Форумы ANCHEM.RU: Кто-нибудь занимался ВЭЖХ определением витамина В12

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Кто-нибудь занимался ВЭЖХ определением витамина В12 >>>

Ответов в этой теме: 8

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Кто-нибудь занимался ВЭЖХ определением витамина В12

Senya
Пользователь
Ранг: 49

14.05.2004 // 17:27:51

Есть задача по определению вит В12 в фарм препаратах и крови лабораторных животных (фармакодинамика) Не знаю откуда ее начинать решать. Помогите с мыслями

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Artem
Пользователь
Ранг: 193

14.05.2004 // 17:44:26

Senya пишет:
Есть задача по определению вит В12 в фарм препаратах и крови лабораторных животных (фармакодинамика) Не знаю откуда ее начинать решать. Помогите с мыслями

Для определения В12 в фармпрепаратах есть несколько хороших методик.
1) на уровне 1 мкг/таблетка (капсула)
колонка - LiChrospher RP-select-B или любая С8
подвижная фаза - ацетонитрил-вода (15-85)
скорость ПФ - 1 мл/мин
длина волны детектирования - 559 нм
температура колонки - комнатная
Пик симметричный и методика работает для поливитаминных препаратов достаточно хорошо.
2) колонка - любая С18
подвижная фаза: метанол - раствор 10 г/л K2HPO4 с рН 3,5 (H3PO4) в соотношении 26-74
скорость ПФ - 0,8 мл/мин
длина водны детектирования - 361 нм

Что же касается определения в крови животных - то тут задача достаточно сложная, и без ТФЭ не обойдешься. Скорее всего здесь нужно использовать сильный анионообменник, но подбирать условия - уже самостоятельно, исходя из вводимых количеств и времени метаболизма.

Пробуйте.

Артем

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

15.05.2004 // 13:45:21

Не выходя из этого интернета можно найти несколько способов. Все больше на иноязыках, правда. Вот, за 30 сек нарыл ссылку wwwsoc.nii.ac.jp/jsac/analsci/ICAS2001/pdfs/0900/0983_p1077n.pdf на статью, правда, там с ВЭЖХ/МС. А вообще говоря, это действительно, непросто. Концентрации очень малы. Это все равно, что определять ВЭЖХ антитела к специфическим возбудителям. Тут действительно треба ИФА, только антитела к В12 самому делать придется. ТФЭ едва ли поможет. Считаем. После приема дозы в 60 мкг она разбавится в крови и в течение 1-2 часов будет на уровне от 6 до 1 нг/мл (может больше, может меньше). Не пол-литра же крови отбирать. Мало какой детектор это почует. В предлагаемой вам ссылке японы искали от 0 до 1,2 нг/мл.

Senya
Пользователь
Ранг: 49

15.05.2004 // 22:31:18

У нас ВЭЖХ со спектрометрическим детектором. Поэтому первый вариант с детектированием при 559 нм отпадает сразу. Второй более приемлимый. Единственно вопрос можно ли использовать колонку с пронтосилом (ОФ)? Большое спасибо за идеи. На счет крови я согласен с Серегой, что лучшее здесь ИФА. Где-то на этом форуме кто-то писал об этом. Единственно может кто подскажет какая фирма эти наборы продает и где их можно купить? Еще раз спасибо Артему и Сергею за информацию

)

Senya
Пользователь
Ранг: 49

16.05.2004 // 1:08:04

Вот, кстати сам порылся в инете и нарвался на ответ своего же вопроса. Если кому интересно то ИФА-тест системы на витамины продаются здесь
stylab.ru/p_vt.html

Artem
Пользователь
Ранг: 193

17.05.2004 // 10:25:19

Senya пишет:
У нас ВЭЖХ со спектрометрическим детектором. Поэтому первый вариант с детектированием при 559 нм отпадает сразу. Второй более приемлимый. Единственно вопрос можно ли использовать колонку с пронтосилом (ОФ)? Большое спасибо за идеи. На счет крови я согласен с Серегой, что лучшее здесь ИФА. Где-то на этом форуме кто-то писал об этом. Единственно может кто подскажет какая фирма эти наборы продает и где их можно купить? Еще раз спасибо Артему и Сергею за информацию )

Длину волны детектирования вы можете изменить и в более коротковолновую область - у В12 около 5 максимумов поглощения. Но тогда смотрите на поглощение вспомогательных веществ.
На счет колонки - пробуйте, должно получиться. В крайнем случае, подкорректируйте содержание ацетонитрила.

Артем

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Химико-фармацевтический журнал
Ежемесячный научно-технический и производственный журнал. Освещает молекулярно-биологические проблемы создания лекарственных средств, методы синтеза и технологии производства новых лекарственных препаратов, иccледования cтpоения xимичеcкиx cоединений, методы анализа и контpоль пpоизводcтва.

Senya
Пользователь
Ранг: 49

23.05.2004 // 14:22:39

Спасибо за дополнение. А чем лучше проводить эктракцию витамина В12 из сухих и жидких препаратов?

Artem
Пользователь
Ранг: 193

24.05.2004 // 10:16:27

Senya пишет:
Спасибо за дополнение. А чем лучше проводить эктракцию витамина В12 из сухих и жидких препаратов?

Я проводил экстракцию В12 из поливитаминных таблеток с использованием смеси ацетонитрил - вода (20-80), после этого фильтровал через мембранный фильтр 0,45 мкм.
Были на анализе несколько инъекций с В12 (не чистый цианокобаламин, а с тиамином, пиридоксинолом и некоторыми другими гадостями), так раствор закалывали как есть, но при этом объем вводимой пробы составлял 50-100 мкл. Если ваш прибор позволяет вводить такие объемы - пробуйте.

Артем

Senya
Пользователь
Ранг: 49

24.05.2004 // 17:20:16

Наш прибор может закалывать до 100 мкл, так что будем пробовать спасибо за информацию.


Ответов в этой теме: 8	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты