| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Валидация методики молекулярно-массового распределения методом эксклюзионной хроматографии >>>
|
 |
| Автор | Тема: Валидация методики молекулярно-массового распределения методом эксклюзионной хроматографии |
|
scrovo Пользователь Ранг: 3 |
 15.05.2025 // 22:14:23
Всем здравствуйте! Буду очень благодарен, если поделитесь советами или мыслями, как правильно валидировать методики, связанные с ММР для эксклюзионной хроматографии. Я имею в виду, по каким характеристикам нужно считать (линейность, правильность, ПО и т.д.) Согласно Фармакопее, это методика на подлинность, там достаточно специфичности, которую обычно подтверждают отсутствием лишних пиков на бланке. Однако для гепаринов это довольно сложные методики, которые требуют калибровки, деления пика на определенные участки + расчет. Напоминает чем-то определение молекулярной массы с помощью электрофореза. Требования к гепаринам, например: Содержание фракции со среднемассовой молекулярной массой менее 2000 должно быть в диапазоне от 12,0 % до 20,0 %. Содержание фракции со среднемассовой молекулярной массой от 2000 до 8000 должно быть от 68,0 % до 82,0 %. Содержание фракции со среднемассовой молекулярной массой более 8000 должно быть не более 18,0 %. Видел похожую тему на форуме, но честно не могу окончательно понять из-за нехватки опыта. Там привели в пример декстраны, где много стандартных образцов различной молекулярной массы. У гепаринов немного другая история из-за одного стандартного образца, у которого широкий интервал молекулярной массы (от 600 до 18000 Да) и по нему одному строят зависимость. Описание методики из фармакопеи: Используя таблицу, прилагаемую к стандартному образцу для калибровки молекулярных масс низкомолекулярного гепарина, определяют те точки хроматограммы, для которых процент от общей площади под кривой наиболее близок к проценту, приведённому в таблице, и присваивают указанную в ней молекулярную массу соответствующему времени удерживания на хроматограмме. Калибровочная кривая для хроматографической системы строится путём подбора подходящей математической зависимости к набору значений времени удерживания и логарифмов молекулярных масс. Рекомендуется использовать полином 3-й степени. Буду очень благодарен за любую помощь. |
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|
OldBrave VIP Member Ранг: 1351 |
16.05.2025 // 14:50:19
Редактировано 1 раз(а) На каком основании Вы электрофорез приближаете к эксклюзионной хроматографии? |
|
scrovo Пользователь Ранг: 3 |
16.05.2025 // 16:52:16
Редактировано 2 раз(а) Здравствуйте! Я понимаю, что суть методов разная) Но открыл фармстатью на электрофорез. Там важными критериями проверки пригодности системы являются: 1) белки маркера молекулярных масс распределены приблизительно на 80 % длины геля и охватывают весь требуемый диапазон разделения (например, диапазон молекулярных масс продукта и его димера или продукта и родственных примесей); 2) зависимость логарифма молекулярной массы белков-маркеров и Rf – линейна в необходимом диапазоне. Мне кажется, что такое должно работать и для ЭХ при определении ММР. Если пик стандарта, так скажем, слипнется, разрешение фракций будет низкое, то нельзя говорить о достоверности результата. Также используется СО с широким диапазоном, строится зависимость, но интересует только определенный участок (от 3000 до 8000) |
|
OldBrave VIP Member Ранг: 1351 |
16.05.2025 // 23:15:26
Это общая фармстатья на электрофорез, и все что там изложено касается вообще белков неполярных. Разделение при электрофорезе происходит в соответствии с отношением масса молекулы/заряд. У неполярных белков заряд, как правило, обусловлен концевыми группами, отсюда отношение масса/заряд будет коррелировать с молекулярной массой. В вашем случае мы имеем сульфированный полисахарид, который помимо различной длины полисахаридной цепи может содержать и разное количество сульфогрупп, плюс еще и димеры. Т.е. мы имеем набор молекул с различным соотношением масса/заряд, которые и будут разделяться. Остается только выбрать интервалы времен удерживания (отношений массы/заряд) для мономеров и димеров так, чтобы результаты количественно совпадали со стандартом. |
|
scrovo Пользователь Ранг: 3 |
17.05.2025 // 13:42:18
Спасибо большое, что внесли некоторую ясность. Когда я сравнивал с электрофорезом, я имел в виду подход, к которому, возможно, стоит подходить при валидации. Впервые с таким сталкиваюсь просто... Например, линейность обычно подтверждают зависимостью отклита для 5 концентраций. Как здесь - не совсем понимаю. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 4 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
