| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
ВЭЖХ пептидов >>>
|
 |
| Автор | Тема: ВЭЖХ пептидов |
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
 17.04.2004 // 17:13:35
Недавно я получил такое письмо: Hi Constantine, >I was searching ion-pair reagents by Google and found your discussion with someone on that topic. >You sound very competent, so maybe you can help me out. I have a very specific question: can I use tetrabutylammonium perchlorate as the IP reagent and if so, will it work for both anionic and cationic species (I work with derivatized peptides)? My product seems to elute with the void volume if I use isocratic TFA or water. ... я ответил так... Hello Tanya, We can continue our discussion in Russian I'm sure, but unless your Russian origin is not prooved... I'll have to speak English. It seems to me you've found very old discussion on chromatographyforum.com, the "troubleshooting" website of LCGC. Now I can offer you the best choise, analytical forum on www.anchem.ru, where your problem may be considered by Russian professionals. As for your request - of course you can use TBA easily. But they's a solution without use of IP. For your separations, you can apply macroporous of perfusion polymeric phases that are more hydrophobic than conventional C18 ones, or use IC techniques, for example, "chromatofocusing" on weak WAX phases. Мне стало интересно - какие еще методы можно применить в этих случаях? Тем более что о последних я имею довольно смутное представление... |
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
17.04.2004 // 18:59:39
Да, еще можно распределительным нормально-фазовым с градиентом воды.... На Atlantice не знаю, а на TSK gel Amide-80 где-то в февральских номерах Дж. Кроматогр. встречал... |
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
 19.04.2004 // 11:18:19
Я так понял, при своих скудных познаниях английского (ибо учил Deutch), у девушки возникли проблемы с аналитическим определением интересующего пептидного компонента, который вылетает с мертвым объемом. И она спрашивает, можно ли использовать перхлорат тетрабутиламмония в качестве ион-парного реагента для увеличения времени удерживания при изократическом элюировании. В принципе, если это аналитический контроль и потом с этими пептидами ничего делать не будут (ну там биологическую активность проверять), то использование ион-парных реагентов вполне может быть оправдано при отсутствии ионобменных колонок. Кислые пептиды (а я понял именно так !) можно делить с помошью ТБА. Но я бы не использовал именно перхлорат для этих целей. Лучше все-таки сульфат ТБА и при рН>=6.0. Второй ион (перхлорат) ориентирован на модификацию аминных групп и активен только при рН<=5.0. Т.е если она желает изменить время удерживания своего кислого пептида, то она должна использовать натрий (а лучше триэтиламин) трифторацетатный буфер (или фосфатный) рН >= 6.0 с добавкой ТБА сульфата. Игорь. |
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
20.04.2004 // 8:50:25
Для гидрофильных пептидов идеально подходит тот самый режим ДИРФ (динамически индуцированный раздел фаз), о котором я Косте говорил на Клязьме. Значит, так: колонка - любая силикагелевая, элюент - 60-70% ацетонитрила в 0,1 - 0,15 М растворе дигидрофосфата калия, рН=3-4 доводим фосфорной или трифторуксусной кислотой. Неплохо работают с этим же элюентом нитрил и аминофаза, но порядок выхода пептидов может поменяться. Возможно, есть смысл поварьировать содержание соли или перейти на перхлорат лития или аммония с увеличением концентрации до 0,5-0,6 М. По любому, это будет гораздо лучше, чем ион-парный режим. Липофильные вещества не мешают, так как вылетают из колонки мухой, потому режим хорош для анализа биопроб. Да и на высокомолекулярных сорбатах ДИРФ работает хорошо - пики симметричные и достаточно узкие. |
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
20.04.2004 // 18:24:15
Пришел ответ - все ОК с ТБА, пик вышел на 20 мин вместо 0. Леонид, не трави душу, пока мой прибор занят и попробовать не могу. Но,я считаю, что для такого режима неразумно юзать голый силикагель - очень жестко. Наверное, эндкепированная обращенка была бы лучше? |
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
21.04.2004 // 9:14:43
В том то и прикол, что все нормально идет на голом силикагеле. Если полипептиды большие и слегка липофильные, то можно перейти на обычный нитрил. То есть я писал о том, что точно знаю, поскольку делал сам. Что касается обращенки, да еще и эндкепированной, там все будет совершенно иначе. Как - не знаю, но липофильные примеси уже в мертвом объеме не выскочат - это ясно и так... |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 5 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
