. Обычно ее используют при градиентном элюировании, где иногда она позволяет снизить дрейф базовой линии. Если же вы делаете анализ "для себя", то, весьма вероятно, без волны сравнения можно обойтись. Но для работы одновременно с 200 и 215 нм все равно нужен многоканальный детектор.

С температурой колонки подводных камней быть не должно. Помимо увеличения времени удерживания, снижение температуры может быть необходимым для обеспечения нужной селективности, чтобы поделить те или иные критичные пары пиков. Но тоже не факт, что 16 градусов тут дают существенный выигрыш в сравнении с 20-25 градусов. Если вы укажете тип колонки и подвижную фазу, обсуждение будет более предметным.

Методику для себя отрабатываем, на том, что имеется. В принципе можно же обойтись и одноканальным детектором, если сначала определить примеси, а потом количественное на другой длине волны?
Колонка по методике Hypersil ODS 250*4.6. 3 мкм, но у нас Supelco 15*4.6. 3 мкм.
ПФ Буферный раствор калия дигидрофосфата рН2,1+7,5 мл ацетонитрила + натриевая соль октан-1- сульфоновой кислоты (но у нас натриевая соль генксан-1- сульфоновой кислоты).
Вот как-то так.

voodensky
Пользователь
Ранг: 531

30.11.2020 // 8:15:44

Natasha Viktorovna пишет:

Вопрос в том, что за длина волны сравнения. У нас обычный спектрофотометрический детектор, на котором можно установить одну длину волны. Возможно ли на нем выполнять такой анализ?

Не каждый обычный спектрофотометрический детектор обычный. У Шимадзу спектрофотометрический детектор может работать в режиме измерения на двух длинах волн. Но не уверен, что там окно можно поставить 100 нм.

Natasha Viktorovna
Пользователь
Ранг: 12

30.11.2020 // 8:21:57

voodensky пишет:

Natasha Viktorovna пишет:

Вопрос в том, что за длина волны сравнения. У нас обычный спектрофотометрический детектор, на котором можно установить одну длину волны. Возможно ли на нем выполнять такой анализ?
Не каждый обычный спектрофотометрический детектор обычный. У Шимадзу спектрофотометрический детектор может работать в режиме измерения на двух длинах волн. Но не уверен, что там окно можно поставить 100 нм.

Наш на двух не может

voodensky
Пользователь
Ранг: 531

30.11.2020 // 9:19:52

Natasha Viktorovna пишет:
Методику для себя отрабатываем, на том, что имеется. В принципе можно же обойтись и одноканальным детектором, если сначала определить примеси, а потом количественное на другой длине волны?

Для себя - это просто для тренировки?
Это фармацевтика? Методика уже зарегистрирована?
Если нет, то на пептидные препараты на неидентифицированные примеси ПКО должен быть не ниже 0,1%. На одном растворе это не всегда можно сделать, поэтому два раствора могут появиться автоматически. Один более концентрированный для примесей, второй менее концентрированный - для количественного.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Химмед
Официальный дистрибутор ведущих компаний, таких как Merck, Acros Organics, Calbiochem, Fluka, IKA, Labscan, Roth, Sigma-Aldrich. Supelco, ОАО "Химлаборприбор" и др.

vmu
Пользователь
Ранг: 1330

30.11.2020 // 9:35:48

Редактировано 3 раз(а)

Делать по очереди КО и примеси на разных длинах волн можно, если для себя и если есть лишнее время. Длина волны сравнения тут ничего не дает. Она просто там от некомпетентности авторов методики. Замена октансульфоната на гексансульфонат даже "для себя" недопустима, особенно если там есть примеси, идентифицируемые только по RRT, без стандартов. Это уже новая методика. Удерживание будет слабее, разрешение хуже. Укорочение колонки с 250 до 150 мм по ГФ допустимо, если ППХС пройдет, но в разрешении пиков потеряете.

Natasha Viktorovna
Пользователь
Ранг: 12

30.11.2020 // 9:57:45

voodensky пишет:

Natasha Viktorovna пишет:
Методику для себя отрабатываем, на том, что имеется. В принципе можно же обойтись и одноканальным детектором, если сначала определить примеси, а потом количественное на другой длине волны?
Для себя - это просто для тренировки?
Это фармацевтика? Методика уже зарегистрирована?
Если нет, то на пептидные препараты на неидентифицированные примеси ПКО должен быть не ниже 0,1%. На одном растворе это не всегда можно сделать, поэтому два раствора могут появиться автоматически. Один более концентрированный для примесей, второй менее концентрированный - для количественного.

Не совсем понятно. Откуда такая норма для ПКО. Обычно 0,5%. И что значит два раствора? И зачем ПКО для количественного определения?
Тема новая, не совсем понятная. Если подскажете, будем очень благодарны.

Natasha Viktorovna
Пользователь
Ранг: 12

30.11.2020 // 10:04:36

vmu пишет:
Делать по очереди КО и примеси на разных длинах волн можно, если для себя и если есть лишнее время. Длина волны сравнения тут ничего не дает. Она просто там от некомпетентности авторов методики. Замена октансульфоната на гексансульфонат даже "для себя" недопустима, особенно если там есть примеси, идентифицируемые только по RRT, без стандартов. Это уже новая методика. Удерживание будет слабее, разрешение хуже. Укорочение колонки с 250 до 150 мм по ГФ допустимо, если ППХС пройдет, но в разрешении пиков потеряете.

А для чего здесь октансульфонат добавляется? Часто в качестве ПФ используется буферный раствор. Можно вообще без него, если есть стандарты?
Спасибо за ваши коментарии.

vmu
Пользователь
Ранг: 1330

30.11.2020 // 10:11:44

Октансульфонат - ион-парный агент. Без него будет совершенно иная хроматограмма.

voodensky
Пользователь
Ранг: 531

30.11.2020 // 10:24:14

Natasha Viktorovna пишет:

voodensky пишет:

Natasha Viktorovna пишет:
Методику для себя отрабатываем, на том, что имеется. В принципе можно же обойтись и одноканальным детектором, если сначала определить примеси, а потом количественное на другой длине волны?
Для себя - это просто для тренировки?
Это фармацевтика? Методика уже зарегистрирована?
Если нет, то на пептидные препараты на неидентифицированные примеси ПКО должен быть не ниже 0,1%. На одном растворе это не всегда можно сделать, поэтому два раствора могут появиться автоматически. Один более концентрированный для примесей, второй менее концентрированный - для количественного.
Не совсем понятно. Откуда такая норма для ПКО. Обычно 0,5%. И что значит два раствора? И зачем ПКО для количественного определения?
Тема новая, не совсем понятная. Если подскажете, будем очень благодарны.

Откройте фармакопею, ОФС "Фармацевтические субстанции", табличку "Пределы контроля, идентификации и квалификации родственных примесей в пептидах, полученных синтетическим путём". Предел контроля 0,1%, т.е. неидентифицированные примеси нужно количественно определять от 0,1%. Отсюда и ПКО 0,1%. ПКО не количественного определения, а определения родственных соединений.
У Вас в ПФ ионпарный реагент, он поглощает. Я бы не надеялся, что в одном растворе можно и количественное и примеси определить. Поэтому обычно делается два раствора. Раствор для количественного определения, и раствор для определения родственных соединений с раствором сравнения. Т.е. у Вас в этом случае все равно будут разные растворы для анализа. И дело не в том, есть ли время, а в том можно ли обеспечить необходимый ПКО.


Ответов в этой теме: 15 Страница: 1 2 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты