Форумы ANCHEM.RU: На чём можно анализировать и препаративно разделять вещества с М = 3000

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

На чём можно анализировать и препаративно разделять вещества с М = 3000 – 8000? >>>

  Ответов в этой теме: 21
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

08.10.2010 // 16:19:08

Тогда - попробуйте в хилике аминофазу - без шуток. Пики могут стать конкретно уже, чем на силикагеле.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

virtu
VIP Member
Ранг: 2135

08.10.2010 // 16:45:15

Farma же написал, что интуитивно

Я бы, кстати, интуитивно, поступил бы точно так же

Вообще, сложно что-то рекомендовать, т.к. структур нет.

Но из общих соображений:

1. Для полярных:
200-300А Sil C18 (>15%C), в качестве элюента МеСN, MeOH + 50-200mM TEA, TPA, TBA + АсОН (HCOOH) рН соотв. 6-8 (подобрать). С ионизацией все будет нормально (ESI).

HILIC, конечно, будет не "фонтан" по эффективности. Только, НЕ СТОИТ их "пихать" на аминофазу в HILIC mode. Будете думать потом, чем их десорбировать.

2. Для гидрофобных:
200-300А Sil Butyl, Sil C8, Cil Phenyl (в общем <10%C). МеCN, MeOH и что-то сильнее,уж сами смотрите.

Насчет различия в один атом "S" - смотря в какой форме и где он расположен. Т.е. задача может быть или крайне сложной или относительно простой.

Насчет упаривания - перебор. Если бы я варил 2 месяца что-то,то я бы "с бубном прыгал" вокруг целевых соед., а Вы 50 градусов даете.

З.Ы.: Вы какой метод ионизации используете (ESI)? С ионизацией проблем нет?

Андрейвладими
Пользователь
Ранг: 139

26.10.2010 // 20:15:09

Всем спасибо за советы. Перебрал ряд колонок. Для первого синтезированого вещества с М = 5066 подошла Delta-Pak C4 300A(Waters). На ней касивые узкие пики вместо горбов. На различных колонках с порами 80 - 110А ничего хорошего не получилось. Мне обещали на следующей неделе аналитическую и препаративную колонки C18 300A. Попробую и этот сорбент.

КонстантинС пишет:
Тогда - попробуйте в хилике аминофазу - без шуток. Пики могут стать конкретно уже, чем на силикагеле.

У меня на молекулу по 10 - 20 кислых фосфатов (как результат суммарный отрицательный заряд 10 - 20). Если я не ошибаюсь, то такое вещество не смыть без использования нелетучего буфера (фосфатного, например). Или я ошибаюсь?

Андрейвладими
Пользователь
Ранг: 139

08.11.2010 // 18:13:23

Может быть кому - нибудь пригодиться:

Колонки тестировались на 3-х достаточно неполярных веществах с М=5066, 6404 и 6290

Ни на одном сорбенте с порами 80 - 130А не удалось получить вразумительной картины, одни горбы.

Все использованые крупнопористые сорбенты:
Диасфер 200-С4 6 мкм (БиоХимМак СТ)
Диасфер 200-С18 6 мкм (БиоХимМак СТ)
Delta-Pak C4 300A 5 мкм (Waters)
Nucleosil-300 C18 7 мкм
дали красивые узкие пики. Принципиальной разницы между 200 и 300А я не заметил.

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

08.11.2010 // 18:30:05

Андрейвладими пишет:
Всем спасибо за советы. Перебрал ряд колонок. Для первого синтезированого вещества с М = 5066 подошла Delta-Pak C4 300A(Waters). На ней касивые узкие пики вместо горбов. На различных колонках с порами 80 - 110А ничего хорошего не получилось. Мне обещали на следующей неделе аналитическую и препаративную колонки C18 300A. Попробую и этот сорбент.

КонстантинС пишет:
Тогда - попробуйте в хилике аминофазу - без шуток. Пики могут стать конкретно уже, чем на силикагеле.
У меня на молекулу по 10 - 20 кислых фосфатов (как результат суммарный отрицательный заряд 10 - 20). Если я не ошибаюсь, то такое вещество не смыть без использования нелетучего буфера (фосфатного, например). Или я ошибаюсь?

Элюент придется "закислить" - это однозначно. Но на счет неорганической соли - не уверен.. думаю, что совершенно это необязательно. И для элюирования такой полярной структуры, конечно, доля воды в элюенте будет достаточно высокой. Другими словами, колонка на основе силикагеля такой пытки может не выдержать.

с другой стороны, есть хилик фазы на полимерной основе - и аминофаза, и амид-С1. Им высокая доля воды никак не должна мешать.
Жалко уходить от хилика, потому что при хорошем старании результат можно получить очень хороший, как мне кажется. ОФ не даст нужной емкости и (возможно) селективности, ионный обмер исключаем из-за буфера.. остается хилик..

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

ЦКП-ИАСЦ ОАО «Государственный научно-исследовательский и проектный институт редкометаллической промышленности «Гиредмет»
Оказание услуг в сфере диагностики, сертификации, стандартизации и метрологического обеспечения производства перспективных материалов на основе редких, цветных и драгоценных металлов, высокочистых веществ и полупроводников, минерального и вторичного сырья, полупродуктов, сплавов и пр.

Андрейвладими
Пользователь
Ранг: 139

09.11.2010 // 10:51:25

КонстантинС пишет:

Андрейвладими пишет:
Всем спасибо за советы. Перебрал ряд колонок. Для первого синтезированого вещества с М = 5066 подошла Delta-Pak C4 300A(Waters). На ней касивые узкие пики вместо горбов. На различных колонках с порами 80 - 110А ничего хорошего не получилось. Мне обещали на следующей неделе аналитическую и препаративную колонки C18 300A. Попробую и этот сорбент.

КонстантинС пишет:
Тогда - попробуйте в хилике аминофазу - без шуток. Пики могут стать конкретно уже, чем на силикагеле.
У меня на молекулу по 10 - 20 кислых фосфатов (как результат суммарный отрицательный заряд 10 - 20). Если я не ошибаюсь, то такое вещество не смыть без использования нелетучего буфера (фосфатного, например). Или я ошибаюсь?
Элюент придется "закислить" - это однозначно. Но на счет неорганической соли - не уверен.. думаю, что совершенно это необязательно. И для элюирования такой полярной структуры, конечно, доля воды в элюенте будет достаточно высокой. Другими словами, колонка на основе силикагеля такой пытки может не выдержать.

с другой стороны, есть хилик фазы на полимерной основе - и аминофаза, и амид-С1. Им высокая доля воды никак не должна мешать.
Жалко уходить от хилика, потому что при хорошем старании результат можно получить очень хороший, как мне кажется. ОФ не даст нужной емкости и (возможно) селективности, ионный обмер исключаем из-за буфера.. остается хилик..

Для аналитики вполне может подойти, а для препаратива - сложнее, наверняка умрёт при упаривании. Если нейтрализовать перед упариванием, а потом обессолить, то может и ничего.

Андрейвладими
Пользователь
Ранг: 139

09.11.2010 // 11:34:52

Редактировано 1 раз(а)

virtu пишет:
Farma же написал, что интуитивно Я бы, кстати, интуитивно, поступил бы точно так же

Вообще, сложно что-то рекомендовать, т.к. структур нет.

Но из общих соображений:

1. Для полярных:
200-300А Sil C18 (>15%C), в качестве элюента МеСN, MeOH + 50-200mM TEA, TPA, TBA + АсОН (HCOOH) рН соотв. 6-8 (подобрать). С ионизацией все будет нормально (ESI).

HILIC, конечно, будет не "фонтан" по эффективности. Только, НЕ СТОИТ их "пихать" на аминофазу в HILIC mode. Будете думать потом, чем их десорбировать.

2. Для гидрофобных:
200-300А Sil Butyl, Sil C8, Cil Phenyl (в общем <10%C). МеCN, MeOH и что-то сильнее,уж сами смотрите.

Насчет различия в один атом "S" - смотря в какой форме и где он расположен. Т.е. задача может быть или крайне сложной или относительно простой.

Насчет упаривания - перебор. Если бы я варил 2 месяца что-то,то я бы "с бубном прыгал" вокруг целевых соед., а Вы 50 градусов даете.

З.Ы.: Вы какой метод ионизации используете (ESI)? С ионизацией проблем нет?

Начну с конца.

