Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ВЭЖХ: раздвоение пиков на новой колонке >>>

  Ответов в этой теме: 22
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: ВЭЖХ: раздвоение пиков на новой колонке
Simbirtseva Olga
Пользователь
Ранг: 5

25.10.2018 // 9:34:17     
Добрый день!

Помогите, пожалуйста, разобраться в проблеме!

На абсолютно новой колонке при воспроизведении методики фармакопеи USP произошло раздвоение пиков, выходящих после 10 минуты.

Условия элюирования: подвижная фаза А - 0,1% водный раствор CF3COOH, подвижная фаза В - ацетонитрил.

Градиент: 0 мин ПФ А:ПФ В=90:10
34 мин ПФ А:ПФ В=50:50
35 мин ПФ А:ПФ В=90:10
38 мин ПФ А:ПФ В=90:10

Растворитель для пробы ПФ А:ПФ В=50:50.

Буду благодарна за помощь и советы! Спасибо за внимание!
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
SergeyK
Пользователь
Ранг: 1395


25.10.2018 // 9:44:39     
Редактировано 3 раз(а)

Хроматограммы на файлообменник положите. Прибор какой, каталожник колонки какой? Проба как готовится, кто аналиты, кто примеси, кто матрица? Детектор, длина волны. Фазы фильтровали, пробу?
https://hplctips.blogspot.com/2016/09/hplc-peak-splitting-common-reasons-for.html?m=1
Simbirtseva Olga
Пользователь
Ранг: 5


25.10.2018 // 10:11:02     

SergeyK пишет:
Хроматограммы на файлообменник положите. Прибор какой, каталожник колонки какой? Проба как готовится, кто аналиты, кто примеси, кто матрица? Детектор, длина волны. Фазы фильтровали, пробу?
https://hplctips.blogspot.com/2016/09/hplc-peak-splitting-common-reasons-for.html?m=1


Прибор Waters Alliance с детектором 2998, колонка SymmetryShield RP8 (кат. WAT200670).

Проба - бензокаин, 4-аминобензойная кислота и 4-нитробензойная кислота с концентрацией каждого из компонентов 1 мкг/мл. К навескам добавляют растворитель (ПФ А: ПФ В=50:50), воздействуют ультразвуком и доводят растворителем до финального объема.

Фазы фильтровала и дегазировала ультразвуком.

Пробу фильтровала через фильтр PTFE с диаметром пор 0,45 мкм.

Длина волны - 280 нм.
SergeyK
Пользователь
Ранг: 1395


25.10.2018 // 10:25:18     
А объем вкола какой? До 10 минуты есть не раздвоенные пики?
Шушечка
Пользователь
Ранг: 334


25.10.2018 // 10:32:16     
Редактировано 1 раз(а)


Simbirtseva Olga пишет:
Добрый день!

Помогите, пожалуйста, разобраться в проблеме!

На абсолютно новой колонке при воспроизведении методики фармакопеи USP произошло раздвоение пиков, выходящих после 10 минуты.

Условия элюирования: подвижная фаза А - 0,1% водный раствор CF3COOH, подвижная фаза В - ацетонитрил.

Градиент: 0 мин ПФ А:ПФ В=90:10
34 мин ПФ А:ПФ В=50:50
35 мин ПФ А:ПФ В=90:10
38 мин ПФ А:ПФ В=90:10

Растворитель для пробы ПФ А:ПФ В=50:50.

Буду благодарна за помощь и советы! Спасибо за внимание!

а это точно раздвоенные пики, а не слипшиеся? дайте фото хроматограммы
Simbirtseva Olga
Пользователь
Ранг: 5


25.10.2018 // 10:36:05     
Редактировано 1 раз(а)


SergeyK пишет:
А объем вкола какой? До 10 минуты есть не раздвоенные пики?
Объем вкола 20 мкл. Да - там выходит 4-аминобензойная кислота. Ее пик нормальной формы.

Вот ссылка на хроматограмму: itrash.ru/image/kH4xv
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
ФГУП УНИИМ ФГУП УНИИМ
Уральский научно-исследовательский институт метрологии. Государственный научный метрологический центр, Головной орган Государственной службы стандартных образцов, Соответствие системе менеджмента качества ИСО/МЭК 17025, ИСО 34)
SergeyK
Пользователь
Ранг: 1395


25.10.2018 // 10:40:43     
Попробуйте 5 мкл, первый пик тоже не очень хорошо выглядит, возможно, он тоже двоится, но мы этого не видим, поскольку он плохо удерживается.
Колонку ацетонитрилом промыли, перед работой уравновесили?
Simbirtseva Olga
Пользователь
Ранг: 5


25.10.2018 // 10:42:20     

SergeyK пишет:
Попробуйте 5 мкл, первый пик тоже не очень хорошо выглядит, возможно, он тоже двоится, но мы этого не видим, поскольку он плохо удерживается.
Колонку ацетонитрилом промыли, перед работой уравновесили?


Ок, спасибо за совет!

Да, колонка была подготовлена к работе должным образом.
Шушечка
Пользователь
Ранг: 334


25.10.2018 // 11:36:40     
посмотрела на хроматограмму... по мне так довольно не презентабельный вид.. пик почти минуту выходит и он не двоится, не путайте, он просто хвостит. Меняйте соотношение элюентов, или закисляйте.. что более вероятнее
Avet
Пользователь
Ранг: 652


25.10.2018 // 15:28:47     
Симбирцева Ольга, могу посоветовать Вам провести тестовую хроматограмму по требованиям паспорта. Есть вероятность бракованной колонки.
OldBrave
VIP Member
Ранг: 899


25.10.2018 // 19:38:40     
Редактировано 3 раз(а)


Simbirtseva Olga пишет: ...На абсолютно новой колонке при воспроизведении методики фармакопеи USP произошло раздвоение пиков, выходящих после 10 минуты.
Согласен с SergeyK. Похоже все пики двоятся и двоение увеличивается с увеличением времени выхода.
Обычно такое происходит при наличии мертвого объема после петли.
Поскольку, как говорите, колонка новая, - значит нужно ее правильно переустановить...

  Ответов в этой теме: 22
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты