| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Как восстановить колонку? >>>
|
 |
| Автор | Тема: Как восстановить колонку? | ||
|
MVera Пользователь Ранг: 9 |
 20.12.2005 // 12:28:25
Подскажите, пожалуйста, как реанимировать колонку zorbax SB-Phenyl, запачканную белками? |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
20.12.2005 // 12:42:30
Вообще то способов отмывки ОФ колонок много. От изопропанола, до азотной кислоты средней крепости (о таком варианте узнал недавно из одного заслуживающего доверия источника). Все зависит от того, насколько сильно колонка "запачкана" и конкретно какими белками. Как проявляется загрязненность колонки? Подскочило ли давление, если да, то насколько? Что Вы уже пробовали с ней делать? Не сочтите за труд ответить на эти встречные вопросы и тогда можно будет посоветовать что-то более конкретное. |
||
|
MVera Пользователь Ранг: 9 |
20.12.2005 // 13:00:14
Прошу прощения, перепутала колонки: не SB-Phenyl, а SB-CN. Так как осаждали кровь метанолом, скорее всего это низкомолекулярные белки. Давление подскачило в 2,5 раза (от 30 до 67-70). Сейчас промываем колонку метанол-вода (65:35). При увеличении процента воды давление чуть снижается. |
||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
20.12.2005 // 13:13:24
А с чего Вы решили, что забит сам сорбент, а не входной фрит? Нитрил забить низкомолекулярными белками довольно проблематично. Первое, что можно посоветовать: переверните колонку, то есть поменяйте вход и выход и прокачивайте примерно 80%ацетонитрилом несколько часов. В некоторых книжках написано о недопустимости таких действий. Но Вы им не верьте. Ерунда это все. Для работы можно все так и оставить ("вверх ногами"). Как правило, удается проработать на колонке еще немалое время. Если не поможет, белки (если это действительно белки) хорошо отмываются 0,2М раствором додецилсульфата натрия в 50% изопропаноле при слегка повышенной температуре, порядка 35 град. Но колонку потом нужно промывать несколько суток рабочим элюентом). Если не поможет - придется колонку разбирать и заменять фрит, а то и удалять часть сорбента на входе, заменяя его свежим в виде суспензии с консистенцией сметаны. Но будем надеяться, что у Вас не столь тяжелый случай. |
||
|
MVera Пользователь Ранг: 9 |
20.12.2005 // 14:19:04
Спасибо. В перевернутой колонке давление держиться 35 при метаноле-вода 65:35. Может можно обойтись без ацетонитрила и так и оставить? |
||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
20.12.2005 // 14:24:32
Так и я о том же. Так и работайте. Максимум, чем это грозит, так потерей около 5% эффективности, и то - не всегда. А вообще то такой симптом говорит о том, что забит входной фрит из пористого титана. Но в таком положении он должен сам собой прочиститься. |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
Alchi Пользователь Ранг: 113 |
20.12.2005 // 14:32:45
Редактировано 1 раз(а) А скажите, пожалуйста: 1) 35 - это бары или мегапаскали? Наверное бары... Тогда это нормально. 2) какова длина колонки? 3) каков внутренний диаметр колонки 4) каков размер зерна сорбента? 5) указанное давление - на каком расходе элюента? И до кучи - чья это колонка? кто производитель? Вообще, даже на самых поганых колонках можно работать атмосфер до 150. Может просаживаться или разрушаться сорбент. Но на 150 атмосфер не должен - уважающие себя люди бьют колонки все-таки не меньше, чем на 400-600 атмосфер. Даже Миллихромовские я до 200 атмосфер пользовал. Но там, правда, уже начинает выбивать и разрывать капилляры (если это PEEK) и некоторые колонки протекали. Кстати, промываете-то Вы ее, я надеюсь, в обратном направлении? |
||
|
MVera Пользователь Ранг: 9 |
20.12.2005 // 14:48:43
Давление в барах. Колонка у нас Zorbax SB-CN (Agilent) 2,1x50mm, 5 mikron.Давление 35 при 0,3 mm/min при температуре колонки 50 градусов. Никогда раньше не промывала колонку в обратном направлении  Поднявшееся давление смутило тем, что пропала искомая масса вещества. |
||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
20.12.2005 // 15:00:33
Давление восстановилось - уже полдела. Теперь нужно убедиться, что не изменились свойства поверхности сорбента и он делит Вашу смесь. Если это так, то и работайте на здоровье дальше. Если же нет, то продумаем дальнейшиемеры реанимации. Только не спешите с действиями и каждую манипуляцию продумайте, а еще лучше - спросите в форуме в этой же теме. |
||
|
Alchi Пользователь Ранг: 113 |
20.12.2005 // 15:07:02
Редактировано 1 раз(а) Да, в такой системе 35 атмосфер нормально, а 60 многовато (хотя и допустимо). Я бы попромывал подвижной фазой в обратном направлении, а потом вернул колонку в исходное положение и посмотрел, что стало с давлением. А то ведь Вы засорили колонку в одном положении, а теперь можете засорить и в обратном. |
||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
20.12.2005 // 15:13:21
Ничего, можно потом, когда давление подскочит, опять перевернуть. И вертеть так время от времени.   А если серьезно, то пробу перед вводом хорошо бы фильтровать через фильтр 0,2 - 0,3 мкм. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 30
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
