Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Определение жирных кислот в биоматериале >>>

  Ответов в этой теме: 13
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1257


18.01.2011 // 18:42:35     

OYura пишет:
Пробоподготовка несложная: капля масла в 2 мл гексана, плюс 0,2 мл метилата натрия, на фильтр и готово. Анализ проводится методом внутренней нормализации: все пики 100% и соответственно по компонентах.
Необходимо провести анализ жирнокислотного состава мембран эритроцитов (они уже выделены и заморожены). Еще предстоит пересылка (4 часа).
Может пусть их сразу на месте проэкстрагируют смесью хлороформ: метанол:вода (какое соотношение?)?
Дальше метелирование просто в этой системе и на хроматограф?
Ионола у них нет пока, может какой-нибудь другой антиоксидант можно применить?
Для начала хотелось бы попроще.
Подробности очень интересуют и фракционирование хотелось бы поставить в ближайшем будущем.


1. Вы проводили аналитическую ТСХ полученного "масла", чтобы знать какие компоненты там присутствуют? В противном случаем вы можете говорить только об анализе суммарных липидов - это, думаю, совсем не то, что вам нужно. Возьмите пластинку типа Sorbfil и в системе гексан:диэтиловый эфир: ледяная уксусная 90:10:1 v/v/v поделите каплю гексанового или бензольного раствора экстракта со стандартной смесью (добавьте в стандарт стеринов, ТАГи, СЖК, эфиры стеринов, например). В качестве "проявителя" очень удобен 4-6% раствор фосфорномолибденовой кислоты в 50% водном изопропаноле или метаноле.
2. Так как Вы не можете утверждать, что работаете с чистым классом липидов, а с суммарным экстрактом, то я бы не стал пренебрегать омылением в 4% водном KOH, с последующим отделением неомыляемых компонентов и выделением чистой фракции СЖК, которую бы в последствии и подвергал метилированию. Зачем вам лишняя грязь в колонку? ))
3. Насчет "проэкстрагируют на месте" я всегда вспоминаю "хочешь что-то сделать хорошо - сделай это сам" )) Потому как нет гарантий чистоты исходных реактивов, посуды и т.д. и т.п. А одно касание руками шлифа колбы - и в вашем экстракте примерно пара мг ваших собственных липидов )))
4. По поводу ионола.. Все антиоксиданты - это палка о двух концах. Мы тоже используем ионол, когда экстракты необходимо хранить долго - применяем 0,001% раствор в бензоле. Но! Рано или поздно вы растворитель отгоните для работы с вашим экстрактом, а вот ионол останется и в значительно большей концентрации, и в этом случае он из антиоксиданта превратится в окислитель. Посему, если цикл "экстракция - метилирование" занимает один день, то я бы не стал добавлять ионол. Можете попробовать еще токоферол, сезамол и т.д.
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
OYura
Пользователь
Ранг: 45


19.01.2011 // 12:18:51     
1. ТСХ конечно интересно (проблема стандарты), но понятно что там присутствуют практически все виды липидов, так как это реальный биологический объект - мембраны эритроцитов.
2. Я бы с удовольствием отделил бы неомыляемые липиды, только вот как..... мембранная фракция + 4% водный KOH + кипятить часа 3 (?), дальше.... как отделить неомыляемые липиды?....они будут в виде осадка? .....дальше экстракция солей ЖК (тоесть мыл)....чем?.....наверное щелочь необходимо нейтрализовать и даже создать кислую среду (HCl ?) ?.......еще вот нет уверенности пройдет ли метилирование нормально, ведь по методике метилатом натрия метилируем ЖК в ацилглицеролах.
3. Тут вопрос в перевозке, за 3 часа разморозятся.
4. Конечно лишних веществ в пробах и соответственно в колонке нам не нужно.
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1257


19.01.2011 // 23:29:56     
Редактировано 3 раз(а)


OYura пишет:
1. ТСХ конечно интересно (проблема стандарты), но понятно что там присутствуют практически все виды липидов, так как это реальный биологический объект - мембраны эритроцитов.
2. Я бы с удовольствием отделил бы неомыляемые липиды, только вот как..... мембранная фракция + 4% водный KOH + кипятить часа 3 (?), дальше.... как отделить неомыляемые липиды?....они будут в виде осадка? .....дальше экстракция солей ЖК (тоесть мыл)....чем?.....наверное щелочь необходимо нейтрализовать и даже создать кислую среду (HCl ?) ?.......еще вот нет уверенности пройдет ли метилирование нормально, ведь по методике метилатом натрия метилируем ЖК в ацилглицеролах.
3. Тут вопрос в перевозке, за 3 часа разморозятся.
4. Конечно лишних веществ в пробах и соответственно в колонке нам не нужно.

Расскажу, как это делаем мы, авось наш опыт пригодится ))
Итак, по поводу стандартов. Стерины можно взять SIGMовские, если что, могу поделиться )
ТАГи можно выделить из любого растительного масла, СЖК получаем путем омыления масла; проведя метилирование, "сварим" и метиловые эфиры - редкость, но иногда эфиры жирных кислот встречаются. Вот вам вполне терпимый стандарт. Можно еще каких-нибудь углеводородов добавить типа холестеролпальмитата )
Кипятить три часа нет смысла. Даже на омыление растительной ткани, богатой лигнином, хватает 45-60 минут.
Отделить неомыляемые совсем нетрудно, нужно только руку набить на этом деле. После того, как колба - я использую остродонные - из них удобнее декантировать (а еще удобнее с боковым отростком), где шло омыление, остынет настолько, что ее можно держать в руках, приливаем туда чистый гексан (его лучше перед работой перегнать), взбалтываем, стараясь не допускать пенообразования, и осторожно декантируем. Эту процедуру повторяем до полного исчезновения окраски гексановой фракции + пару раз для страховки. В вашем случае, видимо, придется устанавливать опытным путем оптимальное количество декантаций. Так вы отделите неомыляемые липиды - можете ради интереса поставить ТСХ.
Затем нейтрализуем щелочь 20% серной кислотой до кислой среды (по индикаторной бумаге) и снова гексаном экстрагируем уже свободные жирные кислоты, затем гексан отгоняем, взвешиваем фракцию СЖК и добавляем, в случае необходимости, внутренний стандарт так, чтобы отношение "проба-стандарт" было 20 к 1.
Ну а далее метилирование: к сухим жирным кислотам приливаем смесь MeOH:АсCl 10:1 и выдерживаем с обратным холодильником при температуре кипения метанола около часа, затем отгоняем метанол досуха, присыпаем в колбу тонкодисперсной (5-40 меш) окиси алюминия - она свяжет всякую дрянь, и смываем с нее наши метиловые эфиры парой порций гексана )

P.S. Если экстракцию проводите не вы лично, то я бы советовал немедля после экстракции отогнать хлороформ:метанольную смесь и заменить ее бензолом, в нем же и везти\хранить для дальнейшей работы. Для липидов это безопаснее, а то эта парочка любит провоцировать ацильную миграцию и прочие каки (

P.P.S. И, на всякий случай, используйте только стеклянную посуду при работе с органическими растворителями )

  Ответов в этой теме: 13
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты