| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
базовая линия на жидкостнике ползет вверх >>>
|
 |
| Автор | Тема: базовая линия на жидкостнике ползет вверх | |||||
|
pdon83 Пользователь Ранг: 13 |
 19.03.2009 // 8:14:42
Коллеги, посоветуйте пожалуйста... Не могу добиться ровной базовой линии на ВЭЖХ Perkin Elmer series 200 при анализе пива на компонентный состав горечи. Элюирование градиентное. Все растворители - только gradient HPLC grade. Базовая при анализе постоянно ползет вверх, из-за этого получаются некорректные результаты при низких концентрациях. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Люся Пользователь Ранг: 5 |
19.03.2009 // 14:19:53
Дрейф нулевой линии связан чаше всего с нестабильностью оптической плотности того, что у вас выходит с колонки. Если нулевая ползет вверх, значит оптическое поглощение у вас всё время увеличивается. Если вы кололи большое количество проб до этого, то у вас с колонки выходят остатки от ваших проб. Отмойте хорошо колонку и всё будет хорошо. |
|||||
|
Slawa Пользователь Ранг: 323 |
19.03.2009 // 15:01:00
А какой у Вас градиент? Если разница в составе подвиной фазы вначале и в конце градиента значительна - то базовая будет расти. |
|||||
|
pdon83 Пользователь Ранг: 13 |
20.03.2009 // 7:17:14
Спасибо! А чем лучше отмывать? Сейчас в качетсве растворителей я использую А: цитраиный буфер (рН=7) + ацетонитрил; В: чистый метанол; С: чистый ацетонитрил и D: вода. |
|||||
|
pdon83 Пользователь Ранг: 13 |
20.03.2009 // 7:30:31
Хроматографирование идет 40 минут. Начальные условия: 80% смеси цитратного буфера (рН=7) и ацетонитрила; 10% метанола и 10% ацетонитрила. Затем до 30-й минуты идет возрастание доли метанола до 70% (как растворителя с самой большой элюирующей силой), при этом два остальных растворителя распределяются по 15%. И далее в течении 10 минут возврат к начальным условиям. Рост базовой наблюдается как раз в первые 30 минут. Я подозревал, что все дело в поглощении метанола (используется УФ детектор). Поменял метанол, теперь использую специальный для градиентной ВЭЖХ, но результата нет. Пробовал менять предколонку и колонку (Waters Symmetry C18), но и это не помогло. |
|||||
|
OldBrave VIP Member Ранг: 1330 |
20.03.2009 // 10:02:48
Как уже указал Slawа, если разница в составе подвижной фазы вначале и в конце градиента значительна - то базовая будет изменяться. Изменение базовой можно сильно уменьшить (а также уменьшить уровень шумов и кол-во ложных пиков), если совсем отказаться от MeOH, заменив его ацетонитрилом и подняв при этом температуру колонки, например до 50С. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Люся Пользователь Ранг: 5 |
20.03.2009 // 11:05:04
Отмывают обычно остатки растворимые в воде водой, а остатки растворимые в органике органикой. Поставте в начале промывку водную, а затем смесью метанола и ацетонитрила. Мойте до стабильности нулевой. Цитратный буфер я лично не люблю, он сам может довать дрейф. |
|||||
|
pdon83 Пользователь Ранг: 13 |
21.03.2009 // 7:28:16
Отмывают обычно остатки растворимые в воде водой, а остатки растворимые в органике органикой. Поставте в начале промывку водную, а затем смесью метанола и ацетонитрила. Мойте до стабильности нулевой. Цитратный буфер я лично не люблю, он сам может довать дрейф. Спасибо, обязательно попробую. А в конце каждой серии анализов (перед выключением прибора на ночь) промывать колонку нужно примерно по такой же программе? |
|||||
|
pdon83 Пользователь Ранг: 13 |
21.03.2009 // 7:30:30
Увы, без метанола анализ очень сильно растягивается по времени, а термостата пока не приобрел. |
|||||
|
Люся Пользователь Ранг: 5 |
23.03.2009 // 14:20:43
Спасибо, обязательно попробую. А в конце каждой серии анализов (перед выключением прибора на ночь) промывать колонку нужно примерно по такой же программе? Я не знаю как долго вы работали на приборе перед тем как возникла проблема. Если долго то анализ необходимо остановить и промыть колонку до стабильности. А если проб было не много увеличте время анализа и промывать колонку будете элюентом после каждого анализа. И ещё, у колонок есть ресурс, который вы уже могли выработать. И тогда проще поменять колонку. |
|||||
|
Symon Пользователь Ранг: 90 |
23.03.2009 // 22:04:23
Что значит "постоянно ползет вверх"? Обнулите её, масштаб смените, что Вас так уж картинка беспокоит, или результат? Тут, кстати, Вас должно беспокоить соотношение "сигнал/шум", а вовсе не ровность поверхности. Ячейки промойте, что ли, руки у лаборанта. Про "компонентный состав горечи" - отдельно и поподробнее для Отдельных любителей пива. Их есть тут. |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
