| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Экслюзионная хроматография >>>
|
 |
| Автор | Тема: Экслюзионная хроматография | |||||
|
ZMV Пользователь Ранг: 11 |
 28.09.2006 // 15:36:12
Здравствуйте коллеги! Кто ни-будь работал на диольных колонках? У мя А-02 хочу разгонять плазму и др биожидкости, какие элюенты, особенности? Подскажите пожалуйста!Заранее благодарен!!! |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
28.09.2006 // 15:54:44
Проблематично будет "разгонять плазму" на коротких колонках А-02, даже и упакованных "диольным" сорбентом. Принципы гель-хроматографии остаются незыблемыми- длинная колонка, да еще с сорбентом различной пористости. Силикагель (как и стальные колонки)- не самый подходящий сорбент для биоматериалов. К тому же, под конкретный диапазон разделяемых масс потребуются сорбенты с диаметрами пор от 100 до 300+, а если делить "широко", то и набор из 2-3 колонок или бимодальные колонки (что с А-02 несовместимо). Нагрузка в режиме гель-хроматографии должна быть минимально возможной, поэтому не в курсе, как все это дело пойдет, если даже набить "капилляр" 2х250 мм для А-02. |
|||||
|
Сергей Костиков VIP Member Ранг: 1811 |
28.09.2006 // 19:29:26
Вообще не думаю, что А-02 Вам подойдёт для указанной задачи. Это - аналитический прибор, а Вам нужен (полу)препаративный. Отсюда и нужно стартовать. IMHO. |
|||||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1327 |
28.09.2006 // 19:48:34
В принципе, попробовать можно, если использовать колонку, скажем, 4 х 250. Конечно будет морока с ее подсоединением: придется взять длинный капилляр, чтобы соединить с детектором, а это - соответствующее размывание пиков. В остальном: объем пустой колонки 3,14мл, отсюда "полный объем" - 3,14 х 70% (как правило для силикагелей, кроме особоширокопористых) = ~2,2 мл, насоса должно хватить. Другой вопрос, что далеко не всякий диол на силикагеле подойдет: обычно сорбция достаточно велика. Но если Вам кто-нибудь упакует такую колонку TSK-гелем, можно попытаться. Не знаю, правда, позволяет ли программное обеспечение хроматографа такие извраты. Этот вопрос - к Г.И.Бараму. |
|||||
|
ZMV Пользователь Ранг: 11 |
29.09.2006 // 10:45:35
Может не на диолах? может на чем другом? И опять же какие элюенты? качество разделения вопрос второй, всё ровно длиннее 80мм колонки не поставлю. Пробоподготовка простым фильтрованием или как? |
|||||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
29.09.2006 // 11:26:32
Если гонять даже сыворотку крови, 80 мм колонок не хватит, как ни крути. Можешь смело выбросить эту затею из головы. На колонке для МХ, заполненной сорбентом "диол", в сыворотке крови получишь 2 пика- белки (кучей) и низкомолекулярная органика (вторая куча). Ну и? Скажу даже больше- нормальная система для ВЭЖХ с нормальными длинными колонками не сможет разделить все белки крови. (А если и поделит- то не визуализуется в УФ). Такие вещи делают электрофорезом на полакриламидных гелях PAGE (изократических или градиентных- с изменяющейся по ходу концентрацией ПАА), как правило, в денатурирующих условиях (SDS-PAGE). Гель-хроматография биологических образцов на нормальной системе DfB-HPLC (или FPLC) применяется, в основном, с препаративными целями и чаще использует сорбенты на основе мягких гелей (Сефароза, Сефадекс, Сефакрил). Контактные поверхности- стекло, полиамид или ПТФЕ. Половина активных соединений сыворотки сядут необратимо (потеряют активность) на металле или силикагеле. Среда разделения- обычно водно-солевые буферы. Фильтрация образцов- 0,45 мкм фильтр. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
A_Chemist Пользователь Ранг: 7 |
29.09.2006 // 11:50:15
Редактировано 1 раз(а) Возможно, Вы получите более полезный совет, если признаетесь, что за задачу собираетесь решать. Честно говоря, не знаю, что такое диольная колонка, но даже разделение 2-3 белков гель-фильтрацией требует 0,5-1 м длины колонки. Если у Вас какое-то ограничения по длине, то надо подбирать метод в соответствии с решаемой задачей. Так, даже на такой короткой колонке двумя ионными хроматографиями и одним концентрированием можно выделить фракцию с очень узким диапазоном изоэлектрической точки белков. Иногда этого достаточно. А гель-фильтрацией я обессоливаю белки на 5-см колонке, и обессоливание - это максимум, чего можно добиться при такой длине. |
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
30.09.2006 // 1:28:21
Чего-чего?... Вы с фени переведите, плиз... "плазму разгонять". Диольные колонки - бывает, правда, экотика. А причем здесь эксклюзия? Кроме того, что есть диольные эксклюзионные колонки? (тоже экзотика) Или давайте настраиваться на одну волну, или не знаю, что и порекомендовать.. |
|||||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
30.09.2006 // 7:47:19
Ну, в принципе, все силикагели для гель-хроматографии гидроксилированные. Правда, колонки с гидроксилированным силикагелем для нормально-фазовой ВЭЖХ (ДИОЛ) имеют недостаточно большой размер пор (120 А), чтоб делить крупные белки, но низкомолекулярные (2 кДа-80 кДа, в случае "идеальной" формы) на них делить можно. Только это изврат (применительно к "разгонке плазмы" на А02). Полностью в условиях гель-хроматографии можно разделить только белки, различающиеся по массе в 100 раз, а "различать" можно белки, у которых массы разнятся хотя бы на 15% по ММ. Сами понимаете, в случае "плазмы (!?) крови" этого явно недостаточно. Стандартные колонки для гель-х имеют размер минимум 300 мм (а не 80) и часто составляются в серии. Электрофорез- ваш выбор. |
|||||
|
ZMV Пользователь Ранг: 11 |
02.10.2006 // 12:50:18
Судя из имеющейся информации силикагель с привитыми -ОН группами ипользуют как НФ хроматографии, так и эксклюзионной, сложилось впечатление разницы нет, о нюансах и спрашиваю, опыта работы нет! |
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
02.10.2006 // 13:04:06
Действительно, используют, хоть и редко, диольные колонки для НФ режима. Деление на буферированном силикагеле. Но основное предназначение этого сорбента - эксклюзионная хроматография относительно НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ пептидов. Как тут уже правильно сказали, неочищенную плазму крови на белки (по ММ) и пептиды на этой колонке с такими размерами Вам разделить не удастся. Очень уж сложный по составу объект, эта самая плазма. Вы бы исходили из того, какую задачу нужно решить, а не для каких целей приспособить то, что у Вас есть. |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
