Форумы ANCHEM.RU: О сложных взаимоотношениях холестерола и ВЭЖХ

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

О сложных взаимоотношениях холестерола и ВЭЖХ >>>

  Ответов в этой теме: 32
  Страница: 1 2 3 4
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: О сложных взаимоотношениях холестерола и ВЭЖХ

Dionisii
Пользователь
Ранг: 377

11.05.2004 // 8:00:07

Редактировано 1 раз(а)

Здравствуйте уважаемые господа аналитики, извините, что мы к вам в очередной раз за поможением обращаемся... Никто случаем не знает, есть ли какие нибудь дельные ВЭЖХ-методики на холестерин, к примеру, в сливочном масле. Моей креативной мощи не хватило на создание таковой. Спектрофотометр холестерин видит плохо, пик маленький да еще очень странной формы, с обратным "пичком". Я смотрел холестерин на длине волны 225 нм. Может быть причина в этом? Я такую длину волны выставил изходя из своих домыслов относительно его структуры (одна двойная связь, цикл).
Может кто нибудь знает какой у него максимум адсорбции? Также очень хотелось бы знать, подвержен ли он омылению и не разваливается ли он от высокой температуры. Буду благодарен за любую помощь и совет.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

11.05.2004 // 8:20:45

Холестерин никогда ВЭЖХ не делал, он газовой лучше получается. Он относится к неомыляемым липидам и таким способом его отделяют от кучи омыляемых жиров. Во всяком случае, омыление и последующая экстракция ему не вредят. Как и высокая температура в испарителе. Погложение в УФ у него, конечно, оставляет желать. Не уверен, что "с обратным пичком"- это он и есть. Хотя, кто знает. Кстати, судя по GC/MS, в сливочном масле этих стероидов несколько, главный, конечно, он.

Леонид
VIP Member
Ранг: 5266

11.05.2004 // 10:18:52

Особых проблем с анализом ощутимых количеств холестерина и иже с ним на ВЭЖХ обычно не бывает.
Используйте элюент ацетонитрил-вода на С18-колонке. Поглощает он, действительно - не ахти как. Поэтому детектирование лучше вести при 206-210 нм. Если прорисовывается обратный пичок на вершине основного, то это в колонке вначале образовались пустоты и ее надо заменить. Если обратные пики в другом месте - то это накладывается артефакт. Нужно поварьировать состав элюента, чтобы оттянуть целевой пик в другую область хроматограммы.
При желании можно сделать дериваты с поглощающей (хромофорной) группой на гидроксил или двойную связь, тогда удастся взять и довольно малые концентрации.
Если сорбент совсем уж низкого качества, подавить влияние силанольных групп и их взаимодействие с гидроксилом сорбата можно добавкой небольших количеств уксусной или пропионовой кислот, хотя в этом спектральном диапазоне лучше использовать фосфорную кислоту. Ну и конечно же ацетонитрил надо брать почище.

Artem
Пользователь
Ранг: 193

11.05.2004 // 10:25:53

Когда-то давно занимался таким анализом.
Попробуйте такую методику:
колонка - Nucleosil 100-5 С8 150*4,6 мм
подвижная фаза - вода - (ацетонитрил-метанол (99-1)) - 10-90
скорость ПФ - 1 мл/мин
длина волны детектирования - 205 нм
Время выхода около 10 мин.
Попробуйте, может получится.

Garry
VIP Member
Ранг: 1076

11.05.2004 // 14:52:49

Есть еще и вот такой вариант.
Колонка с любой силикагельной матрицей (Силасорб 600, Лихросорб Si60 и т.д.) ПФ : ацетонитрил:н-гептан (или н-гексан) в соотношении (1:99). Ацетонитрил хреново смешивается с неполярными растворителями, поэтому немного нужно поболтать. Длина волны детекции 230 нм.
Или же (с ног на голову): Обращенка С18, а ПФ(2% 2-пропанол в н-гексане). Длина волны детектирования 205 нм. Эти два метода определения стероидов (в том числе и холестерола) имеют место быть в книженции издательства "Мир" "Хроматография" в 2-х томах, год не помню, но если понадобится то найду более точные координаты.

Dionisii
Пользователь
Ранг: 377

12.05.2004 // 8:55:54

Garry пишет:
Есть еще и вот такой вариант.
Колонка с любой силикагельной матрицей (Силасорб 600, Лихросорб Si60 и т.д.) ПФ : ацетонитрил:н-гептан (или н-гексан) в соотношении (1:99). Ацетонитрил хреново смешивается с неполярными растворителями, поэтому немного нужно поболтать. Длина волны детекции 230 нм.
Или же (с ног на голову): Обращенка С18, а ПФ(2% 2-пропанол в н-гексане). Длина волны детектирования 205 нм. Эти два метода определения стероидов (в том числе и холестерола) имеют место быть в книженции издательства "Мир" "Хроматография" в 2-х томах, год не помню, но если понадобится то найду более точные координаты.

Буду очень благодарен за точные координаты. Кстати, online версии этой книги случаем нет?

