| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
На чём можно анализировать и препаративно разделять вещества с М = 3000 – 8000? >>>
|
 |
| Автор | Тема: На чём можно анализировать и препаративно разделять вещества с М = 3000 – 8000? | ||
|
Андрейвладими Пользователь Ранг: 139 |
 06.10.2010 // 18:11:43
Посоветуйте, пожалуйста, или напишите, с кем можно посоветоваться по следующей проблемме: Мне надо будет анализировать и препаративно чистить два типа веществ: 1) Очень длинные и довольно гидрофобные молекулы с полярными фрагментами, например амидными связями с М ~ 4000 - 8000. Такая молекула с М чуть меньше 4000 уже дала весьма широкий пик в нашем LC/MS в условиях SpeedROD Rp-18e 50x4.6mm /MeCN, 3.75ml/min.Уменьшение скорости не привело к более красивому пику. . На прямой фазе, на которой я их чаще всего и чищу (Silica gel 60) пик тоже широкий. Вещества, молекулы которых покороче и их М соответственно меньше, вполне прилично делятся на Luna 5u C18 100 A, Gemini 5u C18 110A, Hi-Q 5u C18 в MeOH или MeCN с небольшой добавкой воды и на прямой фазе 60А 2) После снятия защитных групп получатся целевые вещества, молекулы которых длинные и очень гидрофильные, несущие десяток и более отрицательно заряженых групп + немного неполярных фрагментов, М ~ 3000 - 6000. Вещества такого типа, молекулы которых покороче и их М соответственно меньше, делятся на Kromasil 100 7u C18, Hi-Q 5u C18 в NH4HCO3/water/MeCN. Заметно лучше работать на Gemini 5u C18 110A, с которого этот элюент не смывает SiO2, сильно мешающий после упаривания растворителей. Вопрос: На каких коммерчески доступных сорбентах можно анализировать и препаративно чистить вещества с такими большими мольвесами от примесей схожей структуры, отличающихся, например, наличием или отсутствием одного дополнительного атома S в молекуле? (Gemini 5u C18 110A, 150x21.1 mm 5 micron с некоторым трудом решает эту задачу для веществ типа 2) при М 2200. Боюсь, что с большими молекулами обоих типов будет совсем плохо, не полезут они в поры или не вылезут обратно.) Андрей |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
Farma Пользователь Ранг: 382 |
06.10.2010 // 19:16:36
Для аналитики я бы посоветовал попробовать 300 ангстремовый С18 силикагель или диольную фазу. Кстати, я не совсем понял, зачем на SpeedRod'е подвижная фаза - чистый ацетонитрил. К тому же если вещества такие полярные и только на одну серу отличаются, то колонку лучше подлиннее брать... Что касается препаратива: сколько вещества "грузите"? Вариант с низким или средним давлением не рассматриваете? |
||
|
DSP007 VIP Member Ранг: 2228 |
06.10.2010 // 21:03:31
Значит так. Насчет широкопрористых сорбентов 100%+ Ув Леонид делил HILIC методом пчелиный яд, меллетин вроде как вещество не маленькое и соизмеримое по молекулярному весу. Не забывайте также старые но надежные полупрепаративные и препаративные методы - во первых электрофорез на декстрозном геле и ультрацентрифугирование как элемент концентрирования образца. Как то на сайте института аналитического приборострония мне попадалась инфа о ультрацентрифуге как раз под такой дииапазон масс, ночто то более подробное сказать не могу. |
||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
07.10.2010 // 6:31:26
Лучше для С18, мне кажется, не 300, в 200А, а то емкость (и так небольшая на С18) совсем накроется.. ну, я бы и правда в хилике копил.. наверное, можно поискать 200А или 300А силикагель, а вдруг такая есть даже аминофаза |
||
|
Андрейвладими Пользователь Ранг: 139 |
07.10.2010 // 12:15:52
На SpeedRod'е анализировалось вещество 1-го типа (длинное неполярное с М ~4000), оно выходит в чистом MeCN и довольно поздно, на 3-й минуте на колонке 50 мм. У этих веществ наблюдается чёткая тенденция к увелеичению времени выхода с увеличением длинны цепи, более длинные надо будет вымывать с THF or i-PrOH. Вещества 1-го типа гружу на 30х150 по ~ 50 мг смеси, вещества 2- го типа (очень полярные, со множеством заряженых групп) по 2 - 10 мг смеси на Gemini 5u C18 110A, 150x21.1 mm с получением 1 - 5 мг целевого, иначе уширяются и сильно хвостят пики. Не очень в курсе, что такое "Вариант с низким или средним давлением " Я использую или колоночную хроматографию на J. T. Baker silica gel 60 (0.040–0.063 mm) lдля веществ 1-го типа или HPLC для тех и других. Для аналитики 300 или 200А С18 - ОК!, но что делать с препаративом для сильнополярных веществ? Бикарбонат смывает SiO2, который при упаривании выпадает белой плёнкой вместе с целевым веществом, которое вытащить из этой плёнки уже не получается. Gemini не растворяется в NH4HCO3, но этот сорбент выпускается только 110А. Существует ли 200А С18 или диольный сорбент, который можно использовать при рН 10 - 11? Может достаточно 150А? У него будет побольше ёмкость. |
||
|
Farma Пользователь Ранг: 382 |
07.10.2010 // 14:34:39