С ионизацией проблеммы есть. Точнее были и очень серьёзные. В бикарбонате или формиате/ацетате аммония электроспрей даёт моно, ди, три и тетра анионы. В триэтиламмоний или диметилгексиламмоний бикарбонате нет и следа нужных анионов. В LC/MS используем электроспрей (API-ES, приборы - 1100 LC (Agilent Technologies)). Сам работаю по UV254.

Я "с бубном прыгаю" уже пару лет. Именно поэтому пришлось завести свой прибор, в своих руках вещество куда как целее. Вообще у этих веществ кучка непрятных особенностей, зачастую непонятных. Понятно, что сперва думается, затем пробуется на крошке, затем масштабируется на все 20 - 60 мкмоль. Один раз дал маху - проверил живучесть при высушивании на одном веществе, а на его аналоге поленился, за что и поплатился.

Одна из особенностей полярных веществ состоит в том, что небольние изменения в гидрофобной части очень сильно влияют на время удерживания, например дополнительный атом серы увеличивает время выхода (Jemini C18) с 17.5 минут до 20 при М = 2027... Изменения же в полярной части ну очень мало сказываются на подвижности.

P.S. Извините, структуры показать не могу, работаю на клиента с договором о конфиденциальности.

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

09.11.2010 // 18:20:47

Мммм.. не очень понял что значит "умрет при упаривании".. вещество умрет? из-за повышения температуры из-за доли воды? но оф элюент тоже на основе воды.. а кислоту можно летучую использовать..

Андрейвладими
Пользователь
Ранг: 139

11.11.2010 // 14:40:42

КонстантинС пишет:
Мммм.. не очень понял что значит "умрет при упаривании".. вещество умрет? из-за повышения температуры из-за доли воды? но оф элюент тоже на основе воды.. а кислоту можно летучую использовать..

Это означает, что вещество не живёт при низких значениях рН. Летучая и достаточно сильная кислота - TFA, рН ~2. Вещества достоверно сдохнут, даже проверять не буду. Единственный вариант, который можно попробовать - элюировать кислым элюентом и собирать фракции в перемешиваемый и охлаждаемый раствор буфера. Геморойно, хотя этот приём я очень редко, но применял. При этом время нахождения вещества в кислоте - 10 - 20 минут, может повезти и получим продукт живым.

К слову о стабильности этих веществ. При снятии TBDMS (Et3N*3HF/THF, pH ~3/RT) вещество коварно занимается самосплайсингом ну прямо как информационная РНК.... Хотя главным образот умирает (совсем умирает, реанимация невозможна). Весело, просто обхохочешься...

virtu
VIP Member
Ранг: 2135

11.11.2010 // 20:15:55

Редактировано 1 раз(а)

Андрейвладими пишет:
Начну с конца.

С ионизацией проблеммы есть. Точнее были и очень серьёзные. В бикарбонате или формиате/ацетате аммония электроспрей даёт моно, ди, три и тетра анионы. В триэтиламмоний или диметилгексиламмоний бикарбонате нет и следа нужных анионов. В LC/MS используем электроспрей (API-ES, приборы - 1100 LC (Agilent Technologies)). Сам работаю по UV254.

Одна из особенностей полярных веществ состоит в том, что небольние изменения в гидрофобной части очень сильно влияют на время удерживания, например дополнительный атом серы увеличивает время выхода (Jemini C18) с 17.5 минут до 20 при М = 2027... Изменения же в полярной части ну очень мало сказываются на подвижности.

P.S. Извините, структуры показать не могу, работаю на клиента с договором о конфиденциальности.

Вы, наверно, оптимизацию не проводили в случае с ТЭА и ДМГА. Подавление ионизации следовало ожидать.

Насчет изменения хром. поведения:
Без конкретики - бессмысленный разговор.

Насчет HILIC c полярными соед., в Вашей ситуации, я бы даже не стал рассматривать такой вариант, т.к. аминофаза не подойдет точно, силикагель - вполне вероятно, но можно пробовать на амиде, сшитом диоле и т.д. В общем, нужны сорбенты, время и много энергии сверху.

Советую посмотреть "условия" разделения олигонуклеотидов и т.д. И отталкиваться уже от них.

З.Ы.: Это я уже давно понял


Ответов в этой теме: 21 Страница: 1 2 3 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты