Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

УФ-прозрачные элюенты для ВЭЖХ >>>

  Ответов в этой теме: 20
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: УФ-прозрачные элюенты для ВЭЖХ
Dionisii
Пользователь
Ранг: 377

11.12.2003 // 15:07:22     
Привет, народ!
Кто о чем, а вшивый о бане. Я в очередной раз пытаюсь создать методику на триглицериды. И вот в чем загвоздка: в обычных УФ-прозрачных растворителях (ацетонитрил, метанол) липиды необратимо садятся на колонку, точнее на обращенную фазу. А те растворители в которых липиды ведут себя должным образом, то есть хорошо растворяются и делятся(ТГФ, ДХМ, ДХЭ) – поглощают аккурат в той области спектра, что и липиды, а именно на 220 нм. А хочется сделать методику именно на спектрофотометре… Ни кто не может по этому поводу ничего посоветовать? Ну, может растворитель какой, или премудрость какая есть?
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Рудаков
Пользователь
Ранг: 20


16.12.2003 // 22:37:24     
У ацетона есть минимум в области 210 нм, если его еще слегка разбавить водой, то можно попробовать
Dionisii
Пользователь
Ранг: 377


17.12.2003 // 9:03:21     
Редактировано 1 раз(а)


Рудаков пишет:
У ацетона есть минимум в области 210 нм, если его еще слегка разбавить водой, то можно попробовать
Большое спасибо за ответ. Но я слышал, что ацетон по каким-то причинам считается не очень хорошим элюентом, более того, он считается вредной примесью плхо очищенного ацетонитрила, и по моему это связано как раз с его оптическими особенностями. Что вы по этому поводу можете посоветовать?
Леонид
VIP Member
Ранг: 5266


23.12.2003 // 9:09:50     
Я бы попробовал применить динамическое модифицирование длинноцепочными катионогенными ПАВ.
Если взять 80% ацетонитрил и добавить в него 0,001 - 0,01 моля (подбирается экспериментально)цетримида, то я не могу себе представить вещество, которое бы не смылось с обращенки этим элюентом. Оптимальное количество модификатора зависит от марки сорбента, в частности, от плотности пришивки фазы.
Если есть возможность сменить колонку, то попробуйте вместо С18 взять нитрил. На обращеннофазных элюентах он ведет себя как короткоцепочная обращенка (С3). Тогда и модификация не потребуется.
Водные растворы ацетона использовать не советую - он склонен к конденсации в кислой среде и таутомерии. При детектировании практически всегда дает парочку ложных пиков (артефактов).
Метанол, для липидов также хуже, чем ацетонитрил.
Dionisii
Пользователь
Ранг: 377


23.12.2003 // 10:50:21     
Редактировано 2 раз(а)


Леонид пишет:
Я бы попробовал применить динамическое модифицирование длинноцепочными катионогенными ПАВ.
Если взять 80% ацетонитрил и добавить в него 0,001 - 0,01 моля (подбирается экспериментально)цетримида, то я не могу себе представить вещество, которое бы не смылось с обращенки этим элюентом. Оптимальное количество модификатора зависит от марки сорбента, в частности, от плотности пришивки фазы.
Если есть возможность сменить колонку, то попробуйте вместо С18 взять нитрил. На обращеннофазных элюентах он ведет себя как короткоцепочная обращенка (С3). Тогда и модификация не потребуется.
Водные растворы ацетона использовать не советую - он склонен к конденсации в кислой среде и таутомерии. При детектировании практически всегда дает парочку ложных пиков (артефактов).
Метанол, для липидов также хуже, чем ацетонитрил.

Спасибо за ответ. Сразу же есть несколько вопросов.Насколько дорогостоящий реактив этот цетримид, можно ли приобрести его в России, не вреден ли он для привиитой фазы(Не нарушает ли он сшивку между ОДС и силикагелем?).
Леонид
VIP Member
Ранг: 5266


23.12.2003 // 11:40:10     
Цетримид - цетилтриметиламмоний бромид, недорогой и недефицитный реактив. Можно купить в России в любой фирме по торговле реактивами.
Что касается "вредности" для привитой фазы, то это довольно жесткий модификатор, который кардинально меняет свойства сорбента. Вымыть его с колонки практически нереально. Хроматографические свойства сорбента изменятся очень сильно, особенно по отношению к полярным и ионогенным веществам.
Поэтому, если у Вас единственная колонка на все случаи жизни, для начала попробуйте более мягкий модификатор, например соли тетрабутиламмония. От них отмыться потом легче, но и то, что Вам это удастся сделать полностью - гарантировать нельзя.
То есть колонка то не испортится, в смысле, что на ней можно и дальше довольно долго работать, но строго говоря это будет уже не С18, а нечто другое.
Но, как говорится, на елку влезть и задницу не ободрать - получается не всегда. Заранее извиняюсь перед дамами за солдафонский юмор.
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Испытательный лабораторный центр ЦГЭ Москвы Испытательный лабораторный центр ЦГЭ Москвы
ИЛЦ аккредитован в «Системе аккредитации лабораторий, осуществляющих санитарно-эпидемиологические исследования, испытания».
Рудаков
Пользователь
Ранг: 20


06.01.2004 // 21:15:54     
Вся хитрость как раз и заключается в том, что в водно-ацетонитрильных смесях есть глубокое окно при 210 нм, а в дальней УФ до 250 нм полный абзац!
Andrew
VIP Member
Ранг: 1370


06.01.2004 // 22:36:06     

Рудаков пишет:
Вся хитрость как раз и заключается в том, что в водно-ацетонитрильных смесях есть глубокое окно при 210 нм, а в дальней УФ до 250 нм полный абзац!

Наверное, водно-ацетоновых?
Дима
Пользователь
Ранг: 192


08.01.2004 // 5:09:38     

Dionisii пишет:
Привет, народ!
Кто о чем, а вшивый о бане. Я в очередной раз пытаюсь создать методику на триглицериды. ... А хочется сделать методику именно на спектрофотометре… Ни кто не может по этому поводу ничего посоветовать? Ну, может растворитель какой, или премудрость какая есть?


А как на спектрофотометре можно сделать методику анализа триглицеридов? Они же имеют разное поглощение в УФ. Количественной эта методика никогда не будет в принципе. Да и рефрактометр не подойдет. Имеет смысл попробовать детектор по светорассеянию, который Кристи рекламирует уже лет 15-ть.

Да еще вопрос, а каков глубинный смысл триглицеридного профиля?
Serga
Пользователь
Ранг: 1806


08.01.2004 // 15:56:21     

Дима пишет:
Да еще вопрос, а каков глубинный смысл триглицеридного профиля?
Я вообще не вижу смысла анализа триглицеридов в ВЭЖХ. Это практически нереально. Полный профиль все равно не увидишь (нет поглощения-нет чувствительности), и самое неподходящее- это обращенная фаза. Никто меня не убедит в том, что какой бы "золотой" ни была колонка, она не сумеет разделить даже триолеат от тристеарата. А там этих комбинаций много больше. Не говоря уже о проблемах с растворителем. В воде триглицериды не растворяются, а в органической фазе не будет деления. Детектор светорассеяния- это та выделка, которой не стоит овчинка триглицеридов. Почитав посты, складывается впечатление, что у нас в университетах еще очень плохо преподают курс ЖХ.
RudakovO
Пользователь
Ранг: 92


08.01.2004 // 18:57:35     

Andrew пишет:

Рудаков пишет:
Вся хитрость как раз и заключается в том, что в водно-ацетонитрильных смесях есть глубокое окно при 210 нм, а в дальней УФ до 250 нм полный абзац!
Наверное, водно-ацетоновых?

Именно так!

  Ответов в этой теме: 20
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты