| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
ТФЭ: индометацин в плазме крови >>>
|
 |
| Автор | Тема: ТФЭ: индометацин в плазме крови |
|
Slawa Пользователь Ранг: 323 |
 04.12.2008 // 23:07:56
Редактировано 1 раз(а) Здравствуйте. Разрабатываю методику определения индометацина в плазме крови. Из доступных сорбентов С8 и С16. В связи с разработкой возникло несколько вопросов к гуру по ТФЭ. 1. Смывание с патронов сорбированного вещества. Пробовал ацетонитрил, ацетон, метанол, этанол в чистом виде и в смеси с буфером pH 8 на модельных растворах. Предполагаемый объем плазмы 1 мл, масса сорбента 200 мг. Объем смывателя 1,0-1,5 мл. Во всех случаях во втором смыве обнаруживал пики индометацина и вн. стандарта. Вопросы: а. какой более сильный элюент можно попробовать для снятия пробы. (Если несмешивающуюся с водой органику, то как решить проблему совместимости с водой?) б. из Вашего опыта, сколько % от сорбированного на патроне вещества должно смываться, чтобы воспроизводимость методики была не очень плохая (+- 15%) 2. Тоже самое в отношении растворителя, которым промывают сорбент после сорбции аналита от компонентов матрицы. В идеале он не должен смывать аналит. А как на практике? 3. Осаждать или не осаждать белки? Из практики жж-экстракции воспроизводимость результатов без осаждения белков выше. Наверное тоже самое с ТФЭ? 4. Какие параметры можно варьировать для повышения степени экстракции из плазмы? Собираюсь варьировать pH (вблизи pKa аналита), ионную силу буфера, содержание добавок органического растворителя (ацетонитрила). Что еще? Может кто-то поелится опытом, КАК эти параметры влияют на степень экстракции? |
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|
Slawa Пользователь Ранг: 323 |
04.12.2008 // 23:11:27
И в догонку к тем, кто работал с плазмой: после упаривания досуха снятых с патронов ТФЭ проб и растворения их в подвижной фазе растворы получаются не очень чистыми. Что делаете? Фильтровать не получается из-за маленького конечного объема. Что остается? Убивать колонку и предколонку? |
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
05.12.2008 // 4:32:14
Редактировано 1 раз(а) Обычно 100% метанола или ацетонитрила хватает. Для уменьшения побочных взаимодействий с силанолами имеет иногда смысл добавить до 5% воды (особенно в ацетонитрил). Можно также попробовать 0.1% трифторуксусной кислоты. Смеси с буферами будут смывать хуже, они лучше годятся для промывки. Для патронов 100мг обычно надо 1мл для смыва, значит Вам может потребоваться до 2-х мл. Очень сильно зависит от близости свойств внутреннего стандарта. Если свойства близки, то даже при невысоких степенях извлечения можно иметь очень хорошую воспроизводимость. Но всегда лучше стремиться достичь величин не хуже 70% и по анализируемуму веществу, и по внутреннему стандарту. То же самое, все зависит от близости внутреннего стандарта. Лучше, чтобы смывалось не больше 5% каждого. В ТФЭ может быть по разному. Иногда, когда велика степень связывания с белками и связь с ними относительно прочная, без предварительного осаждения оных вообще не обойтись (даже в ЖЭ!). Осаждение белков также может решить проблему забивания патронов, особенно когда образцы плохо стабилизированы антикоагулянтом. Это очень индивидуально, каждый случай надо рассматривать отдельно, учитывая целесообразность. Если степень извлечения и так хорошая и патроны не забиваются, то зачем добавлять лишний этап? Если Вы имеете в виду разбавление плазмы перед нанесением на патрон, то органику добавлять, на мой взгляд, совершенно излишне. Стоило бы добавить воды с 0.1% муравьиной кислоты, чтобы подавить диссоциацию карбоксила. Ионизация индола при этом будет невелика. Возможны, конечно, варианты, но этого должно хватить, чтобы количественно посадить вещество на патрон. Фильтровать можно и очень маленькие объемы тоже, если есть необходимость. Но за отдельные деньги. А предколонка и существует для того, чтобы ее убивать. Хотя есть приемы (с отключением предколонки и ее обратной промывкой), позволяющие продлить ее жизнь. А вообще-то ионообменная ТФЭ была бы в данном случае гораздо чище... |
|
Slawa Пользователь Ранг: 323 |
05.12.2008 // 21:08:49
Большое спасибо за ответы. |
|
Slawa Пользователь Ранг: 323 |
02.02.2009 // 20:37:17
Здравствуйте. Появилось еще пара вопросов. 1. Как можно улучшить воспроизводимость результатов анализа при пробоподготовке методом ТФЭ, если аналит сильно (99%) связан с белками. Какие факторы можно варьировать при подборе условий? Мне на ум приходит в порядке важности: pH, добавки органического растворителя в кровь, скорость пропускания через патроны. Может что-то еще? 2. Из Вашего опыта: как влияет содержание внутреннего стандарта на воспроизводимость? Я так полагаю если к примеру содержание аналита 1 нг/мл, то введение вн. стандарта порядка 1 мкг/мл не есть хорошо. Так ли это и в какой мере это "не есть хорошо"? |
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
04.02.2009 // 18:22:09
Степень связывания еще ничего не говорит о силе этих связей. Надо прежде всего проверять степень извлечения в ТФЭ, и если она высокая (70% и выше) и воспроизводимая (от донора к донору), то все в порядке. Разумеется, градуировочные и проверочные образцы должны быть приготовлены в той же матрице (плазма или сыворотка). Случаи, когда связывание с белками прочнее, чем адсорбция в ТФЭ бывают, хотя и не очень часто. Иногда помогает сдвиг рН в более экстремальные области и повышение ионной силы буфера. В отдельных случаях (например, витамин Д и аналоги) только предварительное осаждение белков органикой дает хорошие результаты. Честно говоря, принципиальных проблем не вижу, особенно при использовании структурных аналогов, если только Вы не выпадете из линейного диапазона детектора. При использовании МС детектора и дейтерированных ВС надо иметь в виду примесь недейтерированного вещества в этом ВС. Концентрация ее должна быть такой, чтобы она не мешала количественному определению (< 20% от нижнего предела). |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 5 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
