Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Определение пирофосфата в присутствии фосфата >>>

  Ответов в этой теме: 9

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Определение пирофосфата в присутствии фосфата
Pavel
Пользователь
Ранг: 81

09.07.2005 // 16:20:50     
Существуют ли качественные реакции для определение пирофосфата в присутствии фосфата? Требуется высокая чувствительность (около 1 нг пирофосфата).
Заранее благодарен.
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Леонид
VIP Member
Ранг: 5266


11.07.2005 // 11:39:59     
Для определения пирофосфатов (дифосфатов) существует много различных методов, основанных как на «мокрой» химии, так и на титровании или фотоэлектроколориметрии.
Все они достаточно подробно описаны в литературе. В частности, в книжке У.Дж.Уильямс. Определение анионов: Справочник. Пер. с англ.-М.- Химия, 1982-624 с.
Только, боюсь, при указанной Вами концентрации, кроме как ионная хроматография Вам ничего и не подойдет то…
knoxchem
Пользователь
Ранг: 515


11.07.2005 // 18:22:02     
Только, боюсь, при указанной Вами концентрации, кроме как ионная хроматография Вам ничего и не подойдет то…

Боюсь нет пока ещё детекторов, чтобы чуствовать такие количества фосфатов. Понадобится предварительное концентрирование. Но если у вас 10 кратный и выше избыток фосфата, то это также представляетс крайне затруднительным.

Может быть масс-спектрометрия? Или какая-нить новая супер-пупер лазерная спектроскопия. Эти спектральные методы расплодились за последние 10 лет как тараканы...Попробуйте поискать на www.sciencedirect.com и www.isiknowledge.com
Ещё думаю о флуоресцентой спетроскопии, но не знаю, не знаю...почуствует ли она 1 нг и как матрица будет влиять?.
Pavel
Пользователь
Ранг: 81


12.07.2005 // 7:43:44     
Спасибо за предложения!
Задача в общем-то состоит в следующем - выяснить, является ли продуктом ферментативного гидролиза органического пирофосфата два неорганических фосфата или один неорганический пирофосфат. Я тоже об ионной хроматографии думал, как об единственном средстве. Детектора у нас, правда, подходящего нет, поэтому придется пробовать электроспрей . Пробовал сегодня закалывать 0.3 мкМ стандарт - пики получались отрицательные
Хорошо он, в общем, все супрессирует.

Самый незамороченный способ - пометить пирофосфат 32Р или 33Р и посмотреть на продукты на ионообменной ТСХ. Только я не уверен, что такой меченый стандарт можно купить.

Я еще думал про комплексонометрическое титрование пирофосфата, но его в образце наверное слишком мало для такого метода. Гляну книгу по анализу анионов в библиотеке.
Леонид
VIP Member
Ранг: 5266


12.07.2005 // 10:14:01     
Что касается чувствительности в ионной хроматографии, то речь не шла о банальном кондуктометре. А чем плохо УФ-детектирование при постколоночном реакторе с молибдатом аммония? Там можно взять и не такие концентрации. Сложно? Да. Но и задачка не из простых.
Кроме того, есть разработки Г.И.Барама по определению анионов на динамически эмулированном из С18 ионообменнике с инверсным Уф-детектированием. В этом режиме пирофосфат и фосфат поделятся за километр. Вот только рН должен быть не очень кислый, чтобы пирофосфат не гидролизовался раньше времени.
Леонид
VIP Member
Ранг: 5266


12.07.2005 // 13:01:05     
И еще...
Сейчас глянул рекомендованную мной книжку и там приводятся все условия для разделения фосфатов и полифосфатов на ТСХ. Если Вам достаточно полуколичественной оценки, то этот метод очень чувствителен при использовании для проявления молибденового реактива.
Образующееся синее окрашивание фосфорно-молибденового гетерополикомплекса позволит зафиксировать доли нанограмма каждого из фосфатов.
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Хроматэк Хроматэк
ЗАО СКБ "Хроматэк" разрабатывает и производит газохроматографическое оборудование с 1991 года. Разработка и производство аналитического оборудования и программного обеспечения (ГХ, ГХ-МС, ВЭЖХ, ЯМР), комплексное внедрение и методическая поддержка, техническое обслуживание, разработка и освоение новых методов анализа, учебные курсы для пользователей и сервисных инженеров.
Pavel
Пользователь
Ранг: 81


12.07.2005 // 20:37:05     
Леонид, банального кондуктометра у нас как раз и нет. Но ТСХ я попробую однозначно. Про молибденовый комплекс я думал, но до меня не дошло, что кроме фотоспектрометрического варианта, можно просто проявить им пластинку. Спасибо.
knoxchem
Пользователь
Ранг: 515


12.07.2005 // 21:25:47     
Редактировано 1 раз(а)

Павел,

На уровне 1 нг, вы на пластинке ничего не увидите, хоть десять раз её проявляйте.
Или вы спутали нг с мкг?
Для того чтобы увидеть на пластинке даже хорошо светящийся комплекс, концентрация раствора, из которого наносится капля, должна быть не меньше 10мкг/мл
Pavel
Пользователь
Ранг: 81


12.07.2005 // 21:37:31     
Я оцениваю, что в моих образцах 1-3мкМ раствор пирофосфата. То есть в 100мкЛ должно быть 0.1-0.3 нмоль = 15-50нг . Помню, что в справочнике биохимика описывались чувствительные методы проявления фосфатов в виде молибденовых комплексов, но его у меня сейчас под рукой нет. Приду домой - посмотрю.
Леонид
VIP Member
Ранг: 5266


13.07.2005 // 8:50:03     

knoxchem пишет:
Павел,

На уровне 1 нг, вы на пластинке ничего не увидите, хоть десять раз её проявляйте.
Или вы спутали нг с мкг?
Для того чтобы увидеть на пластинке даже хорошо светящийся комплекс, концентрация раствора, из которого наносится капля, должна быть не меньше 10мкг/мл

А вот и неправда Ваша!
Я могу утверждать, что при образовании синего гетерополикомплекса фосфаты можно увидеть на уровне 0,1 нг в наносимой пробе. Это один из самых чувствительных реактивов в спектрофотометрии.
А делается все просто. Пластинка опрыскивается подкисленным раствором молибдата аммония а затем восстановителем, в качестве которого пойдет раствор аскорбиновой кислоты или обычный проявитель для фотобумаги, разбавленный в 2 раза. Окраска развивается в течение 3-5 мин.
Только имейте в виду рН на пластинке должен быть очень кислым (менее 3, доводится солянкой), иначе такой же комплекс образуется и из кремния, которого, как Вы понимаете, на пластинке валом.

  Ответов в этой теме: 9

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты