| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
теория ВЭЖХ: что лучше: останавливать поток, или искать очень медленную дополнительную помпу? >>>
|
 |
| Автор | Тема: теория ВЭЖХ: что лучше: останавливать поток, или искать очень медленную дополнительную помпу? | ||
|
igorchem Пользователь Ранг: 333 |
 22.09.2015 // 22:38:35
Добрый день, вопрос по ВЭЖХ, не привязанный к конкретной методике. Есть ВЭЖХ сенсор, который я последнее время разрабатываю. Детали - обязательно расскажу позже, как только получу хорошие результаты и статейку в печать примут. Свойства сенсора: 1. не деструктивный, 2. практически без смешивания (кюветы в виде капилляров внутренним диаметром 0.2-1.5мм) 3. внутренний объем, в котором снимается спектр, составляет около 2-25мкл, 4. может быстро (около 5мл/мин) детектировать наличие пика, 5. может медленно (5мкл/мин и меньше) снимать спектр, чтобы по спектру распознавать, что же конкретно вещество в пике. Хочется обойтись одним сенсором, чтобы проводить разделение, например пептидов на колонках а ля С18. Видится два подхода: 1. при появлении пика останавливать поток, недостаток - скорость останова и дискретность большинства ВЭЖХшных помп больше внутреннего объема моего сенсора, соответственно пик можно прошляпить, 2. собирать пики в дополнительный капилляр, а потом их медленно погонять через сенсор. Недостатки - а) дополнительное перемешивание, б) дополнительный очень-очень медленный насос (5мкл/мин), который не понятно на чем сделать. Скажите, пожалуйста, в какую сторону тендировать? Цель - иметь только один сенсор в системе и максимизировать скорость съема хроматограммы+спектров пиков не в ущерб качеству (сам сенсор я тоже ускоряю и уточняю, но хотелось бы это пока сейчас здесь не обсуждать). Спасибо! |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
24.09.2015 // 1:11:40
Редактировано 1 раз(а) Оба варианта непрактичны. Плюс, указывайте, плиз, линейные скорости. Для ВЭЖХ стоит ограничиться диапазоном 2-10мкл (объем ячейки). Более практичные варианты: 1. Сплит на две ячейки. Соотв. деление потока статическое. Минусы такого подхода, конечно, очевидны. 2. Одна ячейка и быстрый сенсор 
|
||
|
igorchem Пользователь Ранг: 333 |
24.09.2015 // 9:56:17
> Оба варианта непрактичны. Согласен, поэтому и вопрошаю! > Плюс, указывайте, плиз, линейные скорости. как раз она-то более-менее понятна, для минимального детектирования мне необходима скорость 7200мм/мин (120мм/сек), а для точного снятия спектра - или останов на несколько минут, или около 1мм/мин. Все сильно зависит от развесистости детектируемой молекулы, для простых молекул с 20 атомами можно работать и на скоростях около 100мм/мин, а для белка на 100 аминокислот точно поток останавливать на час придется. Размер кюветы - линейный вдоль потока около 8 мм, а сечение пока не выбрал, есть три рабочих варианта с площадьми поперечного сечения 0.06мм^2, 0.4мм^2 и 1.8мм^2. Это ведет к тому, что при скорости минимального детектирования я имею потоки до 0.4мл/мин, 3мл/мин и 13мл/мин, то есть с самым маленьким сечением 0.06мм^2 я уже нахожусь на не разумно низкой скорости детектирования. > 1. Сплит на две ячейки. Соотв. деление потока статическое. Минусы такого подхода, конечно, очевидны. а как? Первая быстро детектирует, а во вторую заносятся только пики? Но как управлять? Пожалуйста, посоветуйте, или дайте, пожалуйста, идею, где об этом почитать? > 2. Одна ячейка и быстрый сенсор бьюсь над этим, пока безуспешно. Еще один маленький ньюанс, из-за которого ставить два сенсора достаточно сложно, это габариты самого сенсора, они у меня получились достаточно большими - примерно кубик со стороной 60см, из-за этого ставить два сенсора друг за другом может быть не очень просто - длины соединительных трубок между ними будут достаточно большими. Спасибо! |
||
|
Kalambet Пользователь Ранг: 484 |
24.09.2015 // 13:12:28
Редактировано 1 раз(а) С точки зрения качества данных для обработки предпочтителен вариант медленной хроматографии с постоянным измерением подробного спектра. В большинстве случаев уменьшение скорости потока также положительно влияет на разделение (идем в сторону минимума кривой Ван-Деемтра). |
||
|
igorchem Пользователь Ранг: 333 |
24.09.2015 // 16:06:45
> В большинстве случаев уменьшение скорости потока также положительно влияет на разделение (идем в сторону минимума кривой Ван-Деемтра). Спасибо за ответ! То есть я правильно понимаю, что если я возьму колонку 0.18мм как, например, Thermo BioBasic-18 Flexible KAPPA HPLC Column 100X0.18mm 5µm 72105-100266, и организую в ней поток около 20мм/мин, то в моем сенсоре поток уже будет раз в 100 меньше, и я за один проход все померю? Вопрос тогда к помпе, у меня под рукой старушка 64 от кнауера, у нее дискретность ужасная, около 13мкл за одно качание плунжера. Но до 200 бар я ее уже разгонял, и, думается, что до 300-350 бар она еще потянет, то есть 0.18мм на 5мкм она с трудом, но продавит. Есть ли какой-то адекватный способ организовать такой помпой поток в 20мм/мин на 0.18мм колонке, то есть 0.5мкл/мин? Если нет, то, подскажите, пожалуйста, что можно взять недорогое для таких маленьких потоков? Спасибо! |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
25.09.2015 // 15:44:54
Ставите тройник и рестриктор, если нужно, к примеру, поток 200мкл/мин, делите 1:100, тогда получается, 198мкл/мин пойдет в одну, а 2мкл/мин в другую ячейку. Ячейки стоят параллельно, например. Так же играете линейными скоростями за счёт геометрии капилляров и ячеек, оптимизируя при этом объем, т.е. ячейка с бОльшим сечением и меньшей длинной идет на сканирование и т.д. Не знаю, насколько это рабочая идея, учитывая размеры сенсора и неясность его архитектуры и принципа работы. Хотя, в принципе, на данном этапе, если есть уверенность, что доведёте скорость работы сенсора до нужной, то можно ничего не усложнять, а оставить вариант скана с остановкой потока (лучше, чем ничего) на первое время. |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
igorchem Пользователь Ранг: 333 |
25.09.2015 // 16:09:43
Редактировано 2 раз(а) Огромное всем спасибо за советы! Да, пока есть еще надежда ускорить свой сенсор, чтобы в дальнейшем его можно было без остановки потока и танцев с бубном пользовать с любой колонкой. Сейчас пока решил играться скоростью потока, из-за этого возникла идея (вернее мне ее подсказали) уменьшать размер колонки. Сейчас есть под рукой 4.6 и 2.1мм колонки, но, могу прикупить 1.0, 0.5, 0.3 и 0.18мм. Понятно, что с уменьшением диаметра колонки уменьшается поток. На моем сенсоре с d=0.28мм, l=6мм кюветой я теоретически могу и с 0.18мм колонкой работать. Вопрос мой вот в чем, скажите, пожалуйста, каковы характерные объемы 1. инжектирования и 2. пиков, наблюдаемых на выходе веществ в зависимости от диаметра колонки? То есть сколько, например, для колонки d=1мм мне разумно инжектировать, 1мкл, или больше? И сколько будет на выходе из колонки в каждом пике (как я понимаю, примерно столько же)? Спасибо! |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
29.09.2015 // 15:25:31
Как вариант, только помните, что в основном сейчас юзают 2.0-4.6мм (соотв. и железо под это заточено). Меньше 1мм - это уже относительно узкая специализация (протеомика, в оновном) - такого железа значительно меньше. 1. Зависит от режима элюирования (изократ или градиент), присутствия концентрирования аналита на сорбенте, геометрических размеров колонки, эффективности колонки. Если изократ, то для 1мм колонки - 0.5-1мкл (примерно). 2. Зависит от эффективности колонки (хром. системы) для итого аналита. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 7 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
