| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Опытным "липидщикам" >>>
|
 |
| Автор | Тема: Опытным "липидщикам" | |||||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
 05.12.2006 // 13:40:55
САм умен, но опыт важнее! Ребята, столкнулся с проблемой. Ума не приложу как решить.Суть вот в чем. Разрабатваю методологию контроля количества фосфолипидов в сурфактанте животного происхождения (смесь сфингомиелина,лецитина, фосфатидилглицерина и кефалина)методом ТСХ. Все тип-топ, красится чем угодно ацетатом меди, фосфорно-молибденовой кислотой. Но .... имеется еще один показатель - ЛИЗОЛЕЦИТИН. Он в пробе присутствует (не может не присутствовать), но стандартными проявителями напрочь не проявляется. Казалось бы - фосфолипид, но не проявляется. Такая же ситуация с Сигмовским лизолецитинином. Может кто имеет опыт работы с подобной дрянью и посоветует "радикальный" способ проявления. Серную кислоту пробовал - слой отваливается, а очень не хотелось бы. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Nebergas Пользователь Ранг: 1744 |
05.12.2006 // 17:56:09
А по-старинке - иодом - не пробовали? Он, кажется, сорбируется на все, что ни попадя. |
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
06.12.2006 // 8:54:54
Согласен с Nebergasом. Тем более, что фосфолипиды иод окрашивает несколько с другим оттенком, нежели другие классы веществ. А вообще в качестве селективного проявителя на фосфолипиды лучше всего молибдат аммония в сернокислотной среде, а затем опрыскать аскорбинкой (синие пятна), но он проявляет хорошо только после гидролиза фосфолипидов, например, 0,1% раствором фосфолипазы А2. Или другим мягким реагентом. |
|||||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
06.12.2006 // 12:39:13
Пробовал йодом. Окрашивание проходит. Пятно лизолецитина видно, пока пластинка в камере с йодом. Вытаскиваешь - бледнеет на глазах. Отсканировать не успеваю. Молибдатом аммония не пробовал, потому что натолкнулся на статейку, в которой чувствительность для данного проявителя определена на уровне 10 мкг, что совсем не есть хорошо. Вот порывшись в одной книженции натолкнулся на идентификацию соединений с четвертичным атомом азота. То бишь холин, который присутствует в лецитине и лизолецитине имеет такой. Проявитель банально прост - бромфеноловый синий с нитратом серебра. Попробовал - действительно - Ок. 1 мкг этого гадкого лизолецитина видно невооруженным глазом. Одного не могу понять, почему же он, собака, не окрашивается фосфорно-молибденовой кислотой? Ведь все фракции: сфингомиелины, лецитин, кефалин, ФГ - все отлично и с хорошей чувствительностью. Я уж было решил катить бочку на Сигмовский лизолецитин, - всыпали чего-то а назвали лизолецитином. Ан-нет! Все нормально и выходит он где запланировано, но почему же он так "хитро вжарен", что отличается от лецитина только отсутствием одной жирной кислоты, а ведет себя из ряда вон. |
|||||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
06.12.2006 // 13:35:18
Garry: ...но почему же он так "хитро вжарен", что отличается от лецитина только отсутствием одной жирной кислоты В этом то и вся фишка |
|||||
|
Алексей (СамГУ) Пользователь Ранг: 367 |
06.12.2006 // 14:30:00
Здравствуйте, Garry! Вероятнее всего вы и так знаете это, но скажу, что вещества содержащие в молекуле третичный и/или четвертичный атом азота хорошо окрашиваются реактивом Драгендорфа, причем чувствительность высокая. Если нужен состав этого реагента, я могу написать. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
06.12.2006 // 15:54:13
Спасибо за советы. PS. Реактив Драгендорфа я знаю как колотить. Это мысль, почему она выпала из моей головы ? Еще раз спасибо. |
|||||
|
Nebergas Пользователь Ранг: 1744 |
06.12.2006 // 17:46:25
Ну, вот Вы и "опытный "липидщик"! 
|
|||||
|
Алексей (СамГУ) Пользователь Ранг: 367 |
07.12.2006 // 8:41:28
Буду рад, если вам этот совет поможет в решении задачи. Интересно потом будет узнать как данный реактив работает на ваших аналитах. |
|||||
|
gingerino Пользователь Ранг: 207 |
09.12.2006 // 14:13:36
Малахитовый зеленый не пробовали. Реагент на фосфор более чувствительный, чем молибдатный. Для микроколичеств в самый раз. Пропись на работе, попробую найти в своих записях попозже. Статья Васьковского 70х гг. |
|||||
|
gingerino Пользователь Ранг: 207 |
09.12.2006 // 14:42:10
Вот нашел. Обнаружение фосфолипидов реагентом на основе малахитового зеленого (Vaskovsky, Latyshev, 1975) Молибдат натрия (5 г) растворяли в 150 мл 2 М раствора HCl и смешивали с раствором 1 г малахитового зеленого в 100 мл 2 М раствора HCl. При перемешивании добавляли 250 мл дистиллированной воды, выдерживали 2-3 часа при комнатной температуре, а затем отфильтровывали через бумажный фильтр. Реагент хранили в темном месте не более 2-3 недель. В первых опытах для обнаружения и идентификации фосфолипидов хроматограмму опрыскивали молибдатным реагентом. После проявления пятен фосфолипидов на хроматограммах их отмечали, затем пластинку опрыскивали хлорной кислотой и нагревали на электроплитке при температуре 200-2400С в течение 4-5 мин до прекращения выделения паров хлорной кислоты. После охлаждения хроматограмму опрыскивали реагентом на основе малахитового зеленого. Вещества, содержащие фосфор, проявлялись в виде зеленых пятен на оранжевом фоне. |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
