| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
как сделать низкую скорость потока при эксклюзионной хроматографии >>>
|
 |
| Автор | Тема: как сделать низкую скорость потока при эксклюзионной хроматографии | ||
|
Perchik Пользователь Ранг: 4 |
 06.03.2012 // 4:01:40
Здравствуйте! Поделитесь пожалуйста опытом!! Нужно разделить полимеры на колонке с наполнителем Sephadex G-200. У меня им заполнена стандартная колонка PD-10. Судя по статьям - все используют скорость потока при работе 5 мл/час. У меня при атмосферном давлении скорость потока 1,2 мл/мин!! Как я понимаю - скорость потока очень нужна для нормального разделения компонентов (это так???)))))). Колонки хорошей( с flow adapters), которую можно подключить чтобы автоматически подавался буфер с заданной скоростью - нету. Пожалуйста - у кого есть опыт - Как Вы решали такую проблему (ну там пережимали выход или под давлением буфер сверху капал??) спасибо всем огромное!!! буду очень рада советам! (ну понятно же - что ж далеко не у всех есть эти офигенские колонки - но все же как-то справляются!!!)))))))))))) |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
06.03.2012 // 11:19:02
Редактировано 1 раз(а) Здравствуйте! Знаете такую поговорку - "Голь на выдумки хитра!" ? Так вот , если у Вас имеется перистальтический насос, то сделать адаптер не представляет особой сложности : 1. Берете резиновую (из мягкой резины, лучше силиконовой) пробку по диаметру верха колонки. 2. Сверлите отверстие диаметром 2-3 мм в основании до половины пробки, далее 1 мм. 3. С верхней части, где 1 мм отверстие вставляете тефлоновый трубопровод, идущий от перистальтического насоса и вытягиваете его на длину 3-4 см за пределы нижнего конца пробки. 4. С нижней стороны пробки, где просверлили отверстие 2-3 мм вставляете коннектроную часть инсулинового шприца со снятой иглой (на худой конец - 1 мл одноразового шприца). 5. Обрезаете тело тубуса шприца так, чтобы между ним и слоем геля был зазор в 4-5 мм в смонтированном в колонку состоянии. 6. Выдвигаете тефлоновый трубопровод так, чтобы он концом касался стенки тубуса шприца - чтобы не образовывались падающие капли и не разрыхляли верхний слой геля, а стекали по стенке тубуса до слоя геля. Вот и все. Чтобы вставить или аккуратно выташить импровизированный адаптор, протыкаете пробку иглой от 20 мл инъекционного шприца или от медицинской системы. А потом вынимете иглу для обеспечения герметичности. Игла обеспечивает поступление воздуха. Просто, адаптор (пусть и импровизированный) избавит Вас от постоянного наблюдения за колонкой (чтобы не пересохла или не перелилась). |
||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1327 |
06.03.2012 // 13:04:18
...то можно еще подключить его на выход из колонки и им регулировать расход.  Правда размывание пиков несколько увеличится... 
|
||
|
Perchik Пользователь Ранг: 4 |
07.03.2012 // 1:36:25
Garry, Волгин!! Спасибо за ответы! к сожаленью - насоса в лаборатории нет (совсем голь)))) Так что я пока прицепила к колонке кран, который открываю еле-еле. конечно вариант не очень! Но - посмотрела ск. стоит насос перистальтический - оказалось - не дорого, так что спасибо за подробную инструкцию, постараюсь воплотить)) спасибо) |
||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
07.03.2012 // 20:36:49
Интересное кино получается. Колонка PD-10, которую вы обзываете "стандартной", предназначена для быстрого обессоливания (или замены буфера) в образцах. Это небольшая колонка диаметром 10 мм*10 см, на ней полимеры не делят. Заполняется она Сефадексом G-25. Сефадекс G-200 - с огромными порами, че ж такого вы хотите разделить на колонке длиной 10 см???? (и откуда такая скорость- 5 мл/час? Скорость чаще выражают в см/час). |
||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1327 |
07.03.2012 // 20:38:45
Есть еще один способ "для бедных", древний как я  Берете полиэтиленовый шланг подходящего диаметра, но, желательно, потоньше. Над пламенем спиртовки нагреваете его, вращая, до прозрачного состояния, а потом растягиваете в тончайший капилляр, но так, чтобы не разорвался. Получаете гидравлическое сопротивление (рестриктор). Пара часов упражнений - и Вы сможете вытягивать нужный рестриктор.Удачи! |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
08.03.2012 // 0:02:17
Не... ну можно попробовать и без насоса, как я некогда в НИИ биологии ДГУ в холодовой комнате афинной хроматографией занимался. На выходе колонки ПХВ шланг (или кусочек силиконового патрубка) от системы и зажим из той же системы для регулировки скорости вытекания. Затем на входе описанный импровизированный адаптер, соединенный с бутылью, в которой находился буфер. На соединяющем с бутылью шланге аналогично был зажим от системы. Бутыль на уровень выше самой колонки. Грушей подсасываешь буфер и перекрываешь зажимом поток, чтобы открыв можно было возобновить приток ПФ в колонку. Берешь в руки секундомер и регулируя зажимом поток устанавливаешь необходимую скорость движения ПФ. Поместив "капающий" адаптер с отрегулированной скоростью в колонку, в которой над слоем геля имеется небольшой слой ПФ (около 5 -10 мм). Открываете нижний зажим и регулируете скорость истекания ПФ из колонки. Муторно.... но раз уж се ля ви, то... |
||
|
Perchik Пользователь Ранг: 4 |
08.03.2012 // 3:23:38
Спасибо)) SERGA: колонку PD-10 - она да, для обессоливания , я её выпотрошила)) и набила Сефадексом G-200 (который сама готовила). Вчера нашла поприличней колонку (где-то см 25-30) - набила её сефадексом g200. Волгин, спасибо, это идея!! Сегодня посчастливилось найти капилляр (который для ТСХ капли делать), мне его добрые люди вставили в мой "адаптер" Garry!! Вот кстати с бутылью которая наверху колонки - это идея)) Потому что я тоже хотела сначала контролировать поток сверху - надеть очень плотную пробку на колонку сверху , проткнуть её иглой со шлангом (по шлангу буфер). Поскольку плотно прижато всё - то скорость истекания из колонки будет определяться скорость притекания в неё. но я чего-то начала мудрить как подавать этот буфер - типа чтоб под давлением инертного газа, и скорость не удавалось срегулировать, короче ступила))) но с бутылью+ зажимами должно быть гораздо проще!! На сегодня - у меня забита и уравновешена колонка (уже 30 см- прогресс!)) - скорость - удалось добиться где-то 70 мкл в минуту - путём установки внизу краника + к кранику приделан в "адапторе" капилляр. Завтра буду смотреть смогу ли отделить полимер!! Если не пойдёт - то действительно попробую с контролем сверху!)) спасибо Вам огромное!!! Удачи вам в ваших экспериментах) |
||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
08.03.2012 // 6:02:11
Интересно, а чем смотреть-то будете? (30 см- уже что-то, но для G-200 особо смотреть не на что будет. )Что от чего отделять собираетесь? (В практически неприспособленных условиях. Мне всегда было интересно- как "на коленке" можно получить результат в ГПХ). |
||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
08.03.2012 // 15:30:42
Можно, Serga, можно.... К хорошему привыкаешь быстро, а вот из д...ма сделать Цяцю - это верх пилотажа. Мы вот с Юрием выходцы из совка, а там с помощью зубила и какой-то матери наука и творилась! |
||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
08.03.2012 // 16:31:13
Угу... Можно, если осторожно. Но нужно ли?Аффтар, кстати, не раскрывает сути проблемы. |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