На SpeedRod'е анализировалось вещество 1-го типа (длинное неполярное с М ~4000), оно выходит в чистом MeCN и довольно поздно, на 3-й минуте на колонке 50 мм. У этих веществ наблюдается чёткая тенденция к увелеичению времени выхода с увеличением длинны цепи, более длинные надо будет вымывать с THF or i-PrOH. Вещества 1-го типа гружу на 30х150 по ~ 50 мг смеси, вещества 2- го типа (очень полярные, со множеством заряженых групп) по 2 - 10 мг смеси на Gemini 5u C18 110A, 150x21.1 mm с получением 1 - 5 мг целевого, иначе уширяются и сильно хвостят пики. Не очень в курсе, что такое "Вариант с низким или средним давлением " Я использую или колоночную хроматографию на J. T. Baker silica gel 60 (0.040–0.063 mm) lдля веществ 1-го типа или HPLC для тех и других. Для аналитики 300 или 200А С18 - ОК!, но что делать с препаративом для сильнополярных веществ? Бикарбонат смывает SiO2, который при упаривании выпадает белой плёнкой вместе с целевым веществом, которое вытащить из этой плёнки уже не получается. Gemini не растворяется в NH4HCO3, но этот сорбент выпускается только 110А. Существует ли 200А С18 или диольный сорбент, который можно использовать при рН 10 - 11? Может достаточно 150А? У него будет побольше ёмкость. Насчёт работы широкопористых сорбентов при pH 10-11 ничего не могу сказать - работал на Lichrospher 300 C18 при pH 9. Выше не "задирал", рискованно. Если решите аналитическую задачу на нём, то и препаратив можно аналогичный попробовать. Насчёт ёмкости тоже сказать ничего не могу - нужно пробовать. Но интуитивно между 150А и 300А выберу скорее 300А. Что касается полярных веществ: HILIC в качестве аналитики может и подойдёт, но для препаратива у него явно ёмкость будет маловата. Я в своё время на ДИОЛе крупные полисахариды делил - результат понравился. А для препаратива я бы попробовал какой-нибудь мягкий полимерный сорбент (ионообменный, ОФ или SEC) - это можно реализовать в формате низкого давления, а не ВЭЖХ, т.е. "самотёком" или при небольшом "поддавливании". Как вариант, посмотрите Fractogel. Во-первых не надо трястись за силикагелевую матрицу, во-вторых никаких тебе вторичных взаимодействий. Да и регенерация лёгкая. |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
DSP007 VIP Member Ранг: 2228 |
07.10.2010 // 14:39:47
Знаете чего мне подумалось Если у Вас pH 10-11 то может все таки стирольные сорбентики попробовать или по старинке активированный уголь. По стирольным сорбентам тут как бы была темка от наших людей, контактик - вот он Michael M. Ilyin [mil{coбaчkа}ineos.ac.ru]. |
||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
07.10.2010 // 17:50:48
Нет нет, Миша Ильин - это сверхсшитый, тут я и сам бы ответил  А насколько нужен щелочной рН? Может он нужен только в сильно водной среде? А в хилике воды мало, там и щелочить-то нечего. Использовать азеотроп ацетонитрила с водой, а удерживание отрегулировать температурой |
||
|
Андрейвладими Пользователь Ранг: 139 |
08.10.2010 // 13:13:51
Farma, 1) Почему 300, а не 150? у него же ёмкость меньше? 2) Препаратив мне уж точно нужен на том же сорбенте, как и аналитика. Я сначала подбираю условия разделения на анилитике, затем колюсь в препаратив, собираю все пики (детектирую по UV), упариваю, по LC/MS нахожу нужное вещество, которое потом и выделяю из всей массы. Ионообменник я на стал даже пробовать, так как для смыва вещества с десятком ионизованых фосфатов надо будет использовать неетучий буфер, а от него надо будет потом избавляться. Осмос почему - то не помог, эти длинные тонкие молекулы проходят через Cellu Sep H1 with Nominal MWCO = 1000. Можно, конечно, подупаривать и отбивать соли на гель - проникающей колонке, да такого опыта у меня ну совсем нет, даже не знаю, какой гель нужно для этого брать. Подскажите, пожалуйста. Если я правильно понимаю, то Fractogel делит молекулы в зависимости от их размера, а мне надо делить очень близкие по весу молекулы, типа 4268 и 4300... P.S. Я на неделю ухожу в отпуск, поэтому на смогу ответить только через недельку |
||
|
Андрейвладими Пользователь Ранг: 139 |
08.10.2010 // 13:26:38
Щелочной рН из - за используемого бикарбонатного буфера, который удаётся удалить из вещества без его гибели. Вполне хорошо работает и формиат или ацетат аммония, они практически полностью улетают на моём роторе (40 -50оС/0.04 mmHg), но вещества достаточно нежные и одно я так усушил успешно, второе же сдохло навсегда. Варить же их стадий 20 -25, это месяцы работы, количества просто крохотные и экспериментировать ну почти не с чем. Работа с сильнополярными веществами как на прямой так и на обратной фазах без солей приводит к порнограммам вместо хроматограмм. Я пробовал делить такие вещества с М ~ 1000 в хилике на Luna 5u Silica (2) 100A. Делятся, но пики ну очень широкие, добиться высокой эффективности не удалось. P.S. Я на неделю ухожу в отпуск, поэтому на смогу ответить только через недельку |
||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
08.10.2010 // 16:19:08
Тогда - попробуйте в хилике аминофазу - без шуток. Пики могут стать конкретно уже, чем на силикагеле. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 21
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