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Установка с вращающимся дисковым электродом ВЭД-06
Установка с вращающимся дисковым электродом ВЭД-06 предназначена для проведения научных исследований и испытаний материалов, требующих постоянства гидродинамических условий вблизи поверхности рабочего электрода.ВЭД-06 представляет собой измерительный электронный блок в комплекте со стеклянной электрохимической ячейкой и сменными рабочими дисковыми электродами из различных материалов.

[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]

Dionisii
Пользователь
Ранг: 377

12.05.2004 // 9:02:59

Artem пишет:
Когда-то давно занимался таким анализом.
Попробуйте такую методику:
колонка - Nucleosil 100-5 С8 150*4,6 мм
подвижная фаза - вода - (ацетонитрил-метанол (99-1)) - 10-90
скорость ПФ - 1 мл/мин
длина волны детектирования - 205 нм
Время выхода около 10 мин.
Попробуйте, может получится.

большое спасибо, уже попробовал этот вариант, только с нюансами. Колонка была С18, а не С8, длинною 250, а не 150. Разделение имело место быть, но качество, к сожалению, оставляет желать лучшего. Пик был растянутый по времени с "мохнатой" вершиной

. Кстати, вот еще один злободневный вопрос: отчего появляются пики с "мохнатой" вершиной

. Я с такими пиками сталкивался неоднократно, работая с липидами. Вершина пика в увеличенном виде представляет собой частокол маленьких пичков

Алексей (СамГУ)
Пользователь
Ранг: 367

12.05.2004 // 9:59:30

Предлагаю использовать следующие условия: колонка С18, температура 35-40 град., подвижная фаза изопропанол - ацетонитрил приблизительно(30:70), детектор УФ 210 нм (холестирин содержит двойную связь).Главное, чтобы растворители были чистые! С составом элюента придется поиграться.
При таких же условиях успешно делил триглицериды и тяжелые углеводороды (детек. рефрактометр). В принцыпе по гидрофобности они где-то близко.

Удачи!

Artem
Пользователь
Ранг: 193

12.05.2004 // 10:20:48

Dionisii пишет:

Artem пишет:
Когда-то давно занимался таким анализом.
Попробуйте такую методику:
колонка - Nucleosil 100-5 С8 150*4,6 мм
подвижная фаза - вода - (ацетонитрил-метанол (99-1)) - 10-90
скорость ПФ - 1 мл/мин
длина волны детектирования - 205 нм
Время выхода около 10 мин.
Попробуйте, может получится.

большое спасибо, уже попробовал этот вариант, только с нюансами. Колонка была С18, а не С8, длинною 250, а не 150. Разделение имело место быть, но качество, к сожалению, оставляет желать лучшего. Пик был растянутый по времени с "мохнатой" вершиной. Кстати, вот еще один злободневный вопрос: отчего появляются пики с "мохнатой" вершиной. Я с такими пиками сталкивался неоднократно, работая с липидами. Вершина пика в увеличенном виде представляет собой частокол маленьких пичков.

Первое: дело может быть в колонке. С18 более гидрофобна, чем С8 и за счет этого может происходить уширение пика. В этом случае нежно увеличить содержание органического модификатора в подвижной фазе.
Второе: "мохнатость" пика можно обьяснить как хроматографическими причинами, так и чистотой растворителя. Возможно, что дело в последнем (иногда сам сталкивался с такими проблемами).
Третье: влияние матрицы на форму пика.
Тут нужно более подробно смотреть на хроматограмму. Попробуйте повысить температуру и взять,все таки, колонку С8.
Артем

Garry
VIP Member
Ранг: 1076

12.05.2004 // 10:29:29

Dionisii пишет:
Разделение имело место быть, но качество, к сожалению, оставляет желать лучшего. Пик был растянутый по времени с "мохнатой" вершиной. Кстати, вот еще один злободневный вопрос: отчего появляются пики с "мохнатой" вершиной. Я с такими пиками сталкивался неоднократно, работая с липидами. Вершина пика в увеличенном виде представляет собой частокол маленьких пичков.

Обычно деление верхушки пика происходит по трем причинам:
1. Столбик сорбента в колонке треснул (как правило вверху). Нужно починить колонку - благо это не сложно.
2. В этих условиях наблюдается эксклюзионный механизм деления по Mw.
3. Вытекающее из 2. Пик в-ва неоднороден и имеет полидисперсность.
4. Возможно анализ проходит на предельной концентрации (при ближнем УФ 205-210 нм)поэтому уровень шума больше уровня полезного сигнала. Пик довольно уширен, поэтому на макушке пика и наблюдается частокол шумовой составляющей полезного сигнала. У меня такое наблюдается при анализе декстранов. Приходится сглаживать.

Dionisii
Пользователь
Ранг: 377

12.05.2004 // 10:44:18

Я снова заколол холестерин, немного изменив условия. Пик, кстати, действительно уширен, и к тому же ассимметричен. А что, если органического модификатора добавить, пик станет уже? Я то думал, что наоборот...


Ответов в этой теме: 32 Страница: 1 2 3 4 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты