| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
методики орпеделения лекарств методом ВЭЖХ?? >>>
|
 |
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
 02.02.2007 // 3:32:06
Спасибо за трогательное внимание к моей скромной персоне. К Вашему сведенью, в Канаде (у нас -8 часов к Москве) принято в рабочее время вкалывать (за это зарплату дают). Я не обладаю монополией на испрашиваемые знания, на эти темы опубликована масса статей, находящихся в открытом доступе в научных библиотеках. Неужели столь силен патриотизм, что буржуйские научные журналы уже не годятся в качестве источника информации? DSP007, в данном случае, пишет по делу, и к его советам стоит прислушаться. Правда, если анализ предполагается в человечьей моче, то о крысах надо забыть. Матрица (плазма, моча, сыворотка...) при разработке методики должна быть от того же биологического вида, что и предполагаемые образцы. И, конечно, не менее чем от 20 индивидуальных доноров обоих полов, чтобы избежать неожиданностей. Сам я с цефалоспоринами дела не имел, а вот ципрофлоксацин и гатифлоксацин в плазме разрабатывал лет пять назад. Российские патроны для ТФЭ у нас, к сожалению, не купить, поэтому делал на Oasis HLB (Waters) и Strata X (Phenomenex). Промывка - 5% ацетонитрила в воде, элюирование - 0.1% трифторуксусной к-ты в ацетонитриле. Хроматографией делиться не буду, моя Вам без интересу, тем более что детектор другой. На всякий случай приведу ссылки на литературу (и по цефалоспоринам тоже), может, не побрезгуете (12345 - не смотреть, затошнит!): |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
02.02.2007 // 6:39:22
Какой там патриотизм! Подписка (даже и электронная) стоит денег и университеты банально на этом экономят (ограничиваясь только абстрактами). Это раз. Половина народа (научного) не владеет английским. |
||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
02.02.2007 // 6:48:23
Вот и рыщещь по Инету, как крыса по помойке, в поисках инфы, натыкаясь, в лучшем случае, на абстракты MedLine. Хотя бы принцип выяснить или структуру искомого соединения, а там уж додумываешь. У нас "операторам машинного доения" (так мы в шутку обзываем народ, пытающийся работать на HPLC, GC/MS и прочих девайсах) платят по 150-200 USD, поэтому никакие серьезные люди этим не занимаются. Ты только прикинь, на GC/MS садить некого, потому что платить ему хотят по 2 тысячи р (!!! в месяц, не в неделю!). Вот такое отношение. |
||
|
fly-ra Пользователь Ранг: 4 |
02.02.2007 // 17:51:22
Спасибо за помощь всем вам! Но вот возник вопрос... Осаждаем, сыворотку от ФЭК...Дальше...DSP007 советует "....После чего высаживаем белки. Можно трихлоруксусной кислотой, но это неудобно. Лучше взять колонку для твердофазной экстракции с эксклюзионным сорбентом.". А каж же тот факт, что фторхинолоны связаны (пусть частично - но всё же) с белками плазмы? Тогда уже не будет чистоты эксперимента..Как быть? Может можно определить ФХ не осаждая белки...или может есть другой более простой метод? А ссылки мы посмотрим, - спасибо! |
||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
02.02.2007 // 19:16:45
Многие (если не сказать- все) лек.соединения связываются с белками (в разной степени). И все равно- депротеинизация- обязательное условие. Другой вопрос- чем осаждать белки? Нужно оглядываться на стабильность искомого соединения. |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
DSP007 VIP Member Ранг: 2228 |
02.02.2007 // 20:28:40
Крысиную мочу и кровь я предлагал для отработки параметров экстракции. Дешевле загубить литр крысиной крови, чем донорской. Опят же живой организм , метаболиты посмотрите. А когда колонку будете промывать- большая часть фторхинолонов с белков уйдут, т к те коагулируют. То же и с осаждением ТХУ. |
||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
03.02.2007 // 13:24:58
Да процедура стандартная. Иногда хватает и 200 мкл сыворотки. Чего там отрабатывать? (Потом, много вы этой крови с несчастной крысы надоите?  ) Да и на людей перейдете- не станете же вы собирать с них по 100 мл крови на анализ? Они так у вас перемрут нафиг, подопытные (аспиранты ) Во, в том-то и какава, что крови должно быть минимум взято (лучше- если из пальца).А отрабатывать фармакокинетику на крысах- дело неблагодарное. У них все "переваривается" за часы, не то что у чела. Скорость метаболизма очень разная. Есть конечно, пересчеты, но все это малонаучно. Если только пронаблюдать распределение по органам требуется. |
||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
03.02.2007 // 17:40:18
Не знаю, как в России, но в Канаде и Штатах цены крысиных плазмы и сыворотки будут заметно больше, чем цены тех же объемов продуктов из человечьей донорской крови. Мы наши методики отрабатываем на донорских продуктах. Образцы для подобных анализов отбираются из вены, для этого существуют специальные вакуумированные пробирки с иглой, содержащие необходимый антикоагулянт (гепарин, ЭДТА) Объем их - от двух до десяти мл. Можно, конечно, и обычным шприцом. В фармакокинетических исследованиях кровь у добровольцев отбирают иногда каждые 10-15 минут (сразу после приема лекарства, если вещество быстро всасывается, потом интервалы растягиваются). От этого еще никто не умирал. На общий объем крови, отобранный за определенный промежуток времени, существуют строгие нормы. Полагаю, в России тоже. Если белки коагулируют во время ТФЭ - считай, образец потерян. Патрон забъется намертво. Поэтому промывают сперва водным раствором с низким содеожанием органики (до 5%), смывая некоагулировавшие белки. Другое дело, сорбент выбирается так, чтобы с ним целевое вещество связывалось сильнее, чем с белками. В большинстве случаев, это возможно, хотя есть и исключения. Витамин Д, например, от белка оторвать - большая проблема. Но со фторхинолонами проблем не будет, проверено. А проверяется это очень просто - измеряется степень извлечения путем добавления известного количества лекарства в плазму (сыворотку) до и после экстракции. В предложеном мной варианте для ципрофлоксацина и гатифлоксацина степень извлечения была не хуже 80% (точные величины не помню). Осаждение белков ТФУ, метанолом или ацетонитрилом обычно дает очень высокие степени извлечения (но есть и здесь исключения, на вскидку не помню), но приводит к разбавлению пробы (что требует более высокой чувствительности), и полученный образец гораздо грязнее. А чтобы скомпенсировать необратимые потери, градуировочные образцы тоже готовят в той же матрице (плазме, сыворотке, моче) того же биологического вида (обычно используют смесь от нескольких доноров). Готовят также проверочные образцы с известной концентрацией (3-5 уровней), которые случайным образом распределяют среди клинических. Весьма желательно использование внутреннего стандарта сходной химической природы, чтобы скомпенсировать все различия от патрона к патрону и от образца к образцу. Впрочем, это азы ремесла, и все присутствующие их хорошо знают. |
||
|
Korvet Пользователь Ранг: 1114 |
03.02.2007 // 20:28:05
Так просто, ради интереса, вдруг когда пригодиться... что-то я не понял, определяемые вещества связываюстя с белками в ходе метаболизма, или просто можно добавить определяемое вещество в кровь и моделировать связывание с белком?... |
||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
03.02.2007 // 21:10:35
Речь идет не о химических реакциях связывания, а об образовании водродных связей и прочих аддуктов с белками. Для этого достаточно полчаса потрясти плазму с добавкой раствора (обычно 1% по объему) анализируемого вещества на шейкере. С кровью обычно не работают, она - объект неудобный. Клинические образцы крови немедленно перерабатывают в плазму или сыворотку и замораживают. Исключение - вещества, связывающиеся с эритроцитами. Есть и такие. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 25
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
