| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Определение пирофосфата в присутствии фосфата >>>
|
 |
| Автор | Тема: Определение пирофосфата в присутствии фосфата | |||||
|
Pavel Пользователь Ранг: 81 |
 09.07.2005 // 16:20:50
Существуют ли качественные реакции для определение пирофосфата в присутствии фосфата? Требуется высокая чувствительность (около 1 нг пирофосфата). Заранее благодарен. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
11.07.2005 // 11:39:59
Для определения пирофосфатов (дифосфатов) существует много различных методов, основанных как на «мокрой» химии, так и на титровании или фотоэлектроколориметрии. Все они достаточно подробно описаны в литературе. В частности, в книжке У.Дж.Уильямс. Определение анионов: Справочник. Пер. с англ.-М.- Химия, 1982-624 с. Только, боюсь, при указанной Вами концентрации, кроме как ионная хроматография Вам ничего и не подойдет то… |
|||||
|
knoxchem Пользователь Ранг: 515 |
11.07.2005 // 18:22:02
Только, боюсь, при указанной Вами концентрации, кроме как ионная хроматография Вам ничего и не подойдет то… Боюсь нет пока ещё детекторов, чтобы чуствовать такие количества фосфатов. Понадобится предварительное концентрирование. Но если у вас 10 кратный и выше избыток фосфата, то это также представляетс крайне затруднительным. Может быть масс-спектрометрия? Или какая-нить новая супер-пупер лазерная спектроскопия. Эти спектральные методы расплодились за последние 10 лет как тараканы...Попробуйте поискать на и Ещё думаю о флуоресцентой спетроскопии, но не знаю, не знаю...почуствует ли она 1 нг и как матрица будет влиять?. |
|||||
|
Pavel Пользователь Ранг: 81 |
12.07.2005 // 7:43:44
Спасибо за предложения! Задача в общем-то состоит в следующем - выяснить, является ли продуктом ферментативного гидролиза органического пирофосфата два неорганических фосфата или один неорганический пирофосфат. Я тоже об ионной хроматографии думал, как об единственном средстве. Детектора у нас, правда, подходящего нет, поэтому придется пробовать электроспрей  . Пробовал сегодня закалывать 0.3 мкМ стандарт - пики получались отрицательные  Хорошо он, в общем, все супрессирует. Самый незамороченный способ - пометить пирофосфат 32Р или 33Р и посмотреть на продукты на ионообменной ТСХ. Только я не уверен, что такой меченый стандарт можно купить. Я еще думал про комплексонометрическое титрование пирофосфата, но его в образце наверное слишком мало для такого метода. Гляну книгу по анализу анионов в библиотеке. |
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
12.07.2005 // 10:14:01
Что касается чувствительности в ионной хроматографии, то речь не шла о банальном кондуктометре. А чем плохо УФ-детектирование при постколоночном реакторе с молибдатом аммония? Там можно взять и не такие концентрации. Сложно? Да. Но и задачка не из простых. Кроме того, есть разработки Г.И.Барама по определению анионов на динамически эмулированном из С18 ионообменнике с инверсным Уф-детектированием. В этом режиме пирофосфат и фосфат поделятся за километр. Вот только рН должен быть не очень кислый, чтобы пирофосфат не гидролизовался раньше времени. |
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
12.07.2005 // 13:01:05
И еще... Сейчас глянул рекомендованную мной книжку и там приводятся все условия для разделения фосфатов и полифосфатов на ТСХ. Если Вам достаточно полуколичественной оценки, то этот метод очень чувствителен при использовании для проявления молибденового реактива. Образующееся синее окрашивание фосфорно-молибденового гетерополикомплекса позволит зафиксировать доли нанограмма каждого из фосфатов. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Pavel Пользователь Ранг: 81 |
12.07.2005 // 20:37:05
Леонид, банального кондуктометра у нас как раз и нет. Но ТСХ я попробую однозначно. Про молибденовый комплекс я думал, но до меня не дошло, что кроме фотоспектрометрического варианта, можно просто проявить им пластинку. Спасибо. |
|||||
|
knoxchem Пользователь Ранг: 515 |
12.07.2005 // 21:25:47
Редактировано 1 раз(а) Павел, На уровне 1 нг, вы на пластинке ничего не увидите, хоть десять раз её проявляйте. Или вы спутали нг с мкг? Для того чтобы увидеть на пластинке даже хорошо светящийся комплекс, концентрация раствора, из которого наносится капля, должна быть не меньше 10мкг/мл |
|||||
|
Pavel Пользователь Ранг: 81 |
12.07.2005 // 21:37:31
Я оцениваю, что в моих образцах 1-3мкМ раствор пирофосфата. То есть в 100мкЛ должно быть 0.1-0.3 нмоль = 15-50нг . Помню, что в справочнике биохимика описывались чувствительные методы проявления фосфатов в виде молибденовых комплексов, но его у меня сейчас под рукой нет. Приду домой - посмотрю. |
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
13.07.2005 // 8:50:03
А вот и неправда Ваша! Я могу утверждать, что при образовании синего гетерополикомплекса фосфаты можно увидеть на уровне 0,1 нг в наносимой пробе. Это один из самых чувствительных реактивов в спектрофотометрии. А делается все просто. Пластинка опрыскивается подкисленным раствором молибдата аммония а затем восстановителем, в качестве которого пойдет раствор аскорбиновой кислоты или обычный проявитель для фотобумаги, разбавленный в 2 раза. Окраска развивается в течение 3-5 мин. Только имейте в виду рН на пластинке должен быть очень кислым (менее 3, доводится солянкой), иначе такой же комплекс образуется и из кремния, которого, как Вы понимаете, на пластинке валом. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 9 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
