Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Вопрос к специалистам по ГПХ >>>

  Ответов в этой теме: 22
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Вопрос к специалистам по ГПХ
стрекоза
Пользователь
Ранг: 10

06.06.2011 // 18:03:31     
Редактировано 1 раз(а)

Всем доброго времени суток. Достался нам "в подарок" ГПХ хроматограф Knauer с рефрактометрическим детектором. Колонки фирмы Phenomenex для водных растворов. И набор стандартов полистиролсульфоната натрия с разными молекулярными массами. Состояние всего этого богаства сомнительное. Всей системе порядка 6 лет. Толком на нем не работали. Долго мыли и полоскали колонку, т.к. хранилась она совершенно не так как положено. На днях решили все же проверить колонку. В паспорте к колонке указан этиленгликоль в качестве стандарта с временем выхода 13,68 мин. Попробовали воспроизвести. Получили 12,88 мин, т.е. разница 0,8 мин. Отсюда вопрос № 1: Это терпимо? Нормально? Или совсем не годится и колонка нерабочая?
Далее попробовали прописать стандарты (0,03 % растворы в 0,05 М нитрате натрия, объем пробы 20 мкл). Получилась совершеннейшая ерунда, и непонятно, что с этим делать... время выхода не зависит от молекулярной массы стандарта. На скорости 1 мл/мин - 9 мин, на скорости 0,3 мл/мин - 33 мин. И это в интервале молекулярных масс от 158000 до 2350000. Буду признательна, если кто подскажет с чем такое может быть связано? И последний вопрос: с чем может быть связано, что , например, вкалываешь пробу, соответственно через какое-то время рисуется пик, а бывает так, что вколол, а пика нет, даже через час....Делаем все идентично. Рефрактометр дурит?
Надеюсь на ваши ответы и помощь.
Заранее спасибо.
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
Serga
Пользователь
Ранг: 1806


06.06.2011 // 19:43:42     
Если просто этиленгликоль- то это стандарт для Vt- объема полной проницаемости. В качестве такого стандарта подойдет любое низкомолекулярное соединение (хотя бы и ацетон).
Разделение в ГПХ ограничено диапазоном объемов от полной эксклюзии Vo до полной проницаемости Vt. Для расширения объемов составляют наборы колонок (чаще всего- различающиеся диаметром пор. Они обеспечивают линейную калибровку по масса). В принципе, делить можно и на одной колонке, но диаметр пор сорбента должен позволять молекулам попадать в поры.
Вы же ничего не написали ни про стандарты, ни про характеристики колонки.
В принципе, поскольку время выхода зависит от доступного для полимера процента пор, его увеличение со снижением скорости потока вполне нормально (с 9 до 33 мин) и ничего странного тут нет. Главное, чтоб не было никаких взаимодействий полимера с материалом сорбента- в таком случае можно наблюдать разные времена Vt для разных соединений (а оно для всей низкомолекулярной органики должно быть одинаковым).
Рефрактометр "дурить" не может, если он работает нормально. "Последние пики" могут исчезать и появляться и это связано с непостоянством состава растворителя для пробы. Из вашего сообщения непонятно, о каких пиках идет речь.
Для детектирования рефрактометром важно, чтоб коэффициент преломления анализируемого полимера и элюента различались как можно сильнее.
стрекоза
Пользователь
Ранг: 10


06.06.2011 // 19:53:11     
Редактировано 1 раз(а)

Колонка расчитана на интервал молекулярных масс от 100 000 до 15 000 000, поэтому мы и использовали стандарты (5 шт) с разными ММ - от 158 000 до 2 350 000. Каждый стандарт вводили отдельно. Время выхода одинаковое для всех. Нет пика - это я имела ввиду, что вкалываешь стандарт, например с ММ 158 000, а пика нет, просто нет, ни через 10 мин, ни через 30, ни через 60....ничего нет, наблюдается "базовая" линия, которая ползет вверх с очень небольшим углом.
Нет, японимаю, что увеличение времени выхода с уменьшением скорости элюирования - это норма. Я не понимаю, почему время выхода полимера не зависит от его ММ (все стандарты достаточно узкодисперсны)
Serga
Пользователь
Ранг: 1806


06.06.2011 // 21:10:23     

стрекоза пишет:
Время выхода одинаковое для всех. Я не понимаю, почему время выхода полимера не зависит от его ММ (все стандарты достаточно узкодисперсны)
Ну хорошо. А физические параметры колонки известны? Время полной эксклюзии, полной проницаемости? Размеры колонки? 4*300 мм (или 8*300), а диаметр пор сорбента?
Вы можете сказать, на каком объеме элюента (который у вас одинаков для всех стандартов) выходят все стандарты? Если оно ближе к Vo, значит полимеры просто не попадают в поры и попадают в полную эксклюзию.

