| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Помогите начиеающему с HPLC >>>
|
 |
| Автор | Тема: Помогите начиеающему с HPLC | |||||
|
alexchem Пользователь Ранг: 491 |
 12.09.2006 // 20:28:33
Здравствуйте, уважаемые форумчане. В нашей лаборатории появился жидкостный хроматограф. На кафедру его купили в 1988 году для наших женщин, но они его так ни разу и не включали, а совсем недавно (о чудо!!!) после долгих попыток забрать этот прибор к нам в лабораторию, они на удивление согласились. Сам прибор чешского производства имеет в своем составе безимпульсный насос высокого давления на 400мл подвижной фазы HPP 5001, фотометрический детектор с набором светофильтров, дифференциальный рефрактометр, электрохимический детектор непонятной природы, интегратор, самописец, делитель фракций и набор колонок для нормально фазовой хроматографии и обращенки. Кто пользовал сей аппарат поделитесь впечатлениями и инструкциями к электрохимическому детектору и интегратору, т.к. за столь долгий промежуток времени они безвозвратно утеряны. С пуском прибора возникли трудности. Колонку использую стоящую по умолчанию со времен покупки и наладки ( а была ли она сделана по человечески – вопрос) с фазой Сепарон с привитыми циано – группами. К насосу претензий нет, а вот к детекторам полно. Приготовил подвижную фазу гептан – ИПС (0,1%). Гептан х.ч. перемешивал часа 3 с нитрующей смесью, затем отмывал щелочью, водой, сушил над хлористым кальцием и перегонял над натрием. ИПС х.ч. просто перегонял. Подвижную фазу дегазировал. Подсоединил колонку к фотометру, в кювету сравнения залил элюент. Вопрос первый: ОБЯЗАТЕЛЬНО ли надо заземлять детекторы. Далее, никак не могу выставить перо самописца в нулевое положение, когда на самописце переключатель стоит на 10мВ. Использую светофильтр 254 нм. Проверил поглощение элюента на СФ-26 при 254 в кювете 1 см. Оптическая плотность относительно воздуха 0,06. Поглощение самой кюветы относительно воздуха тоже 0,06. Выходит элюент чистый, но при переключении диапазонов чувствительности на 64 (самый грубый) перо самописца уходит влево и ручками «грубо» и «тонко» никак не хочет прийти в нулевое положение. С другими светофильтрами ситуация лучше, но перо самописца плавает так, что это даже с большим натягом нельзя назвать дрейфом. Может неправильно заполнил кювету сравнения? В связи с этим второй вопрос: что это может быть и как с этим бороться? Пожалуйста помогите. Заранее спасибо. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1327 |
12.09.2006 // 21:10:42
Я Вам сочувствую! Вы начинаете с того, что большинством, участников форума уже давно пройдено.Плохой,устаревший прибор, непонятно как хранившиеся колонки в непонятном состоянии, никуда не годный интегратор. Ради объективности должен заметить: работать на хроматографе можно. Но это сопряжено с преодолением многих трудностей. Об одной из них Вы спросили, землю обеспечить необходимо! Причем не "0" сети, а именно землю! Более того, если Вы посмотрите на вилки прибора (если их, конечно, еще не обрезали и не заменили Ваши предшественники), то увидите, что они вставляются в соответствующие розетки только в одном положении. И это тоже важно, чтобы фаза и "0" приходили в блоки питания именно так, как это сказано в описаниях. Если описаний на все компоненты прибора нет, то хотя бы сделайте подводку на все вилки одинаково в соответствии с хотя бы одним описанием. А после этого уже можно будет поговорить о поглощении, шумах и т.д., хотя первое предположение, что у Вас в детекторе все покрылось пылью за те многие годы, которые прибор простоял... |
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
12.09.2006 // 21:11:29
Вам достался один из самыз замечательных приборов-мастодонтов прошлого - "Чех". 1. Купите заслуженному бедолаге "осч" растворителей. 2. Выкиньте самопис(де)цы - пристройте к человеку нормальный АЦП с программой (простейшей самодельной могу поделиться, а так платить за это надо). 3. Пока выкиньте циановую фазу и поставьте просто силикагель (сепарон). Ну, примерно так. Вообще, прибор не норовистый, я его обычно быстро в чувство привожу. А вот Костиков - пока Чеху 100 гр. не нальет - ни за что на нулевую не выходит! 
|
|||||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1327 |
12.09.2006 // 21:12:59
Редактировано 1 раз(а) Зато, если Вам удастся победить этот прибор, Вам уже сам черт будет не страшен!
|
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
13.09.2006 // 9:16:52
Ну совсем запугали человека.  Не так страшен черт, как его малютка.  Нормальный прибор. Все детекторы худо-бедно фунциклируют, даже электрохимический. По крайней мере реанимировать всегда возможно. Колонки тоже ничего, юзать можно. Только хвосты выдают солидные даже там, где их быть не должно. Вот если только дозатор у Вас Stop Flou, то это засада. Дерьмо редкостное. Лучше заменить на Реодайн или Валко. Начните с того, что определитесь, нафига этот прибор Вам нужен, в смысле - какие задачи хотите на нем решать. А то может и не стоит это Ваших усилий по его реанимации. Да, еще. В комплекте там 4 типа колонок. Аминофаза, нитрил, С18 и простой силикагель. Уж если и собрались чего делать на нормальной фазе, так начинайте с силикагеля (Сепарон SGX). Но большинство задач в ВЭЖХ, по крайней мере - сейчас, принято решать на обращенной фазе (С18) с водно-органическими элюентами. |
|||||
|
alexchem Пользователь Ранг: 491 |
13.09.2006 // 14:04:03
Огромное спасибо, что не оставили один на один с этим агрегатом. Я прекрасно осознаю, что выдающихся результатов от такого пожилого прибора ждать не приходится. Я хочу пристроить его для практикума по ФХМА, и пусть студенты под моим чутким руководством делят трех-, четырехкомпонентую смесь. Вопрос про светофильтры. Поверхность некоторых светофильтров неоднородна. Может им пришло время и они приказали долго жить? Или их можно реанимировать, а может так и надо???. Вопрос про эл.хим детектор. Его принцип работы. Сдается мне, что он вольтамеперометрический, хотя хз. Про фазу. Со временем, если все будет ОК перейду на обращенку. Пока на нормально фазовой по двум причинам: во - первых изначально стояла такая колонка, во - вторых проще было очистить гептан, чем покупать ацетонитрил для хроматографии. Дозатор ЛЦИ-30.Без остановки потока. Хорощо это или плохо? Имеет две петли - 0,5( внутренняя) и 3 мкл( сейчас установлена). Есть также петля 20 мкл. Какая лучше? |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
13.09.2006 // 14:17:36
О! Да у Вас еще и навороченный прибор! Вместо дозатора с остановкой потока стоит дозируюшая петля. Это - гут. Рекомендую использовать внутренюю. А для НФ хорошая задачка для практикума - делить на силикагеле изомерные нитроанилины. Это стандартная тестовая смесь для калибровки Милихромов. И в комплекте с ними всегда поставлялись. А вот амперометрический детектор EMD10 на нормальной фазе Вам использовать не удастся. Там обязательно должен быть проводящий элюент. |
|||||
|
Сергей Костиков VIP Member Ранг: 1811 |
13.09.2006 // 15:24:15
Редактировано 2 раз(а) user wiped their message |
|||||
|
Сергей Костиков VIP Member Ранг: 1811 |
13.09.2006 // 15:24:18
Редактировано 1 раз(а) user wiped their message |
|||||
|
Сергей Костиков VIP Member Ранг: 1811 |
13.09.2006 // 15:24:20
Редактировано 1 раз(а) Я прошу прощения, какой-то глюк. Но попытаюсь все-же достучаться. К изложенному добавлю, пожалуй, что "Старик" не так уж мёртв, как прикидывается. А насос - вообще уникум. Задумаете продавать - пожалуйста, ко мне. Координаты мои везде висят. Видимая "неоднородность" СФ - видимо, результат оптической дифракции, типа "цветов побежалости" на металлах. Вроде не замечал, чтобы это мешало работе. На крайний случай поищем в закромах... |
|||||
|
Сергей Костиков VIP Member Ранг: 1811 |
13.09.2006 // 15:24:22
Редактировано 1 раз(а) Можно заИке добавить? Все-таки, раз уж помянули на форуме, я с него в 1991 году начинал. У Вас последняя модификация "Чеха" с реодайноподобным петлевым дозатором, неплохими детекторами (исключая электрохимический - заверните в провощенную бумагу - и на антресоли для отчетности). Леонид сказал всё верно и по делу, я только предложу альтернативу: поскольку, на самом деле, 95% разделений в ВЭЖХ проводится на обращенке, то выкиньте прямую фазу и забудьте. Ваши студенты с гексанами-гептанами-ТГФ-ами Вам дороже встанут. Покупайте хч ацетонитрил, промывайте систему (сняв колонку,от насоса до инжектора) сначала изопропанолом, затем читым AcCN затем подключайте колонку SGX C18, УФ-детектор и выводите на ноль пока через так нелюбимый Константином само(...)ец. Кювету сравнения соедините с выходом измерительной и после удаления воздуха (видно будет на самописце) замыкайте вход-выход кюветы сравнения отрезком капилляра. Получите нормальную нулевую линию. С новой колонкой это бывает 2-4 часа. Попробуйте воспроизвести тестовый анализ (указан в паспорте колонки). (по-моему, ацетон, тулуол, бифенил, но уже не помню, да и не принципиально, разве что ТТ посчитать).Колите, что написано, а на то, что вместо метанола у Вас будет, конечно же, ацетонитрил, на данном этапе можно не заморачиваться. Да, ещё вот такой нуянс. От множественных заколов не слишком умелыми кацапатками уплотнение крана-дозатора быстро сдыхает. Мой совет: срезав канюлю от стального мед.шприца, аккуратно и внимательно соединить ее раз и навсегда с направляющей иглы (трубочка такая торчит) с помощью капилляра и хомутиков из тонкой проволоки и шприц с пробой всавлять именно в эту канюлю без протыкания каждый раз нежной мембраны. Да, из фланцев пойдет перелив пробы, но петля (даже внешняя 3 мкл) заполнится - по себе знаю. Зато дозатор спасете, а он нехилых денёг стОит. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 23
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
