| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Удерживание вещества в колонке >>>
|
 |
| Автор | Тема: Удерживание вещества в колонке | ||
|
leshkin-yo Пользователь Ранг: 213 |
 08.06.2012 // 19:52:29
Редактировано 1 раз(а) Добрый вечер всем! Столкнулся со следующей проблемой. Разрабатываю методику на ВЭЖХ. При анализе искомое вещество примесь G фозиноприла (4-фенилбутилфосфиновая кислота) выходит примерно на 2,4мин. Фактор емкости примеси G =0,67. Состав ПФ MeCN и 0,2% Н3РО4. Пробовал разные соотношения от 30% до 90%MeCN, а также использовал 1% Н3РО4, время удерживания примеси не изменилось. Колонка zorbax sb c 18 150*4.6;5um. Скорость потока 1мл/мин температура колонки 40, длинна волны 215 нм. Фозиноприл выходит в разное время в зависимости от состава ПФ. Получается, что примесь не удерживается данной НФ? Помогите пожалуйста разобраться в данной ситуации, и подскажите при каком численном значении фактора емкости можно говорить о том, что происходит удерживание вещества? |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1327 |
08.06.2012 // 20:59:00
Редактировано 1 раз(а) Давайте считать. Объем пустой колонки 3,15 мл. Объем подвижной фазы 3,15 х 70% (примерно - для силикагелей) = 2,2 мл. Получается, что ДАННАЯ ПРИМЕСЬ действительно практически не удерживается. А Вы уверены, что это именно она? Что Ваша колонка ДЕЛИТ именно эту примесь G от основного вещества? Может быть при 2,4 мин выходит что-то другое? Вы растворяете образец в подвижной фазе? Как давно Вы используете упомянутую колонку? Выбор ее обусловлен какими-то литературными находками или просто она у Вас единственная? У Зорбакса SB C18 пришито всего 12% углерода, может быть взять простой Зорбакс С18 или Кромасил С18 у которых углерода 20%? В общем, если изменение подвижной фазы не помогает, надо менять неподвижную. Или искать хромас, чтобы убедиться в том, что колонка делит или не делит. Или стандарт примеси. Ответ на Ваш последний вопрос. Считается, что оптимально работать при k' от 1 до 5. |
||
|
leshkin-yo Пользователь Ранг: 213 |
08.06.2012 // 22:14:50
Редактировано 1 раз(а) Спасибо, что откликнулись! Да, я готовил ППХС который состоит из СО примеи и СО фозиноприла (EP; USP). Колол ППХС, на хроматограммах видно 2 пика, делятся они хорошо, разрешение около 9 (для ПФ в соотношении 64% АСN и 36% 0,2%Н3РО4 данный состав ПФ, как и вся методика взята у другого производителя). И колол СО примеи и СО фозиноприла по отдельности, для идентификации пиков. Так же на хроматограмме ПФ данные пики не присутствовали (мертвое время ситал по ней = 1,4 - 1,5мин). В качестве растворителя мспользовал ПФ в соотношении 64% АСN и 36% 0,2%Н3РО4. С изменение состава ПФ менялось время удерживания фозиноприла, но не примеси G; разделялись они полностью. Колонка не новая, но и не старая. У нас почти все колонки аджилет. Есть XDB c18, XDB c8 (на ней тоже пробовал - результат примерно такой же, а фозиноприл стал хвостить).
А как определяется количество пришитого углерода, или это справочные данные? Скажите, а если вместо 0,2%Н3РО4 использовать ацетатные буферы или с Et3N, какой можно ожидать результат? И еще вопрос, как влияет величина рН ПФ на хроматографические процессы? |
||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1327 |
09.06.2012 // 19:43:55
Конечно справочные. Взяты из каталога Феноменекса 2006г. К сожалению в последних каталогах данные по сорбентам других производителей они перестали приводить, пишут, что эти данные есть на их сайте. Что неудобно. По последним 2-м вопросам. Результат можно ожидать любой. Надо пробовать. А при увеличении рН кислые вещества переходят в ионную форму и соответственно становятся полярнее, а оснОвные - наоборот, и становятся менее полярными. Со всеми вытекающими. Нейтральные ими же и остаются, если не подвержены кислому или основному катализу. Но это в самом первом и самом грубом приближении. На эту тему написана масса умных книг и статей. По поводу мертвого времени: да, похоже, что я ошибся. Для колонки 4,6х250 Аджилент показывает время удерживания урацила 2,5 мин , в пересчете на Вашу колонку как раз получается 1,5мин. PS Отрываюсь от Интернета на week-end и к сожалению не смогу участвовать в обсуждении |
||
|
MeOH Пользователь Ранг: 487 |
09.06.2012 // 20:05:04
Редактировано 2 раз(а) Вы не могли бы предоставить данные откуда там точку примесь G? В статье её нет. Или я не там ищу! |
||
|
MeOH Пользователь Ранг: 487 |
09.06.2012 // 20:12:53
И расскажите о том, что Вы в итоге то хотите добиться? Все примеси на одной хроматограмме сложная задача для ваших возможностей, но в принципе реально. |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
leshkin-yo Пользователь Ранг: 213 |
09.06.2012 // 21:22:42
А в какой статье Вы искали? Сама методика была списанна с ФСП другого производителя без изменений (за исключением колонки в оригинале используют Hypersil ODS 150*4.6, у нас есть аджилент СБ с 18 150*4,6). Там в качестве раствора ППХС используют смесь примеси и фозиноприла 1:1. Сегодня просмотрел методики других производителей, а так же ЕР и USP, но воспроизвести их я не могу, т.к. либо нет нужной колонки, либо примесей указанных в методике, да и примесь G не везде определяется. quote]MeOH пишет: И расскажите о том, что Вы в итоге то хотите добиться? Все примеси на одной хроматограмме сложная задача для ваших возможностей, но в принципе реально. Я хочу сначала добиться удерживания примеси с k' 2 и больше. Сегодня пробовал ПФ AcN и буфер состоящий из 1% ТЭА с рН 3,0 доведенного фосфорной кислотой, соотношения менял от 90% AcN до 60%. Фозиноприл меняет время удерживаня в зависимости от состава элюента, а примесь "стоит" на месте. Пробы использовал вчерашние, приготовленные на растворителе AcN 64% и 0,2%Н3РО4 36%. |
||
|
varban VIP Member Ранг: 8699 |
09.06.2012 // 21:35:52
>Сегодня пробовал... Понедельник начинается в субботу? |
||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
09.06.2012 // 21:44:48
При наличии такого гидрофобного хвоста примесь (даже и с полярной группой) должна чувствовать изменение фазы и менять время выхода. Вы уверены, что правильно определили место ее выхода? |
||
|
leshkin-yo Пользователь Ранг: 213 |
09.06.2012 // 21:46:30
Ага, проблема еще в том, что на разработку методики нет времени. Как всегда жили-жили и усрались! |
||
|
MeOH Пользователь Ранг: 487 |
10.06.2012 // 20:12:50
Редактировано 1 раз(а) А градиента нет? Усрались?, вот и ткни им статьей EP, и эти колонки пусть заказывают., хромматограммы по ней знаешь где? отдельно под примесь условия можно подобрать, но там же она не одна. Остальные примеси совершенно другого характера, эта одна такая? Может укажешь как она (эта примесь) называется по ЕР? |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
