| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Как отмыть -NH2 колонку от кислоты. Или почему не выходит глюкоза? >>>
|
 |
| Автор | Тема: Как отмыть -NH2 колонку от кислоты. Или почему не выходит глюкоза? | |||||
|
drynn Пользователь Ранг: 26 |
 30.03.2009 // 19:35:08
День добрый. Приобрел колоночку Kromasil 100A NH2 с целью определять глюкозу и др. сахара. Подвижная фаза - 25:75 Вода:ACN. 1 мл/мин Детектор УФ 190нм. Закалываю раствор глюкозы из банки. На 3 минуте выходит вода (тоже самое, если заколоть просто воду.) и больше ничего! И то пик какой-то горбатый. Во многих местах видел статьи, где сахара смотрят на УФ-детекторе. До этого на этом приборе работал с фенолами, в подвижной фазе был 1% кислоты. Вопрос: Почему не вижу глюкозу? Колонка не делит? Или детектор не видит? Можно ли теоретически как-то забить это колонку кислотой с которой работал до того. Хотя и промывал прибор раствором без кислоты, но не долго..пару-тройку минут... |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
DSP007 VIP Member Ранг: 2228 |
30.03.2009 // 21:20:01
1) Длина волны какая? Выше 230 искать глюкозу бесполезно. 2) Вообще, глюкоза на аминофазу садится конкретно. А ацетонитрил вообще то снижает растворимость глюкозы. |
|||||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
30.03.2009 // 21:22:25
Редактировано 2 раз(а) Пары-тройки минут(правда с какой еще скоростью), конечно, маловато, если у Вас стандартная хроматографическая система. А концентрации моносахаридов какие? Вообще-то, для этой цели лучше РФ, особенно, если матрица даже "среденей" сложности. Помню, я "пулял" моносахариды в системе силикагель-ацетон:вода на уф с инверсией. Кислота изменит селектиность Вашей хроматографической системы, моносахариды будут слабее или вообще не будут на ней удерживаться - сколько надо "ввалить" на сорбент кислоты (органической), чтобы это произошло я не знаю. Сделайте так: возьмите МеСN : DEA 99.5:0.5 %v. (можно до 1%) и 5-10 геометрических объемов колонки прогоните через колонку, затем элюента вашего 5-10 (сразу) |
|||||
|
Vlad Orlovsky Пользователь Ранг: 60 |
31.03.2009 // 2:11:22
Привет Всем, В моем понимании не благородное это дело смотреть глюкозу на УФ да еще с такои колонкой 1. Удерживание происходит по двум механизмам : гидрофильному (HILIC, слабое в не ионизированном состоянии фазы) и комплекс/водородные связи между фазой и сахаром. Если попала кислота то второй полностью пропадает а для гидрофильного механизма маловато органики (надо пойти в 80-90%). 2. Отмыть кислоту можно как уже предложили, зная количество носителя на фазе можно посчитать сколько там кислоты село. Колонка эта не очень стабильная в неитральной среде так как идет гидролиз фазы при рН выше 7 а в порах без буффера может быть и больше. 3. Детектор этот не годится, лучше взять ELSD, LC/MS or RI. УФ активности там нет (или очень очень маленкая, скорее изменение в рефрактивном индексе потока) видите вы на 3 минуты сигнал воды и может там и сахар есть. Колоть надо побольше и то что видно после промывки амином может быть глюкоза (удерживание 4-7 минут) |
|||||
|
drynn Пользователь Ранг: 26 |
31.03.2009 // 12:16:21
Спасибо всем за отклик!!! =) Сейчас решил сначала помыть колонку дэионизированной водой (раньше просто дистилят был) и мерковский ацетонитрилом. Если не поможет возьму диэтиламин. Про RI прекрасно понимаю - но сомневаюсь, что эсть такая возможность финансово. =( |
|||||
|
Farma Пользователь Ранг: 382 |
31.03.2009 // 13:39:56
Аминофаза - довольно капризная и недолговечная фаза. Могла и "слететь". Я в своей практике всегда покупаю эти колонки парами. Если одна слетает, то сразу перехожу на вторую... К нам тут приезжал представитель фирмы Sequant и предлагал HILIC фазу для разделения сахаров. Картинки действительно понравились. Но цена такая, что можно несколько аминофазных колонок купить. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
31.03.2009 // 14:53:21
to drynn: А вот водой не надо. Кстати, у меня в запасе есть старенький рабочий РД(шимадзу), для Ваших задач как раз подойдет. (хотя Вы не описали точно аналитическую задачу, но я примерно догадываюсь). Пишите на utriv{coбaчkа}mail.ru - договоримся. Я в москве. to Farma: А Вы не пробовали другую хроматографическую систему для этой задачи применять (Вариантов-то хватает) или Вы чем-то "ограничены"? Если с аминофазой "аккуратно" обращаться, то иногда она живет долго (для аминофазы  ) Да с HILICом это "развод". Можно, кстати говоря, эмулировать "аминофазу" на силикагеле (понятно, что добавляется в элюент ) , я могу Вам ссылку на статью скинуть, если есть потребность. to Vlad Orlovsky: На мой взгляд, HILICом для данных сорбатов (глюкоза) в этой системе можно пренебречь, даже если до 80-90% поднять. Если взять вместо апротонного растворителя (MeCN), протонный (МеOH), то сами знаете, что будет. Да и аналитическая задача здесь, наверно (задача не представлена), достаточно проста, чтобы использовать ELSD и LC-MS. |
|||||
|
drynn Пользователь Ранг: 26 |
31.03.2009 // 17:43:48
2 ALL. Спасибо за совету. 2 Virtu: По поводу РФ - интересно. Будем держать связь =) К сожалению DEA не нашлось. Но есть триэтиламин. Сколько его можно взять, чтоб смыть лишние протоны и ничего не загубить? Вообще довольно странные картинки прибор сейчас рисует... (ПФ Н2О:АСN 20:80 или 30:70) Если заколоть воду - два двойных пика 2.5 и 3.0 минуты. Если заколоть смесь ACN:вода - один отрицательный одн положительный пик, если состав ПФ и смеси разные. И один пик если одинаковые... Ничего не понимаю. А задача примерно такая - определить качественную и количествунную картинку после гидролиза смеси целлюлозы и гемицеллюлозы. Т.е. будет смесь мономеров, димеров и т.д. (Работаю естественно с предколонкой). А у меня сейчас даже модельный раствор глюкозы не получается проанализировать =( |
|||||
|
Korvet Пользователь Ранг: 1114 |
31.03.2009 // 21:29:32
а может ну её эту аминофазу, с плохим детектированием на УФ, да попробовать анализ на С18 с УФ, только сахара определять в виде фенилгидразонов, то есть с дериватизацией. а? а кстати какой это Вы пик поды на УФ видите? она что на 190 разве поглощает? |
|||||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
01.04.2009 // 0:05:16
Редактировано 1 раз(а) to drynn: Триэтиламина можно 3-5% об., только затем сразу на элюент переходите. И я Вам, как "врач" говорю, что с УФ (прямое детектирование) эту задачу решать не стоит пытаться, это, как пытаться золото руками намывать  Если все-таки упорствуете в своем выборе, тогда Вам прямая дорога в УФ (инверсия), т.е. "кидаете" в элюент что-нибудь "УФ поглощающее" - вариантов тьма, смотря, что у Вас есть "под ногами", чувствительность будет примерно как на РД. Иначе не стоит время тратить, лучше отдохните или еще чего Можно так же и "связаться" с дериватизацией, но надо определенные реакивы и желательно "прямые" руки. P.S.:Да, и то, что Вы наблюдаете вполне закономерно. Удивление, часто порождается недостатком информации. |
|||||
|
drynn Пользователь Ранг: 26 |
01.04.2009 // 0:19:57
Редактировано 5 раз(а) 2Korvet: Вода и ACN имеют разное поглощение в УФ, соответственно при изменении соотношения могут возникать пики. Только, вот казалось бы, ACN должен поглощает сильнее воды в этой области, и пики должны быть отрицательные. Но похоже водичка не совсем чистая (содержит что-то поглощающее), поглащает в УФ и пики получаются нормальные. 2Virtu. Доктор, а скажите, пожалуйста, как Вы думаете, что подойдет для инверсии? Под ногам, еще что-нибудь феноло подобное есть. А что вообще для этого "белые люди" используют? К сожалению ни разу не работал с инверсией. Я так понимаю, концентрацию надо сделать порядка 10-4 (если для фенолов) или еще поменьше? Заранее спасибо за помощь! =) зы С дереватизацией не хочется связываться и по "политическим" причинам =) А насчет причин удивления - так никто и не спорит ps Попробовал даже в литературке посмотреть о "инверсии" - так ничего и не нашел. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 40
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
