| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Минерализация липидов. нужна помощь!!! >>>
|
 |
| Автор | Тема: Минерализация липидов. нужна помощь!!! | ||
|
innakem Пользователь Ранг: 5 |
 15.06.2011 // 11:46:43
Здравствуйте всем! мне нужна помощь - не могу добиться удовлетворительной минерализации экстракта липидов и калибровочных расворов. мне необходимо количественное определение общих фосфолипидов. пробую методику : "1—2 мл взятого на анализ раствора (мой исходный хлороформный экстракт липидов 0,1мл + 1 мл хлороформа) помещают в жаростойкую пробирку, добавляют 0,3 мл концентрированной серной кислоты и осторожно нагревают раствор на горелке, песчаной бане (у меня солевая баня) до тех пор, пока почти полностью выпарится вода и раствор в колбе приобретет бурую окраску.После этого пробирку охлаждают, добавляют 2—3 капли пергидроля и раствор снова нагревают в течение 5—10 мин. Если раствор при этом побуреет, добавляют новую порцию пергидроля. " проблема: пергидроль не разлогается.добавляю 100 мкл, в меньших кол-вах просветление пробы не идет. раствор пузыриться и я не могу повести фотометрированеи и малахитовым зеленым. нагревала и час, и два, и оставляла в термостате на ночь при 60С. нагревание с хлорной кислотой тоже не идет - просветления пробы нет. подскажите, что мне делать!!!руки опускаются уже... |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
chemist-sib Пользователь Ранг: 547 |
15.06.2011 // 17:46:49
А не хотите попробовать добавлять восстановитель для удаления избытка окислителя из готового минерализата: соли гидразина или гидроксиламина, сульфит натрия..? Концентрацию и объем раствора подобрать методом "научного тыка", хотя бы под контролем йодкрахмальной бумаги. |
||
|
sinthetic Пользователь Ранг: 3569 |
15.06.2011 // 21:44:45
А почему нельзя довести образец до кипения, чтобы пероксид водорода разложился? Вы его, видимо, недогреваете. |
||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
15.06.2011 // 23:11:27
Если время терпит, то могу спросить у своего коллеги завтра днем - он в 70-е плотненько работал над фосфолипидами и спектрофотометрически определял в них фосфор, как раз строил калибровочные кривые и т.д. |
||
|
kot Пользователь Ранг: 1986 |
16.06.2011 // 8:29:31
Поддержу сказанное. 2 sinthetic, все хотел спросить а вы что заканчивали (если не секрет, конечно). Просто судя по нику орг.химию? Я вроде тоже  .
|
||
|
sinthetic Пользователь Ранг: 3569 |
16.06.2011 // 9:50:54
Да вроде не секрет... Химфак Самарского госуниверситета, кафедра орг. химии (+ НИС) |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
kot Пользователь Ранг: 1986 |
16.06.2011 // 12:18:51
Так может быть у вас и специализация «синтетик», в наше время помню и стар и млад и доктора и стажеры под тягой сиживали и своими руками варили всякую интересную хрень. Это же блин интересно, как было! Причем тогда возможности (как для синтеза так и для анализа ) по сравнению с нынешними были мизерные. А сейчас грят старшее поколение руками в основном «разводит» (во всех смыслах), ну а молодежь смотрит на это и делает соответствующие и не вполне правильные выводы.  Извиняюсь за оффтоп. |
||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
16.06.2011 // 17:26:50
Редактировано 2 раз(а) Что у вас за объект? Какая методика экстракции? Так как хлороформная экстракция не самый оптимальный вариант для количественного определения фосфолипидов - большая их часть остается в нативной ткани... Или вы используете хлороформ-метанольную смесь с подкислением? И еще: желательно из полученного экстракта отбросить нейтральные липиды, чтобы не мешались )) Минерализация липидного фосфора В колбу Кьельдаля пипеткой на 5 мл вносили точный объем раствора липидов (10-20 мг). Шлиф и стенки колбы омывали хлороформом и при слабом вакууме выпаривали растворители на кипящей водяной бане. В колбу добавляли 2 капли азотной кислоты и осторожно, не допуская обугливания, нагревали на плитке Кьельдаля (температура внутри колбы 175 градусов) до прекращения интенсивного выделения бурых паров и образования однородной темноокрашенной смеси. Колбу охлаждали до комнатной температуры, вносили 0,3 мл хлорной кислоты и постепенно, при непрерывном помешивании, нагревали до 175 градусов в течение 2-3 минут. После появления тяжелых белых паров, колбу оставляли на плитке при 200 градусах в течение 15-30 минут до полного обесцвечивания кислоты. В охлажденную колбу приливали 0,5 мл раствора аммиака, закрывали резиновой пробкой с втулкой и выдерживали при 100 градусах в вакууме водоструйного насоса до полного выпаривания жидкости и исчезновения аммиачного запаха. В колбу добавляли точно 25 мл воды и перемешивали. А. В. Жуков, А.Г. Верещагин О количественном определении фосфора в липидах семян сои. Физиология и биохимия культурных растений, том 2, вып. 1, 1970 A.V. Zhukov and A.G. Vereschagin Quantitative determination of phosphorus in soybean lipids. Journal of Lipid Research. - Vol. 10, 1969 |
||
|
innakem Пользователь Ранг: 5 |
16.06.2011 // 22:19:46
спасибо, попробую. нагреваю я его, до двух часов нагреваю на соляной бане...температура более чем достаточная. грешу на пергидроль - раздобыла свежий, завтра буду пробовать с ним. спросите, пожалуйста, буду очень благодарна. |
||
|
innakem Пользователь Ранг: 5 |
16.06.2011 // 22:22:32
Редактировано 1 раз(а) эстрагировала липиды по Фолчу из печени крыс, без подкисления. спасибо за методику. |
||
|
innakem Пользователь Ранг: 5 |
16.06.2011 // 22:25:59
и еще такой вопрос. нагреваю образец с хлорной кислотой, до просветления и обесцвечивания. довожу остаток водой до 1,5 мл(по методике) - здесь все хорошо. но как только добавляю цветной реактив с малахитовым зеленым - вываливаются зеленые хлопья в огромном кол-ве - муть на всю пробирку. из-за чего такое может быть? в калибровочных образцах все хорошо.... всем спасибо за ответы! |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
