| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Повышение давления ВЭЖХ >>>
|
 |
| Автор | Тема: Повышение давления ВЭЖХ | |||||
|
an123456 Пользователь Ранг: 30 |
 03.02.2022 // 17:06:15
Редактировано 5 раз(а) Добрый день. Жидкостной хроматограф Agilent 1100. Новая колонка колонка Zorbax SB C-18 (250×4,6 мм, 5 мкм) при градиентном элюировании ПФ (вода с фосфорной кислотой pH 2.2 и ацетонитрил, начиная с 10% ацетонитрила - давала давление 90 bar. После 50 анализов экстрактов растительного сырья давление поднимается в этих же условиях до 200 bar. (при открытом кране - давленние 1 bar). И далее, вероятно, будет расти еще больше. Можно ли хроматографировать при таком давлении? не вредит ли это колонке? Если ее мыть пару часов ацетонитрилом, давление может прийти в норму? Что еще можно сделать? |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
vmu Пользователь Ранг: 1330 |
03.02.2022 // 19:31:11
200 бар колонке не повредят, но то, что давление выросло с 90 до 200 бар, говорит о том, что колонка (в основном на входе) сильно загрязняется вашими пробами. Просто пара часов 100 % ацетонитрила вряд ли уже помогут. Почитайте рекомендации производителя по регенерации колонки. Возможно, промывка в обратном направлении на небольшой скорости (если производитель не запрещает этого) может частично вымыть загрязнения с входа в колонку. Чтоб колонка дольше работала, пробы надо фильтровать через фильтры с размером пор 0.45 или 0.2 мкм. Защитной предколонкой тоже нужно пользоваться для таких сложных проб. Менять предколонку раз в 50 проб гораздо дешевле замены колонки с той же периодичностью. |
|||||
|
an123456 Пользователь Ранг: 30 |
03.02.2022 // 20:12:54
Спасибо за ответ. Пробы, безусловно, фильтруются, однако, видимо, это не помогает. А до какого давления можно работать безопасно? 300? это тоже норма? Так долго можно проработать? Казалось бы, 50 анализов - не так уж и много. |
|||||
|
vmu Пользователь Ранг: 1330 |
04.02.2022 // 7:08:03
Редактировано 1 раз(а) Такие колонки заполняют при давлениях, гораздо более высоких чем максимальное давление вашего насоса (оно равно 400 бар), т.е. до 400 бар вы можете с ней работать. На всякий случай можете в описании колонки уточнить предельное давление. Другое дело, что загрязнение колонки обычно приводит не только к росту давления, но и к снижению эффективности, ухудшению формы пиков, разрешения. Если разделение вас устраивает, можете продолжать работать и добивать колонку вплоть до предельного давления. Добавлю еще по правилам работы: если ваш градиент заканчивается на небольшой доле ацетонитрила (небольшая элюирующая сила), то нужно в конце программы добавлять промывку колонки с большой долей ацетонитрила вплоть до 100 %, если нужно, чтобы после каждой пробы смывать растворимую, но сильноудерживаемую грязь. Или хотя бы после серии из небольшого числа проб промывать колонку сильным элюентом. Ну и защитная предколонка для таких сложных проб обязательна. |
|||||
|
chemist-sib Пользователь Ранг: 557 |
04.02.2022 // 12:30:04
Не знаю конкретики Вашего прибора, но принципиально в таких случаях можно попытаться перевернуть колонку. Хуже - не будет... |
|||||
|
an123456 Пользователь Ранг: 30 |
04.02.2022 // 16:34:58
Редактировано 1 раз(а) А повышение давление будет постоянным, или есть вероятность что может держаться 200 ? Что лучше - порабоать с высоким давлением, если устраивает разделение, или перевернуть и после продолжать? В каком случае дольше протянет, ведь переворачивание - это уже можно скоро с ней прощаться, а с высоким давлением может дольше поработает? а в конце градиента минут 10 хватит 100 ацетонитрила? и в целом как в данном случае лучше каждый раз ее промывать ? на маленьком потоке 50/50 вода и ацетонитрила минут 30 достаточно? Быть может, недостаточная промывка ее и испортила. И еще - если с отрытым краном давление 1 - это значит точно проблема в колонке, а не в приборе?? ведь растительное сырье может забивать не только колонку, вероятно |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
an123456 Пользователь Ранг: 30 |
04.02.2022 // 16:36:57
работать на перевернутой, или перевернуть, и потом опять в обычном направлении? А что лучше - проработать подольше на высоком давлении, а как крайняя мера - переворачивать (ведь это вроде значит, что скоро с ней можно прощаться) или сразу перевернуть? как дольше протянет? |
|||||
|
vmu Пользователь Ранг: 1330 |
04.02.2022 // 19:55:24
Редактировано 3 раз(а) Читайте про вашу колонку тут: https:// Промывку колонки обратным током попробовать можно, но не факт, что сильно поможет, и всегда есть ненулевые шансы на то, что упаковка сорбента нарушится, и после этого начнут горбиться или двоиться пики. Обычно из колонки только вымывают грязь обратным током, а затем возвращают колонку в работу в нормальном направлении. Как сильно и долго мыть в конце градиента - смотрите по хроматограммам ваших проб. Если за N минут при M % ACN грязь смывается (сигнал становится стабильным без пиков), то этого должно быть достаточно для смывки растворимых веществ. Мыть на обычной скорости, не на маленькой. Тут суть не во времени, а в объеме элюента, пропущенного через колонку. Один и тот же объем ПФ на малой скорости будет идти дольше, чем на большей скорости. Вообще, надо смотреть, в чем растворены ваши пробы. Они могут быть гомогенными в своем растворителе, но частично быть нерастворимыми в воде и/или ацетонитриле. При вводе ваших проб они могут просто частично выпадать в осадок. 50 % ACN недостаточно. В любом случае надо хотя бы время от времени перемывать колонку до 100 % ACN (или еще более сильным элюентом в зависимости от ваших проб), естественно, не забывая предварительно промывать водно-ацетонитрильным элюентом без добавок солей. Если давление за 50 проб выросло с 90 до 200 бар, то оно, вероятно, так и будет дальше расти от ваших проб. С открытым краном вы пускаете элюент сразу на слив из насоса, поэтому сопротивление потоку создает только PTFE фильтр на выходе из насоса. Пока он не забит, давление пренебрежимо мало (как вырастет бар до десяти по мере загрязнения, фильтр потребует замены; читайте мануал от насоса - там есть рекомендации на эту тему). https:// Чтобы понимать, какое давление создают капилляры, автосамплер, детектор, нужно в обычном режиме (с закрытым промывным краном насоса) вместо колонки поставить переходник нулевого объема. На 1 мл/мин на чистой воде должно быть порядка 10-40 бар в зависимости от конкретных деталей вашего прибора. Если давление без колонки велико (скажем, 100 бар) - где-то забился жидкостный тракт. Чаще всего забивается игла автосамплера или капилляр на выходе из порта (седла), в которую игла втыкается. Могут твердые частицы пойти и дальше (в кран автосамплера и далее). Чтобы понять, где забито, надо последовательно с конца (начиная с детектора) откручивать соединения: где при откручивании соединения давление резко уменьшается - там (после данного соединения) и затруднен путь элюента. |
|||||
|
an123456 Пользователь Ранг: 30 |
04.02.2022 // 23:07:02
Редактировано 3 раз(а) А могла быть причина быстрой негодности в том, что работа на новой колонке начиналась не с того растворителя, в котором она поступала при поставке (в ней был метанол, а работа началась с ACN)? Это вообще принципиально? В конце рабочего дня каким объемом нужно ее промывать, чтобы она работала больше, чем 50 анализов? (50 анализов - это много или мало? с синтетическими субстанциями такая же история? - давление быстро в итоге сильно превышает начальное?). Быть может есть еще какие-то особенности работы, кроме хорошей промывки, если анализируешь такие пробы без предколонки (к сожалению, такое случается из-за объективных причин). Может есть какие-то секреты, чтобы новую не угробить так быстро? Также давление стало расти именно тогда, когда анализы пошли потоком без выключения насоса - а когда по одному закалывались пробы - оно было в пределах нормы. Совпадение? И все же: переворачивать сразу можно, либо попробовать много часов помыть, поработать на высоком давлении? ведь переворачивать - это, видимо, с ней попрощаться) |
|||||
|
vmu Пользователь Ранг: 1330 |
05.02.2022 // 10:22:21
Метанол/ацетонитрил - непринципиально. Они без проблем смешиваются. Была бы колонка, например, в гексане, неполностью смешивающимся с ацетонитрилом (так бывает у нормально-фазовых колонок), ее сначала следовало бы промыть изопропанолом (смешивается и с гексаном, и с ацетонитрилом, и с водой), а затем уже ацетонитрилом. Главное правило, чтобы при смешении компонентов не выпадали осадки. Это и колонке и прибору может повредить (например, при перемывке колонки или прибора с достаточно концентрированного раствора соли сразу на органический растворитель). Про "анализы пошли потоком без выключения насоса" - какая-то неясная мысль. Когда по одной пробе колете, насос тоже не выключается сразу после одной хроматограммы (?) и перед анализом должен поработать для уравновешивания. Возможно, что с единичными (в день?) пробами в совокупности получалось так, что колонка дольше промывалась, что облегчало ее жизнь. Но это все догадки. Без подробностей по вашим анализам ничего однозначно не скажешь. По промывке в конце дня ориентируйтесь на минимальный объем ПФ, равный 10-20 объемам колонки. А лучше смотрите, когда сигнал детектора выходит на ровную линию. Синтетические субстанции (лекарственные?) обычно весьма чистые (индивидуальное вещество с минимальным количеством примесей). Такие пробы - одни из самых безопасных для колонки. Ни в какое сравнение не идут с экстрактами из природного объекта. Производитель не запрещает промывку колонки обратным током, так что можете пробовать. Вообще, читайте учебники по ВЭЖХ. |
|||||
|
voodensky Пользователь Ранг: 531 |
05.02.2022 // 11:18:31
Вставлю и свои 5 копеек. У вас градиент, поэтому проверяйте растворимость не только в начальных условиях, но и в конечных. Иногда бывает, что образец в водных растворах растворяется хорошо, а при высоких концентрациях ацетонитрила - выпадает осадок. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 40
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
