| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Загадочные результаты в опытах с флуорескамином >>>
|
 |
| Автор | Тема: Загадочные результаты в опытах с флуорескамином |
|
Soleil Пользователь Ранг: 2 |
 09.02.2008 // 23:26:40
Здравствуйте! Хотела бы поделиться с Вами нашей странной историей и спросить объяснения. Мы проводили эксперимент с флуорескамином по количественному определению первичных аминогрупп (на поверхности наночастиц, содержащих доксорубицин). Литературные данные говорят о том, что сам флуорескамин не флуоресцирует, а дает флуоресценцию продукт связывания флуорескамина с аминогруппой. У нас же получается с точностью, да наоборот! Образец «чистого» флуорескамина флуоресцирует! А интенсивность флуоресценции образцов «доксорубицин+флуорескамин», напротив, уменьшается с ростом концентрации доксорубицина (т.е. с ростом концентрации аминогрупп). Если кто-либо проводил подобные эксперименты, выскажите, пожалуйста, свое мнение! Может, мы что-то делаем не так? Отмечу, что год назад такие же результаты, противоречащие лит. данным, были получены другим человеком в нашем институте. Заранее благодарю за ответ! P.S. Также буду благодарна, если Вы посоветуете другие методы, быть может, более совершенные, для количественного определения аминогрупп на поверхности наночастиц.  С уважением, Дарья. |
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|
Шуша Пользователь Ранг: 2709 |
10.02.2008 // 10:36:59
А Вы случаем его не в воде растворяли? А то в воде он не "живет". |
|
Alex&Alex Пользователь Ранг: 47 |
10.02.2008 // 19:49:49
Редактировано 2 раз(а) Из вашего поста невозможно понять какой метод регистрации флуоресценции вы используете(мелкоскоп, флуориметр?), условия получения коньюгатов, условия эксперимента. Поэтому причин для наблюдения подобных "эффектов" может быть довольно много. Что до методов, то есть еще несколько флуоресцентных реагентов. Посмотрите ссылку Section 1.8 — Reagents for Analysis of Low Molecular Weight Amines на сайте Invitrogen.com: probes.invitrogen.com/handbook/sections/0108.html Среди них и мои любимые эозин и флуоресцеин изотиоцианаты, можно малеимиды. Только они и сами по себе светятся. Но при свяывании с какими-либо макромолекулами может происходить изменение квантового выхода флуоресценции и спектральный сдвиг. По ним тоже можно инфу получать о процессе, правда, нужно какую-нить модель использовать. Кстати, флурескамин (свободный) в воде все же живет и светит, хотя и недолго. Ну, а то что не светит - может быть результатом, кроме всего прочего, тушения: перенос энергии, например, или эффект тяжелого атома. К чему вы свой краситель шьете? Если мона поподробнее, что за весчь?. Кстати. контроль с каким-нить альбумином, или аланином на худой конец, делали? Другой момент в ваших исследованиях - если количество групп на отдельных наночастицах различно и более одной. Будет иметь место распределение аминогрупп по частицам и тада надо бы знать форму и ширину этого распределения. Иначе далеко можно зайти в интерпретации результатов. |
|
Soleil Пользователь Ранг: 2 |
10.02.2008 // 22:28:25
Редактировано 2 раз(а) Сам раствор флуорескамина готовили в ацетоне. Флуоресценцию регистрировали на флуориметре. Методика следующая: к 375 мкл образца добавляли 1500 мкл боратного буфера, а затем – 625 мкл р-ра флуорескамина в ацетоне (3 мг/мл). Инкубировали при комнатной температуре в темноте в течение нескольких минут. С боратным буфером, кстати, были проблемы: его готовили по стандартной методике, но почему-то не вся бура растворилась…  Пока оставили так, как есть. pH≈7.0. Образец, самый важный для нас, - это водная дисперсия наночастиц с заключенным в них доксорубицином. Определяем количество аминогрупп доксорубицина, включенных наночастицы из БЭС (бересты экстракт сухой). Доксорубицин – противораковый препарат, название по номенклатуре ИЮПАК - (8S-цис)-10-[(3-Амино-2,3,6-тридезокси-альфа-L-ликсогексо-пиранозил)окси]-7,8,9,10-тетрагидро-6,8,11-тригидрокси-8-(гидроксиацетил)-1-метокси-5,12-нафтацендион (в виде гидрохлорида). Контроль с аланином делали: тогда результаты были объяснимые, интенсивность флуоресценции увеличивалась пропорционально концентрации аминокислоты. А с доксом все наоборот… Насчет «количества групп на отдельных наночастицах»: именно это мы и хотим определить! Кстати, спасибо за ссылку!P.S. Интересно, Вы говорите, что и "свободный" ФК светит?! Можно об этом поподробнее, пожалуйста?
|
|
Alex&Alex Пользователь Ранг: 47 |
10.02.2008 // 23:47:51
Насчет "светит" - эт я погорячился. Сорри, прочитал лишь часть текста: "Excess reagent is rapidly converted to a nonfluorescent product by reaction with water". Из того и сделал выводы...А когда прочитал все внимательнее, то написано, что "intrinsically nonfluorescent". Ну, эт лирика. Тем не менее, там же написано, что данный зонд обладает сине-зеленой флуоресценцией, т.е. близко к ультрафиолету. Когда посмотрел на ваш доксорубицин - система коньгированных циклов (да простят меня химики, ежели использую неточность в терминологии). Из этого вполне может следовать, что в вашем коньюгате вполне может происходить перенос возбуждения с ФК на ДР. Вообще надо посмотреть/поискать в статьях, может кто наблюдал подобный фефект в соединениях ДР с флуорофорами, не только с ФК. Кроме того недурно посмотреть не перекрываются (хотя вряд ли) спектры флуоресценции ФК со спектрами поглощения ваших наночастиц и ДР. А также то, как меняется спектр поглощения ФК при связывании с ДР и что получается в итоге, может какая новая полоса появляется в спектре поглощения (че-нить вроде комплекса с переносом заряда образуется). Да, и последнее, с какими оптическими плотностями образцов работаете? Фефект внутреннего фильтра не наблюдаете ли? (Если опт. пл-ть выше 0.1) |
|
Alex&Alex Пользователь Ранг: 47 |
11.02.2008 // 16:54:39
Да, еще упустил тот факт, что у вас наночастицы. Значит добавьте к своим проблемам светорассеяние. Но его тоже можно учесть. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 5 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