Золотки, ну сколько можно с вас тянуть клещами элементарные вещи? Вы заставляете нас заниматься экстрасенсорикой, а мы этого не любим и начинаем психовать. Для решения вашей проблемы вы не представили достаточно данных. Потом начинаете обижаться.
Serga
Пользователь
Ранг: 1806


06.06.2011 // 21:34:28     
Если материал сорбента был полимерным (а не силикагелем), он мог высохнуть от длительного хранения. Поскольку "откачать" его вы пытались, но он все равно не делит, его проще выкинуть и не париться.
стрекоза
Пользователь
Ранг: 10


06.06.2011 // 22:55:36     
Редактировано 1 раз(а)

Колонка 7,8*300 фирмы Phenomenex
PolySep-SEC GFC-P 6000 LC
Вот ссылка на сайт прозводителя:
www.phenomenex.com/Products/Search/HPLC
Удерживаемый объем получается 9,9 мл при скорости 0,3 мл/мин и времени выхода 33 мин)
Со всем остальным как-то сложнее
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
Экоаналитика, Эколого-аналитическая ассоциация Экоаналитика, Эколого-аналитическая ассоциация
Ассоциация является независимой творческой организацией, объединяющей на добровольной основе более 40 организаций России из различных областей науки, её практических приложений и системы образования. Ассоциация располагает собственной научной и производственной базой. Производит более 100 наименований стандартных образцов и аттестованных растворов.
virtu
VIP Member
Ранг: 2107


06.06.2011 // 23:31:16     
Редактировано 2 раз(а)

to стрекоза:

1. Указать хром. условия и т.д. (элюент, сорбент, геом. параметры колонки, темп. колонки, сорбаты и их концентрации и т.д.).

2. Проверить качество исходных тестовых соединений. Проверить правильность приготовления тестовых растворов. Увеличить концентрацию тест. соед. до 0.2-0.4%w (приготовить в элюенте).

3. Проверить еще раз всю систему (этиленгликоль). Оценить чувствительность РД по этиленгликолю.

З.Ы.: Думаю, Вы наблюдали только NaNO3.
Serga
Пользователь
Ранг: 1806


07.06.2011 // 4:25:41     
Сорбент полимерный ("гелевый" ), с огромными порами (6000 А), большими зернами, мягкий, поэтому эта штука (его зерна) легко сминается при неправильной эксплуатации. Легко мог и усохнуть. Даже силикагели с примерно равными диаметрами пор требуют аккуратного обращения, не говоря уже о полимерах.
Короче, вам остается только проверить разницу между полной эксклюзией и полной проницаемостью. Возьмите раствор голубого декстрана (ММ~2000000) и чего-нибудь низкомолекулярного (этиленгликоль, ацетон).
Если все это выходит в одно время- колонку просто выбрасываете без лишних слов и размышлений.
Сейчас я уже и не скажу навскидку, какой примерный объем эксклюзии у колонки с таким сорбентом, так что- поэкспериментируйте еще немного. Ваши 9,9 мл больше похожи на объем полной проницаемости (хотя в поры таких размеров влезут даже плазмиды, пожалуй ).
стрекоза
Пользователь
Ранг: 10


07.06.2011 // 11:37:06     
to virtu:
как можно проверить качество стандартов? Определить их ММ каким-то др. способом не представляется возможным в наших условиях.
как проверить чувствительность рефрактометра по этиленгликолю?

З.ы. прошу заранее извинить меня, если я задаю глупые вопросы по вполне очевидным вещам. Но прибор только что свалился на мою голову. И с этим методом я никогда раньше не сталкивалась. Так что сейчас приходится одновременно читать теорию и разбираться работает ли прибор. Голова квадратная.
стрекоза
Пользователь
Ранг: 10


07.06.2011 // 11:39:48     
to serga:

боюсь, что действительно, колонка нерабочая, так как хранилась она по принципу "валялась в коробке", никто ее не консервировал.
стрекоза
Пользователь
Ранг: 10


07.06.2011 // 11:46:00     
Подскажите, пожалуйста, колонки какой фирмы лучше купить? Новые?
Исходя из того, что наши рабочие объекты - водорастворимые полимеры, в том числе:
полиэлектролиты как катионные, так и анионные, достаточно полидисперсные, с ММ от 500000 до 2-3 млн, есть и "крокодильчики" по 12 млн.
неионогенные водорастворимые полимеры с ММ до 100 000
Интересуют именно колонки для водных растворов.
Понятно, что колонок нужно несколько. Насколько хороши колонки Phenomenex? Или может быть Waters? Может быть кто-нибудь может дать свои отзывы о колонках этих фирм.

  Ответов в этой теме: 22
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты